黑骨頭抗炎鎮痛作用的實驗研究

　　摘　要：目的：觀察黑骨頭乙醇提取物的抗炎鎮痛作用。方法：采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹、醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增加模型觀察黑骨頭的抗炎作用；采用熱板法、醋酸扭體法觀察黑骨頭的鎮痛作用。結果：黑骨頭可有效提高小鼠痛閾值(P＜0.01)和抑制小鼠醋酸扭體反應率(P＜0.05)；對二甲苯所致小鼠耳腫脹有顯著抑制作用(P＜0.01)；對醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性增加也有抑制作用(P＜0.05)。結論：黑骨頭具有較好的抗炎、鎮痛作用。
　　關鍵詞：黑骨頭；抗炎；鎮痛；實驗研究
　　中圖分類號：R285．5　文獻標識碼：A
　　文章編號：1007-2349(2008)01-0035-02
　　
　　黑骨頭(Periploca forrestii Schlechter)又名鐵骨頭、青蛇膽、達風藤、黑風藤等，常綠攀援藤本，根或全株入藥；有通經絡。祛風濕，消炎，活血等功效；用于治療風濕性關節炎，跌打損傷等。目前國內外尚未見其抗炎、鎮痛作用的報道。本研究觀察了黑骨頭乙醇提取物對小鼠的抗炎、鎮痛作用，現總結報告如下。
　　
　　
　　1　實驗材料
　　
　　1．1　藥物　實驗用黑骨頭，采集于楚雄永仁，由大理學院生藥學教研室馬曉匡教授鑒定。采后自然陰干，切碎。稱取6000g，用乙醇浸泡、濃縮得浸膏303g，即1g浸膏相當于19.80g生藥，臨用前取浸膏分別用水配制成低(0.175％)、中(0.350％)、高(0.700％)3個劑量組的黑骨頭混懸液，依次含生藥700mg，1400mg，2800mg；阿司匹林腸溶片(昆明云健制藥有限公司，批號：20070140)；冰醋酸(西安化學試劑廠，批號：901209)；伊文思藍(上海化學試劑采購供應站經銷行校辦廠分裝，批號：82-11-02)。
　　1．2　動物　昆明種小鼠．體重18～22g，雌雄各半，由四川省動物研究所提供，動物合格號：SCXK(川)2004-50。
　　1．3　儀器　722光柵分光光度計(上海生化儀器廠生產)；電熱恒溫水溫箱(上海醫療器械七廠；型號：HH-W21-Cu600)；電子天平[梅特勒一托利多儀器(上海)有限公司；型號：AL204-1C]；秒表(上海星鉆秒表有限公司)。
　　
　　2　實驗方法與結果
　　
　　2．1　鎮痛實驗
　　2．1．1　小鼠熱板法　實驗前篩選雌性小鼠。將其置于55±0.5℃的熱板上。以放置于熱板上至小鼠首次舔后足所需時間為該鼠的正常痛閾值。將痛閾值小于5s或．大于30s或跳躍的小鼠棄用。痛閾值合格(5～30s)的小鼠，再次測正常痛閾值，取2次測試結果平均值，作為該鼠給藥前痛閾值(2次測試問隔≥15min)。取合格小鼠50只，隨機分為5組：N.S組；阿司匹林組(150mg／kg)；黑骨頭低、中、高劑量組。各給藥組連續灌胃給藥7d，2次／d，阿司匹林為1次／d，給藥量均為0.2ml／10g，末次給藥15rain，30min，60min，90min后分別測定小鼠痛閾值1次，若60s仍無反應，將小鼠取出，其痛閾值以60s計算。結果見表1。
　　
　　實驗結果顯示，黑骨頭3個劑量組均有一定的提高小鼠痛閾值的作用，且峰值出現較快(15min)，持續15rain后開始下降。黑骨頭中劑量作用最為明顯(P＜0.01)且持續時間較長。
　　2．1．2　小鼠扭體法　取體重18～22g小鼠50只，雌雄各半，分組與給藥同2．1．1。末次給藥30min后，腹腔注射0.7％醋酸溶液0.1ml／10g，觀察小鼠在注射20min內因疼痛而產生扭體反應的次數(以腹腔內凹，伸展后肢，臀部抬高為標準)，計算扭體反應抑制率。扭體反應抑制率(％)=[(對照組平均扭體次數-給藥組平均扭體次數)÷對照組平均扭體次數]×100％。扭體反應抑制率小于25％為無鎮痛作用，在25％～40％為弱鎮痛作用，在40％～55％為中度鎮痛作用，大于55％為強鎮痛作用，結果見表2。
　　
　　結果顯示，黑骨頭高劑世具有抑制小鼠醋酸扭體反應的作用(P＜0.05)，其鎮痛率低于阿司匹林。
　　2．2　抗炎實驗
　　2．2．1小鼠二甲苯耳廓腫脹法　取體重18～22g小鼠50只，雌雄各半，分組與給藥同2．1．1。末次給藥30min后。各組小鼠右耳涂以二甲苯0.05ml／只斂炎，左耳對照。30min后處死動物，用直徑為7mm打孔器分別于左、右耳廓的對稱部位取下兩圓耳片，精確稱重。以左右耳片重量之差為腫脹度，計算腫脹抑制率，腫脹抑制率(％)=[(塒照組平均腫脹度一給藥組平均腫脹度)÷對照組平均腫脹度]×100％。結果見表3。
　　結果顯示，黑骨頭低、中、高劑量組均對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹有明顯抑制作用(P＜0.05，P＜0.01)，其抑制率均在50％以上，抑制率隨劑量的增大而增大。
　　2．2．2　對腹腔毛細血管通透性的影響　取體重18～22g小鼠50只，雌雄各半，分組與給藥同2．1．1。末次給藥30min后，鼠尾靜脈注射0.5％伊文思藍溶液0.1ml／10g，隨后立即腹腔注射0.7％冰醋酸溶液0.1ml／10g，30min后脫頸椎處死動物，用6ml生理鹽水洗滌腹腔，收集全部腹腔液于試管中，3000r／min離心15min，取上清液于590nm波長下比色，測定光密度。計算抑制率(％)=[(對照組平均光密度一給藥組平均光密度)÷對照組平均光密度]×100％，結果見表4。
　　
　　結果顯示，黑骨頭中、高劑量組均對醋酸引起小鼠腹腔毛細血管通透性增加有顯著的抑制作用(P＜0.05)，抑制率隨劑量的增大呈上升趨勢。
　　
　　3　討論
　　
　　黑骨頭民間主要用于風濕性關節炎，跌打損傷，胃痛，消化不良等。目前國內外尚未見其抗炎、鎮痛作用的報道，僅見生藥方面的研究。黑骨頭的鎮痛實驗反映其各劑量組均有鎮痛作用(P＜0.05，P＜0.01)，且起效時間較快，但持續時間相對較短。熱板法顯示黑骨頭中濃度的鎮痛作用效果最好(P＜0.01)，起效快、持續時間也較長。實驗中抗炎部分證明，黑骨頭各劑量組的抗炎作用均較明顯(P＜0.05，P＜0.01)，能有效抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹度和醋酸引起的小鼠腹腔毛細血管通透性的增加。以上實驗提示，黑骨頭具有良好的抗炎、鎮痛作用。但有關黑骨頭的抗炎、鎮痛機制尚不清楚，有待進一步研究確