濕毒清膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

　　摘　要：目的：對(duì)濕毒清膠囊進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。方法：采用薄層色譜法對(duì)黃芩和當(dāng)歸進(jìn)行鑒別。采用高效液相色譜法對(duì)苦參中苦參堿的含量進(jìn)行測(cè)定，色譜柱為PhenomenexHyper Clone 5u BDS C18 130A(250×4.60mm 5 micron)；流動(dòng)相為甲醇-0.02mol／L磷酸二氫鈉溶液(38：62)；流速為1.0ml·min^-1；檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm；柱濕為25℃。結(jié)果：苦參堿進(jìn)樣量在0.515～5.15μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，r=0.99993。平均回收率為99.34％，RSD=2.2％。結(jié)論：本方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可對(duì)濕毒清膠囊進(jìn)行質(zhì)量控制。
　　關(guān)鍵詞：濕毒清膠囊；薄層色譜法；高效液相色譜法；苦參堿
　　中圖分類號(hào)：R927．11　文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A
　　文章編號(hào)：1007-2349(2008)01-0036-02
　　
　　濕毒清膠囊是國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)品種，由地黃、當(dāng)歸、丹參、蟬蛻、苦參、白鮮皮、甘草、黃芩、土茯苓等九味中藥精制而成，具有養(yǎng)血潤(rùn)燥、化濕解毒、祛風(fēng)止癢的功效，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有土茯苓和黃芩的顯微鑒別以及苦參和甘草的薄層色譜鑒別，本研究對(duì)方中的黃芩和當(dāng)歸進(jìn)行薄層色譜鑒別。結(jié)果專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好；用高效液相色譜法對(duì)苦參中苦參堿的含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。
　　
　　1　儀器與試藥
　　
　　Agilent 1100LC高效液相色譜儀，G1311A四元泵，G1313A自動(dòng)進(jìn)樣器，G1316A柱溫箱，G1315BDAD檢測(cè)器，Agilent 1100化學(xué)工作站。
　　黃芩苷對(duì)照品、當(dāng)歸對(duì)照藥材、苦參堿對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；濕毒清膠囊為市售；甲醇為色譜純；水為雙蒸水；其他試劑均為分析純。
　　
　　2　方法與結(jié)果
　　
　　2．1　黃芩薄層色譜鑒別　取濕毒清膠囊內(nèi)容物2g，加甲醇20ml，超聲處理15min濾過，濾液蒸干。殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取供試品溶液5μl及對(duì)照品溶液10μ1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水(12：7：1.5：3)為展開劑．展開，取出，晾干，噴以1％三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，缺黃芩的陰性樣品無相同的斑點(diǎn)。
　　2．2　當(dāng)歸薄層色譜鑒別　取濕毒清膠囊內(nèi)容物1g，加乙醚20ml，超聲處理10min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴?ml使溶解，作為供試品溶液。另取當(dāng)歸對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(5：1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，缺當(dāng)歸的陰性樣品無相同的熒光斑點(diǎn)。
　　2．3　苦參堿含量測(cè)定
　　2．3．1　色譜條件　色譜柱：Phenomenex HyperClone 5uBDS C18 130A(250×4.60mm 5 micron)；流動(dòng)相：甲醇-0.02mol／L瞵酸二氫鈉溶液(38：62)；流速：1.0ml·min^-1：檢測(cè)波長(zhǎng)：220hm；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：10μ1。理論板數(shù)按J4oIbgNXghIp+IyvWFkSiw==苦參堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
　　
　　2．3．2　對(duì)照品溶液的制備取苦參堿對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
　　2．3．3　供試品溶液的制備取濕毒清膠囊內(nèi)容物1g，精密稱定，加氨水1ml使?jié)櫇?，再加氯?0ml，超聲提取30min，放冷，濾過，濾液蒸干，用氯仿一甲醇(7：3)少量溶解殘?jiān)?，上于中性氧化鋁柱上(內(nèi)徑1cm，2g，干法上柱)，用氯仿-甲醇(7：3)30ml，洗脫，洗脫液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓ㄈ萦?5ml量瓶中，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得。
　　2．3．4　測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，在上述色譜條件下測(cè)定。
　　2．3．5　空白試驗(yàn)　制備不含苦參的陰性樣品，按2．3．3供試品溶液的制備方法制備陰性樣品溶液，按2．3．4測(cè)定法測(cè)定，結(jié)果在液相色譜圖上，在苦參堿對(duì)照品保留時(shí)間相應(yīng)位置上無峰干擾，表明濕毒清膠囊的其它成份對(duì)苦參堿含量測(cè)定無干擾。
　　2．3．6　線性關(guān)系考察 配制濃度為1mg／ml的對(duì)照品溶液，取適量，加甲醇制成濃度0.05、O.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg／ml的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別精密吸取10μ1，注入液相色譜儀，測(cè)定色譜峰面積，以對(duì)照品濃度(mg／m1)為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程y=2864790x+7477，相關(guān)系數(shù)r=0.99993。結(jié)果表明，苦參堿進(jìn)樣量在0.515～5.15#g范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。
　　2．3．7　穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，每隔一定時(shí)間測(cè)定1次，其含量在24h內(nèi)基本不變，RSD為2.5％(n=6)，表明供試品溶液中苦參堿在24h內(nèi)測(cè)定基本穩(wěn)定。
　　2．3．8　精密度試驗(yàn)　精密吸取對(duì)照品溶液10μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定其峰面積，計(jì)算得RSD=0.8％(n=5)，結(jié)果顯示精密度良好。
　　2．3．9　重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批供試品按2．3．3供試品溶液的制備方法制備5份，分別依法測(cè)定其含量，平均值為1.75mg／g，RSD=3.1％(n=5)，表明本法重復(fù)性好。
　　2．3．10　加樣回收率試驗(yàn)　精密稱取已知含量的供試品0.5g(含量為1.75mg／g)，分別精密加入濃度為1.030mg／ml的對(duì)照品溶液0.8ml，按2．3．3供試品溶液的制備方法制備回收率實(shí)驗(yàn)液，測(cè)定含量，計(jì)算回收率，平均回收率為99.34％，RSD=2.2％(n=5)。結(jié)果表明，本法回收率良好。結(jié)果見表1。
　　2．3．11　供試品含量測(cè)定　取3批濕毒清膠囊，按2．3．3供試品溶液的制備方法制成供試品溶液，分別測(cè)定其苦參堿含量，用外標(biāo)法計(jì)算。3批供試品的含量分別為1.75mg／g、1.59mg／g、1.65rag／g(n=2)。
　　
　　3　討論
　　
　　3．1　提取時(shí)間考察 分別考察了超聲提取10min、30min和50min，結(jié)果表明，提取10min不完全，而提取30min和提取50min基本無差別，所以選擇超聲提取30min。
　　3．2　提取溶劑用量考察 分別考察了用氯仿20ml、50ml、80ml進(jìn)行提取的結(jié)果，結(jié)果表明，用20ml提取不完全，而用50ml和用80ml基本無差別，所以選擇用氯仿50ml進(jìn)行提