白果內(nèi)酯——銀杏葉制劑有效成分研究現(xiàn)狀

中圖分類號：R97 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號：1006-1533(2008)08-0365-03

白果內(nèi)酯是從銀杏葉中提取而得的萜類內(nèi)酯的有效部位，是傳統(tǒng)的銀杏葉提取物的重要活性成分，對拮抗血小板活化因子作用較弱，但對神經(jīng)系統(tǒng)有保護(hù)作用［1］。近年研究表明，白果內(nèi)酯在促進(jìn)神經(jīng)生長，防止腦、脊髓神經(jīng)脫髓鞘以及營養(yǎng)神經(jīng)、保護(hù)神經(jīng)等方面發(fā)揮著重要作用［2］。

但2005年版《中華人民共和國藥典》（一部）以及國家食品藥品監(jiān)督管理局WS-096（Z-016）-2004（Z）中，僅對銀杏葉制劑中萜類內(nèi)酯的總量有限制，而對白果內(nèi)酯的含量沒有明確的要求，導(dǎo)致市場所售銀杏葉制劑中白果內(nèi)酯含量參差不齊。而國際上一般將銀杏葉提取物產(chǎn)品的生產(chǎn)歷程劃分為4個(gè)時(shí)代［3］，對第4代明確要求嚴(yán)格標(biāo)示白果內(nèi)酯及銀杏內(nèi)酯的含量。

有關(guān)研究表明，影響內(nèi)酯類成分的主要因素有產(chǎn)地、采葉時(shí)間、加工方式等［4］。因此，通過控制銀杏葉產(chǎn)地、采摘時(shí)間及加工方式等可提高銀杏葉制劑中白果內(nèi)酯含量。本文就白果內(nèi)酯的作用機(jī)制、質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)及含量影響因素作一綜述。

1 白果內(nèi)酯神經(jīng)保護(hù)機(jī)制

1.1 白果內(nèi)酯保護(hù)線粒體功能

Janssens等［5］認(rèn)為，白果內(nèi)酯可抑制缺氧引起的血管內(nèi)皮細(xì)胞中三磷酸腺苷( adenosine triphosphateoe，ATP)含量的降低，這一作用可能與細(xì)胞呼吸功能增強(qiáng)有關(guān)，體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，大鼠口服白果內(nèi)酯增加了從肝分離出來的線粒體的呼吸控制率(respiratorg control ratio，RCR)。由此可推斷，由于局部缺血可發(fā)生氧化磷酸化(0XPH0S)的解偶聯(lián)作用，白果內(nèi)酯能抵抗缺氧引起的ATP降低，只要存在氧氣，就能保存線粒體，重新生成ATP。從采用白果內(nèi)酯處理大鼠體內(nèi)分離出來的線粒體，可以進(jìn)一步觀察到，這一類萜可保護(hù)線粒體免于安米妥引起的(OXPHOS的)復(fù)合物I的抑制，以及抗霉素A或粘噻唑引起的復(fù)合物III的抑制。 

1.2 白果內(nèi)酯與細(xì)胞存活

Ahlemeyer等［6］發(fā)現(xiàn)，采用白果內(nèi)酯(1μM)、銀杏內(nèi)酯B(10 μM)和銀杏內(nèi)酯J(100μM)，可將因24 h失血清凋亡小雞胚胎神經(jīng)元上升現(xiàn)象降低到控制水平。白果內(nèi)酯(10 μM)還能將小雞神經(jīng)元星形孢菌素處理12 h引起的凋亡損傷降低到接近控制水平。在取自新生大鼠海馬的神經(jīng)元和星形細(xì)胞的混合培養(yǎng)物中，總提取物(EGb 761；100 mg/L)和白果內(nèi)酯(100 μM)使神經(jīng)元免于因血清缺失而引起的凋亡，白果內(nèi)酯(100 μM)和銀杏內(nèi)酯B(100 μM)降低了星形孢菌素引起的凋亡損傷。研究人員認(rèn)為，EGb 76l具有抗凋亡活性，白果內(nèi)酯是其最有效的成分。

1.3 白果內(nèi)酯和基因表達(dá)

Chandrasekaran等［7］以神經(jīng)生長因子鑒別的大鼠PC12細(xì)胞的形態(tài)變體加以研究，結(jié)果表明，在培養(yǎng)介質(zhì)中加入白果內(nèi)酯 (15.3或30.6 μM) 而不是銀杏內(nèi)酯B(11.8或23.6 μM)，將細(xì)胞色素C氧化酶的線粒體DNA(mtDNA)編碼的COX III亞單位提高了2倍。

有關(guān)NO合成酶(NOS)異構(gòu)體和N0的產(chǎn)生，Cheung等人［8］研究表明，白果內(nèi)酯(0.8～3 μM)抑制了誘導(dǎo)性酶在人體THP-1 巨噬細(xì)胞中催化產(chǎn)生NO，但不是通過內(nèi)皮型一氧化氮合酶在人體內(nèi)皮細(xì)胞中產(chǎn)生NO。

此外，白果內(nèi)酯還能增加大鼠星形細(xì)胞中膠質(zhì)細(xì)胞源性的神經(jīng)營養(yǎng)因子和血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)［9］。

2 國內(nèi)含量控制標(biāo)準(zhǔn)

2.1 國內(nèi)含量控制標(biāo)準(zhǔn)

2005年版《中華人民共和國藥典》（一部）：本品（銀杏葉片）含萜類內(nèi)酯以銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C和白果內(nèi)酯的總量計(jì)，不得少于0.25% 。

國家食品藥品監(jiān)督管理局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS-096（Z-016）-2004（Z）：本品（銀杏葉膠囊）每粒含萜類內(nèi)酯以白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C的含量之和計(jì)，不得少于2.4 mg 。

2.2 國外含量控制標(biāo)準(zhǔn)

國際上，一般將銀杏葉提取物產(chǎn)品的生產(chǎn)歷程劃分為4個(gè)時(shí)代：第1代只標(biāo)定銀杏葉提取物的含量；第2代除了標(biāo)定銀杏葉提取物的含量以外，還標(biāo)定了提取物中黃酮苷的含量；第3代則在第2代的基礎(chǔ)上又增加了內(nèi)酯含量的標(biāo)定；第4代明確指出要嚴(yán)格標(biāo)示銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C及白果內(nèi)酯的含量。當(dāng)前對銀杏葉提取物產(chǎn)品的質(zhì)量要求為：含黃酮苷22%～24%或以上，含萜類內(nèi)酯2.5%～4.5%或以上，其中含白果內(nèi)酯2.0%～4.0%或以上，含銀杏酸10 mg/kg以下。

3 市售銀杏葉制劑白果內(nèi)酯含量

3.1 銀杏葉口服制劑有效成分質(zhì)量評價(jià)研究

趙榮生、嚴(yán)寶霞等［10］受北京市藥學(xué)會(huì)委托，為考察上市后的產(chǎn)品質(zhì)量，按國家藥品標(biāo)準(zhǔn)，采用HPLC方法對4廠家各3個(gè)批次銀杏葉口服制劑的含量進(jìn)行測定，以銀杏葉制劑中銀杏總黃酮醇苷和銀杏萜類內(nèi)酯的含量為評價(jià)指標(biāo)，結(jié)果顯示：各廠家的銀杏葉制劑中白果內(nèi)酯及銀杏內(nèi)酯A、B、C這4種萜類內(nèi)酯的含量都不一樣，其中D廠有2個(gè)批次未檢出白果內(nèi)酯。 

3.2 市售銀杏葉提取物制劑產(chǎn)品分析報(bào)告

中國科學(xué)院上海藥物研究所采用HPLC外標(biāo)法對部分市售銀杏葉提取物制劑有效成分以及控制成分的含量進(jìn)行了定量分析，結(jié)果見表1。

3.3 百路達(dá)銀杏葉膠囊產(chǎn)品分析報(bào)告

上海信誼百路達(dá)藥業(yè)有限公司 采用HPLC外標(biāo)法對本單位部分銀杏葉提取物制劑有效成分以及控制成分的含量進(jìn)行了定量分析，結(jié)果見表2。

4 影響白果內(nèi)酯含量的主要因素

4.1 銀杏葉生長環(huán)境

劉叔倩等［11］通過系統(tǒng)比較全國不同氣候的銀杏分布區(qū)銀杏葉中黃酮和萜內(nèi)酯含量， 發(fā)現(xiàn)不同氣候區(qū)之間銀杏葉中這兩類成分含量差異很大。空氣和土壤溫度對銀杏生長影響很大。銀杏生長季節(jié)的有效起點(diǎn)溫度為6~10 ℃，10 ℃以上才開始活躍，有效溫度的積累值為生物有效積溫。積溫和年均溫度，可作為銀杏對溫度要求的指數(shù)，以衡量銀杏在某地區(qū)能否栽植的標(biāo)準(zhǔn)。年平均氣溫為10 ℃是銀杏生長的低溫界線，小于10 ℃則生長不良甚至受凍而死亡。長江流域年均氣溫在10~22 ℃，而以年均氣溫15~16 ℃為最適宜地區(qū)。

4.2 銀杏葉樹株

一般認(rèn)為銀杏葉中黃酮和萜內(nèi)酯的含量: 幼齡樹> 老齡樹。

4.3 采摘時(shí)間

銀杏葉中黃酮類成分含量最高的月份， 分別報(bào)道為: 4～ 5 月， 9～ 11 月;萜類內(nèi)酯成分含量最高的月份， 分別報(bào)道為: 5月及8～ 10 月。所以各產(chǎn)地的銀杏葉最佳采收條件應(yīng)在分析測定后。

4.4 加工方式

銀杏葉中黃酮類和萜內(nèi)酯類的提取分離方法有: 有機(jī)溶劑萃取法，、樹脂法、酶法、超臨界CO2 萃取法和高速逆流色譜法等［11］。張立國等提出在乙醇-水體系中加入10% 對內(nèi)酯有較高溶解度的溶劑， 形成新的溶劑體系EPW ， 并用氮?dú)獗Ｗo(hù)提取， 使黃酮含量提高22% ， 內(nèi)酯含量提高33%。

5 結(jié)語

為保證銀杏葉制劑中所含白果內(nèi)酯的含量，確保產(chǎn)品的質(zhì)量及療效，上海信誼百路達(dá)藥業(yè)充分考慮光照、溫度、土壤、氣候、水質(zhì)等綜合因素，在生態(tài)島嶼——崇明島建立了6 000多畝銀杏種植基地；嚴(yán)格遵循GAP標(biāo)準(zhǔn)；確定采摘的最佳時(shí)間為每年的8～9月，并根據(jù)采樣檢測確定最佳的采摘日期；同時(shí)采用獨(dú)有的二次低溫大孔樹脂吸附法提取有效成分。

目前，百路達(dá)正在建立自己的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，并將指紋圖譜引入到其產(chǎn)品銀杏葉膠囊質(zhì)量評價(jià)體系中，以提高該產(chǎn)品在國際市場上的競爭力。

參考文獻(xiàn)

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10 趙榮生，嚴(yán)寶霞，翟所迪，等. 銀杏葉口服制劑有效成份質(zhì)量評價(jià)研究［J］.臨床藥物治療雜志，2003，1(3)，54-58.

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(收稿日期：2008-06-18)