RP—HPLC法測(cè)定感冒止咳糖漿中綠原酸的含量

摘要：目的：建立測(cè)定感冒止咳糖漿中綠原酸含量的HPLC方法。方法：色譜柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C₁₈(150mm×4.6mm，5tan)柱；流動(dòng)相：甲醇—水—冰醋酸(20:80:1)；流速：1.0mL·min^-1；檢測(cè)波長：327nm。結(jié)果：綠原酸在0.077～0，387mg·mL^-1。范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r＝0.9999)，平均回收率為99.8％(n＝6)，RSD＝0.34％。結(jié)論：本法操作簡單、靈敏、準(zhǔn)確，可用于感冒止咳糖漿的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：RP-HPLC；感冒止咳糖漿；綠原酸；含量測(cè)定

中圖分類號(hào)：R927.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1007--2349(2009)09--0065--02

感冒止咳糖漿有清熱解毒，止咳化痰的功效。可用于感冒或流感發(fā)熱，頭痛等癥。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于衛(wèi)生部頒標(biāo)準(zhǔn)第三冊(cè)。方中金銀花有清熱解毒的作用，其中的抗菌主要有效成分綠原酸標(biāo)準(zhǔn)中未進(jìn)行定量控制，本研究采用高效液相法對(duì)感冒止咳糖漿中綠原酸進(jìn)行含量測(cè)定，試驗(yàn)結(jié)果表明所建的方法簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，可行，為更好確保藥品的質(zhì)量提供了可靠的檢測(cè)依據(jù)。

1 儀器與試藥

美國Agilent1100高效液相色譜儀，紫外檢測(cè)器，塞多利斯電子天平BP211D(德國)。甲醇(色譜純，F(xiàn)isher，USA)，冰醋酸(分析純)，去離子水。綠原酸對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110753--200212)，感冒止咳糖漿(均購自云南各大藥店)。

2 方法與結(jié)果

2，1色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜柱：Agilent ZORB-AX Eclipse XDB-C₁₈(150mm×4.6mm，5μm)柱；流動(dòng)相：甲醇一水一冰醋酸(20:80:1)；流速：1.0mL·min^-1；檢測(cè)波長：327 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL；理論塔板數(shù)以綠原酸計(jì)大于5000；在此條件下綠原酸和樣品中其他物質(zhì)可以得到良好的分離，分離度2＞2.5，陰性樣品無干擾。見圖1。

2，2對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備

精密稱取綠原酸對(duì)照品15.47mg，置10mL量瓶中，加50％甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得1.547 mg·mL^-1對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2，3供試品溶液的制備精密量取樣品2mL，置50mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，過濾，即得。

2，4陰性樣品溶液按樣品處方比例制備不含金銀花的陰性樣品溶液，照上述供試品溶液的制備方法制成陰性樣品溶液。2，5線性關(guān)系的考察精密吸取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液0，5，1.0，1.5，2.0，2.5mL于10mL量瓶中，用50％甲醇溶液配成濃度為0.077，0.155，0.232，0.310，0.387 mg·mL^-1的對(duì)照品溶液，搖勻；分別吸取上述5份對(duì)照品溶液10μL進(jìn)樣，按“2.1，，色譜條件測(cè)定，以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)(x)，峰面積為縱坐標(biāo)(y)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：y=30905x—79(r＝0.9999)。結(jié)果表明綠原酸在0.077～0.387 mg·mL^-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2，6精密度試驗(yàn)取上述“2.5”項(xiàng)對(duì)照品溶液系列中濃度為0.232 mg·mL¹⁸-1的溶液按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，RSD=0.32％(n=6)。

2，7重復(fù)性試驗(yàn)取上述供試品溶液，按“2.1”色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定其峰面積，并計(jì)算樣品溶液中綠原酸的含量，綠原酸平均含量為0.355mg·mL^{-1(n＝6)，其RSD為0.37％。}

2，8加樣回收率試驗(yàn)精密稱取已知含量樣品(含量：0.355mg·mL^{-1)6份，分別精密加含綠原酸0.155mg·mL_-1。的對(duì)照品溶液2mL，按“2.3”項(xiàng)下方法制成所需溶液，在“2.1”色譜條件下進(jìn)行含量測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。}

2，9樣品測(cè)定取不同批號(hào)(4批)樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備所需的供試品溶液，在“2.1”色譜條件下，測(cè)定其峰面積(每批平行測(cè)定3份)，樣品中綠原酸的含量，結(jié)果見表2。

3 小結(jié)

根據(jù)對(duì)綠原酸對(duì)照品掃描結(jié)果在327nm處有最大吸收，因此選擇327nm波長測(cè)定。試驗(yàn)過程中曾比較不同流動(dòng)相甲醇一水一冰醋酸(20:80:1)，乙腈—0.4％磷酸溶液(13:87)(2005版中國藥典條件)，結(jié)果證明采用甲醇一水一冰醋酸(20:80:1)作為流動(dòng)相的樣品分離度及理論板數(shù)更好。