酸性染料比色法測定百部養肺膏中總生物堿的含量

摘 要 目的：建立百部總生物堿的測定方法，測定百部及其制劑總生物堿的含量。方法：以鹽酸麻黃堿為對照品，采用酸性染料比色法，在波長414 nm處測定百部總生物堿含量。結果：在51.5～206 ng范圍內百部總生物堿的線性關系良好，回歸方程Y＝0.004 6X+0.038 4，相關系數r＝0.999 3(n=5);平均回收率為99.3 %（RSD＝1.0%）。 結論：該方法準確、可靠、重復性好，可作為百部及其制劑的質量控制標準。

關鍵詞 百部 生物堿 比色法 

中圖分類號：R92 文獻標識碼：B 文章編號：1006-1533(2008)07-0326-02

百部養肺膏是我院治療咳嗽的特色制劑，主藥百部為常用中藥，性味甘、苦、微溫，歸肺經，具有潤肺止咳、殺蟲滅虱的功效，可用于治療咳嗽、肺癆、百日咳、體虱、癬疥等。百部主要有效成分是其所含的多種百部生物堿，為有效地對該藥進行質量控制，筆者建立了百部的含量測定方法，以提高百部養肺膏中總生物堿的得率和含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器VIS-UV 2450型可見-紫外分光光度計(日本島津)；Sartorius BS124S型電子天平 (德國賽多利斯公司，1/萬)；BRANSONB5200S－DT超聲清洗儀 (必能信超聲上海有限公司)；梅特勒-托利多 DELTA320型 pH計 。

1.2 試劑與藥品

鹽酸麻黃堿對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：171242-200405)；溴甲酚綠(分析純，上海試劑三廠)；醋酸鈉、冰醋酸、正丁醇、甲醇等試劑均為分析純。6批百部養肺煎膏（本院制劑室生產，批號分別為060404，060608，060911，061124，070404，070530）；百部飲片3批（上海虹橋飲片廠提供，批號分別為060427，061101，070411）。

2 方法與結果

2.1 樣品供試液的制備

百部飲片：精密稱取通過60目篩的百部粉末0．5 g ，精密加入水飽和正丁醇40 mL，放置過夜，超聲20min，濾過，殘渣用少量水飽和正丁醇沖洗濾過，合并所有濾液，水浴蒸干，殘渣用甲醇溶解，轉移至5 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

百部養肺膏：精密稱取樣品5 g，加水10 mL及水飽和正丁醇40 mL，放置過夜，超聲20 min，離心，取上清液20 mL，減壓蒸干，殘渣用甲醇溶解，轉移至5 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取不含百部的百部養肺膏陰性空白樣品，同百部養肺膏供試品溶液制備法制得陰性對照供試品液。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取干燥至恒重的鹽酸麻黃堿對照品10 mg，置20 mL量瓶中，加水溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 溴甲酚綠溶液的配制

精密稱取溴甲酚綠0.05 g，加pH值5.4的醋酸鈉－醋酸緩沖液100 mL，搖勻，溶解，得0.05％溴甲酚綠緩沖溶液。

2.4 測定方法

精密吸取樣品液0.1 mL，置分液漏斗中，加水0.4 mL，0.05％溴甲酚綠緩沖液2 mL，氯仿10 mL，振搖1 min，靜置1 h后，分取氯仿液。同時取0.5 mL水，同法操作，所得氯仿液作為空白，在波長414 nm處測定吸光度。

2.5 最佳吸收波長的選擇

取按2.4項的方法制備的鹽酸麻黃堿對照品液、樣品供試液、陰性對照液、溶劑空白對照液的氯仿液，分別在 200～800 nm波長進行光譜掃描 ，顯示鹽酸麻黃堿對照品液和樣品供試液在波長414 nm處皆有最大吸收，而空白對照液則無吸收，不含百部的陰性對照供試品液亦無吸收，即空白液與陰性對照對生物堿的測定無干擾，故選擇414 nm波長作為測定波長。

2．6 線性關系考察

取 105 ℃干燥至恒重的鹽酸麻黃堿10.3 mg，精密稱定，置于20 mL容量瓶中 ，加水至刻度，搖勻，得濃度為0.515mg/mL的鹽酸麻黃堿溶液；分別精密量取上述溶液0.1、0.2、0.3、0.35、0.4 mL置分液漏斗中，各加水至0.5 mL，再依次精密加入0.05％溴甲酚綠溶液2 mL和氯仿10 mL，振搖1 min，靜置1 h，分別取氯仿液供測定用。同時取0.5 mL去離子水，同上述操作，將所得氯仿液作為空白。在波長414 nm處測定吸收度。以鹽酸麻黃堿的重量為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，進行回歸，得回歸方程為Y=0.004 6X+0.038 4；相關系數r=0.999 3(n=5)，表明鹽酸麻黃堿對照品在51.5～206 ng呈良好的線性關系。

2．7 樣品穩定性試驗

取樣品供試液在室溫下每隔0.5 h測定1次吸收度，結果表明1 h后吸收度基本穩定，連續測定6次，其吸收度RSD =0．1％ (n=6)。表明樣品供試液在1～3 h內穩定。

2．8 加樣回收試驗

精密稱取已知總生物堿含量的百部粉末0．2 g共6份，分別準確加入1.008 mg/mL鹽酸麻黃堿對照液4 mL，按2.1和2．4項制備樣品供試液和空白，在波長414 nm處測定吸光度，計算加樣回收率 。結果平均回收率為99.28％，RSD=1.00％(n=6)。

2.9 重復性試驗

取百部養肺膏（批號：061124）5 g，精密稱定共6份，按擬定的方法制備測定，結果平均含量為1.36 mg/g，RSD為1.51％。

2.10 百部及百部養肺膏總生物堿的含量測定

將3批不同來源的百部飲片和6批百部養肺膏分別精密稱取，按2．1和2.4項下方法分別制備樣品供試液及空白，在波長414 nm處分別測定其吸光度，按標準曲線法計算含量，結果見表1。

3 討論

百部的化學成分主要是具有復雜多環結構的生物堿，到目前為止已分離得到近60種［1］，其中的新對葉百部堿具有顯著的鎮咳作用［2］，但百部服用過量會降低呼吸中樞興奮性，導致呼吸中樞麻痹。用于治療呼吸道疾病，百部生物堿含量與百部鎮咳作用的相關性量效關系的研究未見報道，本文建立了測定百部總生物堿的方法，為進一步研究養肺膏中百部生物堿與鎮咳作用的相關量效關系提供依據。采用酸性染料比色法［3］，根據生物堿在一定的pH介質中與某些酸性染料定量的結合形成有色絡合物，用有機溶劑萃取有色絡合物，從而求得相對的總生物堿含量。因未能獲得符合含量測定用的百部生物堿對照品，故選用廉價、易得、具有國家標準可溯源的鹽酸麻黃堿作為測定總生物堿的對照品。通過最佳測定波長的選擇，本文方法所得的測定液百部生物堿與鹽酸麻黃堿均在414 nm處有最大吸收。

百部養肺膏使用的原料是生百部飲片，按表1依次編號的三批飲片分別為批號061124、070404、070530三批養肺煎膏的投料飲片，按處方折算，總生物堿的得率分別為27.4％、27.2%和30.9％。表明目前的制劑工藝對總生物堿的提取率基本穩定，同時可見，制劑過程中的加熱對總生物堿的提取有較大影響，養肺膏中的生物堿含量明顯低于藥材飲片中生物堿的含量。

取0.05％溴甲酚綠溶液1 mL、2 mL、3 mL、4 mL和5 mL對顯色劑用量進行考察，發現用0.05％酸性染料緩沖液2 mL進行顯色，已能保證本試驗條件下樣品中的生物堿充分反應，萃取進入氯仿中，氯仿液的吸收度值最高。

本文建立的測定方法對百部藥材和百部養肺煎膏均適用，結果準確可靠，重復性好。

參考文獻

1 張宏武，鄒忠梅，徐麗珍.中藥百部炮制歷史沿革及現代研究概況［J］.國外醫學中醫中藥分冊，2004，26（5）：265-270.

2 Greger.Structural relationship，distribution and biological activities of stemona alkaloids［J］.Planta Med，2006，72(2):99-113.

3 于超，張明，王宇等.栽培、野生及不同產地半夏總生物堿測定［J］.中國中藥雜志，2004，29（6）：583-584.

(收稿日期：2008-01-29)