合肥地區2 558例體檢女性HPV感染及亞型分布情況

吳丹丹，彭麗朵，喬金平，徐元宏

人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)是一種雙鏈DNA病毒，已鑒定的型別超過200種。HPV依據其引發疾病的惡性程度，分為高危型和低危型，低危型主要引起皮膚疣等良性病變，以6、11型最為多見[1]；而高危型的持續感染在宮頸癌、宮頸上皮內瘤變、宮頸小細胞神經內分泌癌等腫瘤的發展中起到了關鍵的作用[2-3]。

HPV在世界范圍內的感染具有普遍性，不同國家及地區的亞型分布各不相同[3-5]。高危型在西方國家主要以16、18型最為常見，亞洲國家則以16、18、52和58型常見。目前接種HPV疫苗是一種有效降低患宮頸癌風險的方式，國外已上市的疫苗有二價、四價和九價3種，國產的疫苗尚未上市，目前已鑒定的高危型有10余種型別[6]。該研究通過對合肥地區常規體檢女性的宮頸脫落細胞進行HPV 基因分型檢測，分析普通體檢人群HPV特別是高危型的感染情況和基因型分布特點，以期為合肥地區人群在HPV疫苗的選擇上提供指導，同時也為針對我國人群感染特點的國產HPV疫苗的開發提供一定的理論依據。

1 材料與方法

1.1實驗材料

1.1.1研究對象 選取2016年1月1日～2017年12月31日在安徽醫科大學第一附屬醫院體檢中心常規體檢的2 558位女性，年齡22～84(42.55±9.99)歲。

1.1.2標本采集與保存 以無菌拭子采集宮頸分泌物，將拭子頭部放入脫落細胞保存液中，2 h內送檢。采集的標本若不能及時前處理，應置于-20 ℃ 保存。

1.1.3試劑與儀器 HPV27型核酸分型檢測試劑盒(流式熒光法，包括核酸擴增組份、雜交組份、脫落細胞保存液、核酸提取試劑)、基因擴增儀購自上海透景公司；金屬浴、冷凍離心機購自德國Eppendorf公司；Luminex200 多功能流式點陣儀購自美國Luminex公司。

1.2實驗方法

1.2.1核酸提取 將采集好的標本渦旋混勻，取200 μl標本至1.5 ml離心管，12 000 r/min離心1 min，棄上清液，向沉淀物中加入200 μl核酸提取試劑，渦旋混勻，100 ℃ 煮沸15 min，15 000 r/min離心5 min，即可得到熱裂解法提取的核酸，所得核酸將用于下一步實驗或于-20 ℃ 中保存待用。

1.2.2多重PCR 依據說明書進行多重PCR。PCR反應體系含引物混合液5 μl、PCR預混液10 μl、Taq酶0.8 μl和DNA模板5 μl。 反應條件為95 ℃、5 min; 95 ℃、30 s，58 ℃、30 s，72 ℃、30 s,5個循環;95 ℃ 、30 s，55 ℃、30 s，72 ℃、30 s, 35個循環;72 ℃、 3 min，4 ℃ 維持，即可得到擴增的PCR產物。

1.2.3雜交和上機檢測 依據說明書進行微球與PCR產物的雜交。反應體系為微球雜交液22 μl，PCR產物3 μl。反應條件為95 ℃、5 min,48 ℃、 30 min。此步反應完成后，加入75 μl 鏈霉親和素-藻紅蛋白(SA-PE)，48 ℃、 15 min，即可得到雜交產物。再使用Luminex 200(需48 ℃ 預熱)進行雜交產物的檢測。

1.3統計學處理采用SPSS 24.0軟件進行分析，資料以頻數及頻率表示，采用χ2檢驗，以α=0.05為檢驗水準，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1HPV感染率檢測2 558例常規體檢標本，主要人群分布為22～84歲女性。其中陽性樣本397例，陽性率為15.52% (397/2 558)，樣本被分為4個年齡段，結果見表1。經χ2檢驗，各年齡段之間，總陽性率(χ2=3.624，P=0.305)，高危型陽性率(χ2=1.975，P=0.578)，低危型陽性率(χ2=4.507，P=0.212)，差異無統計學意義。不同年齡段單重感染和多重感染分布情況見表2，各年齡段的感染率隨同時感染型別的個數增加而減少，以單一感染最高 (12.28%)，五重感染最低 (0.04%)。

表1 HPV感染與年齡分布

1部分體檢者為多重感染，故高危型例數與低危型例數之和大于陽性人數

表2 HPV單一感染與多重感染在不同年齡段分布情況 [n(%)]

1該陽性率為此感染人數與該年齡段檢測總人數比值

觀察各感染組年齡分布，單重、二重、四重感染的感染高峰年齡均為>50歲組，而三重和五重的感染高峰年齡為21～30歲組。

2.2HPV27種亞型感染率2 558例標本中共檢測出26種型別(除26型外)。低危型別的檢出率為6.61% (169/2 558)，高危型別為13.02% (333/2 558)。高危型和低危型所占總陽性型別例數的比例分別為66.33% (333/502)和33.67% (169/502)。由表3可知，高危型中52 (9.76%)、16 (9.16%)、58 (6.77%)和53 (5.98%)為優勢亞型；低危型中，61 (6.77%)、81 (5.78%)、55 (5.38%)和43 (4.98%)為優勢亞型。

表3 合肥地區女性HPV各亞型陽性分布比例

1部分體檢者為多重感染，故HPV型別例數 (502)之和大于陽性人數 (393)

表4為不同年齡優勢亞型的分布情況，21～30歲組中，16、43和52等亞型常見，31～40歲組以16、52、61和58亞型常見，41～50歲組以 16、52、53和58亞型常見，大于50歲組以52、61和53亞型常見。據表中數據可推斷，30歲以下女性主要感染亞型為16；30～50歲女性16和52均為最常見亞型；而50歲以上女性，則以52為主要感染亞型。

表4 不同年齡組HPV感染的優勢亞型分布

3 討論

宮頸癌是女性好發的第二位惡性腫瘤，研究[3]表明高危型可直接引起浸潤性宮頸癌。HPV基因型分布受種族和地區的影響較大，進行不同地區的HPV年齡和亞型分布研究對HPV的流行病學及疫苗接種有重要意義。現有的合肥地區的HPV感染分布資料主要以門診及住院就診患者為主，且樣本量較低，反映普通人群中的分布情況有所欠缺。而多數HPV感染是亞臨床和隱匿性的，本研究對象為常規體檢人群，主要探討合肥地區的HPV亞型分布和年齡分布。結果顯示合肥地區HPV基因亞型中陽性比例最高的高危型分別是52 (9.76%)、16 (9.16%)、58 (6.77%)和53型 (5.98%)，比例最高的低危型分別是61 (6.77%)、81 (5.78%)、55 (5.38%)和43 (4.98%)型。感染的總陽性率隨年齡段依次遞增，且以一種或兩種型別感染最為常見。

與其他地區相比，合肥地區的感染既有相似點也有不同點。其一，高危型感染率較高的基因型別與國內大部分地區相同，主要以16、52和58型最為多見[7]。低危型別中，合肥地區以61型 (6.77%)陽性率最高，這個和成都地區相似[8]，而其他地區的研究由于使用的分型試劑盒不包括61型，所以其他地區缺乏此型別的數據。本研究數據顯示，合肥地區16型(1.94%)的感染偏向20～30歲女性，>50歲女性則主要以52型(2.17%)感染為主；而30～50歲女性人群中16型和52型陽性率相同 (1.95%，33/1 690)，而現有研究[9]表明52型亦可引起宮內病變，如子宮內膜癌和子宮肌瘤等；因此本地區30歲以上女性在患有相關疾病時應注意檢查是否有52型的感染；反之亦然，對確定有52型感染的女性，也應注意是否患有相關疾病。其二，HPV的年齡分布，其他地區感染陽性率大多有兩個年齡高峰[ (南京，30～39歲、50～59歲)、 (蘇州，<20歲、>50歲)、 (珠海，<21歲、>50歲)][10-12]，而本研究HPV常規體檢人群缺乏22歲及以下人群的數據，所以可能缺乏第一個年齡高峰的數據。而在22歲以上人群中，合肥地區女性HPV感染陽性率隨著年齡增長而增高，>50歲為感染高峰年齡，這一點和其他地區是相似的。50歲以上女性可能因其處于絕經后雌激素水平紊亂和免疫力下降的階段，更容易被HPV病毒感染[10]，從而呈現較高的感染率，因此，本地區50歲以上女性更需要重視HPV感染和宮頸癌的篩查。

由于缺少抗HPV病毒的有效藥物，HPV更多依靠接種疫苗來預防感染。國際上現有的HPV疫苗主要有3種類型：二價 (16、18)、四價 (6、11、16、18)和九價 (6、11、16、18、31、3、45、52、58)[6]。國內已引進的二價及四價疫苗并未覆蓋亞洲地區高發的52和58兩型，而合肥地區更是以52型為高感染率型別，大多數年齡段的女性都被發現有此型別的感染。因此覆蓋了52、58型的九價疫苗可能更適合本地區未感染HPV病毒的女性人群；雖然有報道[13]稱二價疫苗在避免16、18型感染的同時，還可為31、45型提供有限的交叉保護。

綜上所述，本研究通過統計分析合肥地區體檢女性人群的HPV感染及基因型別分布特點，對研究HPV感染的流行病學和宮頸癌的預防等提供一定的理論依據，尤其對本地區女性人群HPV疫苗接種有一定的指導意義。