江蘇部分地區農村婦女宮頸分泌物中衣原體及HPV檢測

[摘要] 目的 結合計劃生育技術服務提供宮頸分泌物中沙眼衣原體(CT)、人乳頭狀瘤病毒(HPV)檢測服務，了解農村婦女生殖道CT、HPV感染的情況。方法 采用聚合酶鏈反應(PCR)檢測226例已婚農村婦女宮頸分泌物中CT、HPV DNA。結果226例檢測對象中CT陽性檢出率為21.2%，HPV陽性檢出率為14.2%，CT及HPV均陽性檢出率為4.0%。80%以上的CT、HPV感染者陰道、宮頸無臨床癥狀表現。結論對有性生活，特別是生活在農村的婦女提供常規的宮頸涂片檢查、CT和HPV檢測服務，有助于提高農村婦女的生殖健康水平。

[關鍵詞] 衣原體;人乳頭狀病毒;聚合酶鏈反應;生殖健康

[中圖分類號] R797.2[文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701(2009)34-113-02

生殖道感染(reproductive track infection，RTI)在婦科疾病中位居首位。引起女性生殖道感染的常見病原體有淋球菌(neisseria gonorrhoeae，NG)、沙眼衣原體(chlamydia trachomatis，CT)、解脲脲原體(M. urealyticum，UU)、人乳頭狀瘤病毒(human papillo- mavirus，HPV)和人巨細胞病毒(cytomegalovirus，CMV)，其中CT、HPV的感染和女性子宮頸癌的發生有關。有研究[1]顯示，96.6%的子宮頸癌患者的標本中檢出HPV，CT可與HPV協同誘發宮頸瘤變[2，3]。RTI感染綜合防治是目前計劃生育技術服務機構開展的一項生殖保健服務項目，利用現有的計劃生育技術服務網絡，結合計劃生育技術服務，指導和開展婦女生殖道感染相關病原體檢測服務，對提高婦女的生殖健康水平、維護婦女的健康權益尤為重要。

1材料與方法

1.1研究對象

2007年9月～2007年10月在提供計劃生育技術服務的過程中，對年齡相近、文化程度、經濟水平相似，居住同一地區的已婚婦女226人的宮頸分泌物進行CT及HPV DNA檢測。

1.2研究方法

1.2.1標本處理宮頸分泌物棉拭子于1.5mL生理鹽水中洗滌片刻，15000rpm離心10min，棄上清，沉淀中加入40μL裂解液和2μL 10mg/mL蛋白酶K，攪勻后45℃水浴作用1h，稍后離心再100℃沸水浴5min，最后10000rpm離心2min，上清液作為模板DNA待檢。

1.2.2CT PCR檢測方法在0.5mL無菌離心管中加入PCR反應混合物25μL，反應體系的終濃度為10mmol/L Tris-HCl (pH 8.3)，50mmol/L KCl，0.01%明膠，0.1% TritonX-100，1.5mmol/L MgCl2，各200μmol/L的dNTPs，各2μmol/L引物T1、T2，再加入Taq DNA聚合酶1U，模板DNA 5μL，混勻后離心數秒，加無菌液體石蠟30μL，按下列程序擴增:94℃×3min預變性，94℃×60s-50℃×60s-72℃×60s，72℃×2min延伸，共35次循環。反應液中加入1μL溴酚藍終止反應。

1.2.3CT測定向擴增產物中加入5μL上樣液，混勻后取15μL加樣于2%瓊脂糖凝膠板上，60V恒壓電泳30min后，在紫外光下可觀察到一條517bp的清晰的DNA片段，即為陽性。

1.2.4HPV PCR檢測方法在0.5mL無菌離心管中加入PCR反應混合物20μL，再加入Taq DNA聚合酶1U，模板DNA 4μL，混勻后離心數秒，加無菌液體石蠟40μL，按下列程序擴增:94℃×2min預變性，94℃×30s-55℃×30s-72℃×60s延伸，共35次循環。反應液中加入1μL溴酚藍終止反應。

1.2.5HPV測定取15μL反應液，加樣于2%瓊脂糖凝膠板上，5V/cm，恒壓電泳30min后，在紫外光下觀察結果，如407~412bp處出現橙黃色條帶，則HPV為陽性。HPV-6，11，33型陽性產物為407bp;HPV-16，18型陽性產物為412bp。

2結果

2.1研究對象基本情況

226例婦女平均年齡為(44.56±3.13)歲，初潮年齡為(16.70 ±1.83)歲，妊娠數為(1.77±0.80)次，活產數為(1.10±0.33)例，人流數為(0.63±0.76)次。

2.2CT及HPV檢出率

受檢者中CT陽性檢出率為21.2%，HPV陽性檢出率為14.2%，CT及HPV均陽性檢出率為4.0%。

2.3CT、HPV陽性對象生殖健康狀況

CT陽性對象中陰道異常的比例為8.3%，宮頸異常為12.5%;HPV陽性對象中陰道異常的比例為9.4%，宮頸異常的比例為18.8%。CT及HPV均陽性對象中陰道及宮頸異常的比例均為11.1%。見表1。

3討論

泌尿生殖道CT感染是世界范圍內最常見的性傳播疾病之一，近年來CT感染率不斷上升，在許多國家CT引發的STDs位居STD的首位，已超過了淋病和梅毒。在女性生殖道，CT感染多首發于宮頸，進而沿柱狀上皮上行導致子宮內膜炎、輸卵管炎、盆腔炎[4]，反復持續感染造成盆腔粘連、輸卵管積水、梗阻導致不孕。Bell報道[5]，經陰道分娩及剖宮產，新生兒感染CT的陽性率為52.8%和25%，出現胎膜早破后，即使剖宮分娩，新生兒也有感染CT的風險。孕婦感染后，可導致絨毛膜羊膜炎、流產、早產、死胎和胎膜早破等不良妊娠結局[6，7]。CT生殖道感染潛伏期長，泌尿生殖系感染后l～3周才出現臨床癥狀，而且約有50%的被感染男性和約70%的被感染女性不出現任何的臨床表現。國內外報道一般女性生殖道CT的感染率在3.7%～23.19%，以16～20歲組最高，無癥狀者占6.06%～50.60%。孔棟玲[8]的研究表明受檢者的CT感染率為18.65%，無癥狀占68.85%。

在自然人群中，HPV感染率從低于1%到高達50%，在性活躍人群中20%～80%以上的人有HPV感染史。HPV感染可發生于各種年齡，從初生的嬰兒到80歲以上年齡者均有HPV感染的報道[9]。郭廣洲等[10]對深圳某銀行系統1276名女性員工共檢出HPV陽性者94例，陽性率為7.37%，在被測的23個HPV亞型中，18個與宮頸癌密切相關的高危亞型HPV陽性率為6.35%，5個低危型HPV陽性率為1.02%。趙超等[11]對北京市795名20～54歲有性生活婦女進行篩查，高危型HPV感染陽性112例，占14.1%;陰性683例，占85.9%。子宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤之一，也是發展中國家最常見的癌癥。最近的全球資料顯示，在全世界婦女中，每年的新發病例數近50萬，其中80%病例發生在發展中國家。我國每年新發病例13.15萬，約占世界宮頸癌新發病例的30%左右，近年來，宮頸癌的發病正呈現一種年輕化趨勢。以往關于宮頸癌的研究提示發病與多種因素有關，如人乳頭瘤病毒(HPV)感染、多產、初產年齡、性行為、經濟狀況、吸煙、長期使用口服避孕藥等。另外的研究也證實CT能協同HPV誘發宮頸癌的發生[1]。

本資料是在提供計劃生育技術服務的過程中，結合生殖道感染防治服務，對部分農村女性的宮頸分泌物進行CT及HPV的檢測，研究對象中CT及高危HPV的檢出率與其他報道相似，分別為21.2%及14.2%，說明江蘇農村婦女生殖道CT與HPV的感染與其他地區的婦女感染相似。研究中也發現CT及HPV感染者中陰道及宮頸異常的比例較低，感染無癥狀者在陰道發現為異常的大于90%，宮頸未見異常的大于81%。由于CT、HPV感染危害性的存在，需要加強對CT、HPV陽性人群的實驗室監測與隨訪，及早預防和減少因CT、HPV感染而致的疾病發生。因此，在計劃生育日常隨訪服務中，衛生技術人員應該對有性生活婦女提供常規的實驗室檢查和臨床觀察，提高婦女的生殖健康水平，維護婦女的健康權益。

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(收稿日期:2009-10-12)