斑點叉尾鮰病毒性疾病綜述

摘要：本文綜述了斑點叉尾鮰主要的病毒性疾病的流行情況、臨床癥狀、診斷和治療措施等，以期為斑點叉尾鮰的養殖生產和疾病防治提供參考依據。

關鍵詞：斑點叉尾鮰；斑點叉尾鮰病毒；斑點叉尾鮰呼腸弧病毒

1引言

斑點叉尾鮰（Ictalurus punctatus）屬鯰形目（Siluriformes）、鮰科（Ictaluridae），又名溝鯰，原產于美國，體長，光滑無鱗，尾鰭分叉深，背部淺灰，腹部乳白，體側有不規則淺黑色斑點。須4對，有脂鰭，廣溫性。適溫范圍為0～38℃，最適生長溫度為18～34℃，屬底層魚類。20世紀60年代中期，美國西北的密西西比州開始工業化養殖斑點叉尾鮰。10年的時間就得到了迅速地擴大，到了80年代，隨著翼輪式曝氣器的使用，工業化養殖產量的增長量已經達到了池塘養殖增長量的三倍多。由于其具有易飼養，易起捕，個體大，生長快，易垂釣和肉味鮮美等特點，已成為深受歡迎的養殖和游釣對象，先后被俄羅斯、南斯拉夫、日本等國引進。1984年湖北省水產科學研究所率先引種，1987年首次人工繁殖成功，1998年開始規?；庇唿c叉尾鮰苗種，并在廣東、深圳及湖北武漢、嘉魚建立苗種繁育基地。現在，該魚的人工增養殖在我國推廣到了20多個省市自治區。

斑點叉尾鮰可被病毒、細菌和原生動物等病原感染而患多種疾病，其中，以病毒感染造成的死亡率最高，并且至今沒有找到有效的治療方法。已有報道的斑點叉尾鮰病毒有兩種：斑點叉尾鮰病毒（channel catfish virus，CCV）和斑點叉尾鮰呼腸弧病毒（channel catfish reovirus，CRV），現根據國內外研究概況將其綜述如下，其中斑點叉尾鮰呼腸弧病毒是近年才發現的，還未證實有大量流行。

2斑點叉尾鮰病毒

2.1早期研究情況

斑點叉尾鮰病毒（Channel catfish virus disease，簡稱CCVD）于1968年由南斯拉夫學者Fijan首次分離，Wellborn首次公開使用了CCVD這一名詞。Fijan等于1970年發表了第一篇有關CCVD的研究報告，從5尾患病的斑點叉尾鮰幼魚中的4尾里面分離到了該病毒。但在接近成年和成年患病的魚體中沒有發現此病毒。1971年，Wolf 和 Darlington根據其形態學特征，鑒定該病毒為皰疹病毒。

Channel catfish virus（CCV）形態為球形，有囊膜的病毒顆粒直徑為175～200 nm，衣殼直徑為95～105 nm，有脂類囊膜?；蚪M為雙鏈DNA，其相對分子量為85×106，沉降系數為53S。病毒對乙醚和熱較為敏感，在甘油里易失去活性，反復凍融可使病毒損失活力。在-20℃條件下保存病魚，1年后查不到病毒，在-75℃或更低條件下保存最佳。在25℃魚池中病毒的傳染力能維持兩天，4℃時為28天，在自來水中能存活11天。在干燥條件下兩天內病毒失活。

該病毒只能在鮰科及胡子鯰科魚的細胞上增殖，如斑點叉尾鮰卵巢細胞系（channel catfish ovary，簡稱CCO）、云斑鮰細胞系，胡子魴科魚細胞系（KIK）僅適用于弱毒的增殖，不能用作野毒株的分離培養。培養最適溫度為25～30℃，能產生細胞病變，感染后數小時細胞固縮，出現合胞體及核內包涵體，約12h細胞脫落。

2.2流行情況

早在60年代就在美國流行，到1971年，喬治亞州、堪薩斯州、密西西比州、俄克拉荷馬州和西弗吉尼亞等地均有爆發。1977年，洪都拉斯從美國引進斑點叉尾鮰，該病隨之引入該地區。在我國大多數養殖斑點叉尾鮰的地區都曾受過這種病毒引起的疾病的危害。

斑點叉尾鮰病毒病只在魚苗和1齡魚種中出現，最易感染的是2～3周至6月齡的幼魚。從重量上看，10g以內的魚多發病。當飼養水溫在25～30℃時呈疾病流行高峰，病程比較短，一般為3～7d，死亡率可達90%以上。在水溫20～25℃時發病與死亡率均趨于下降，有研究者的觀察結果證明，當飼養水溫為19℃時，由此病導致斑點叉尾鮰的死亡率最高可以達到14%，而當水溫在15℃以下時，病魚的癥狀就不明顯，也無死亡現象發生。該病毒主要通過魚體接觸和疫水進行水平傳播，發病的幼魚及帶毒成魚是其傳染源，經腮和其他上皮組織侵入體內；同時，現在的研究結果已經證明這種病毒還可以經授精卵進行垂直傳播。人工注射接種該病毒，可使白叉尾鮰、長鰭叉尾鮰、斑點叉尾鮰與長鰭叉尾鮰的雜交種患病。

2.3臨床癥狀

本病的潛伏期因水溫不同而異，20℃可存活120d，25～35℃為72～78h。發病時，魚體表現為食欲降低甚至喪失，離群獨游或漂浮于水面，反應遲鈍，大量聚集在孵化池和池塘的邊緣，并且頭朝上，尾朝下懸掛于水中，最后沉入水底衰竭而亡。病魚在鰭的基部、腹部、肌肉組織有許多小的出血點，腹部膨大，腹水增多，呈現淡黃色。鰓貧血或出血，眼球突出。解剖檢查，肌肉、肝、腎、脾等組織有出血區，脾臟往往呈淺紅色，腫大，胃膨大，有粘液分泌物，腸灰白色。使用顯微鏡檢測，腎可見出血和壞死組織；前胃水腫、壞死；肝局部水腫、出血、壞死，在肝細胞內可見嗜酸性包涵體；胰腺細胞壞死；脾內淋巴細胞減少而紅細胞增多；炎癥細胞進入到受侵襲的區域，試圖清除被損傷和感染的組織。

2.4診斷

2.4.1根據流行病學及癥狀初步診斷

由于自然條件下CCV只感染斑點叉尾鮰，而不感染其他魚類，因此，發病時表現為只有斑點叉尾鮰發病。同時結合腹部膨大、腹水、在水中懸浮打轉的情況，可作出初步診斷。

2.4.2通過組織病理學進行進一步診斷

CCV可危害斑點叉尾鮰的各種重要的組織器官，腎是最先受損的器官，發生局部病灶性壞死，表現為造血組織及排泄組織（腎小球和腎小管等）的彌漫性壞死，同時伴有出血和水腫；肝充血、出血，發生灶性壞死，偶爾在肝細胞內可見嗜酸性胞漿包涵體；胃腸道、骨骼肌充血、出血，胃腸道粘膜層上皮細胞發生變性、壞死；胰腺發生壞死；神經細胞空泡化及神經纖維水腫。

2.4.3CCV的分離和鑒定

從病魚CCV的靶器官（如腎臟）分離到疑似CCV的病毒，經過細胞系的純培養，觀察其細胞特征以及理化特性是否與CCV相符，其中常用的細胞系是斑點叉尾鮰卵巢細胞系和褐色大頭鯰（brown bullhead，BB）細胞系。Bowser等首次從斑點叉尾鮰體內分離出CCV，根據其描述能成功分離和培養的關鍵因素有：首先，種群在整個冬天持續死亡（水溫8～14℃）；其次，組織提取液和白細胞聯合培養；第三，也是最重要的，要從受到免疫抑制的魚體中提取白細胞。在細胞培養過程中，出現合胞體和核內包涵體是診斷CCV最有力的證據，同時檢測分離病毒的理化特性是否與CCV符合，從而作出較為確切的診斷和鑒定。

2.4.4免疫學診斷

利用免疫反應的特異性，對分離病毒采用血清中和實驗、免疫熒光抗體技術、PCR等技術對該病作出最后的確切診斷。

2.5預防和控制

CCV病毒感染而導致魚體發病時，把水溫降至15℃以下，可明顯降低死亡率。這種治療方法只限于有可能控制水溫的實驗室、小型養殖水體和一些水資源重復利用系統的地方使用。Plant等使用干擾素誘導劑poly I:C注射斑點叉尾鮰，然后用CCV浸泡，結果死亡率較對照組大幅下降。Chinchar等運用從豹蛙和牛蛙皮膚中提取的抗菌肽也達到了降低CCV感染性的效果。

對這種疾病目前尚無漁用藥物可進行有效的治療，主要依靠預防措施，如：1）引進魚苗和魚種時嚴格實施檢疫，避免引進帶有病毒的斑點叉尾鮰；2）加強飼養管理，保持良好飼養水質，控制斑點叉尾鮰苗種的放養密度，在網箱中飼養成魚的放養密度一般應不高于15 尾/m3；3）在水溫比較高時，不要拉網作業，不要運輸魚種等。

3斑點叉尾鮰呼腸弧病毒

斑點叉尾鮰呼腸弧病毒（channel catfish reovirus，CRV）是在對加利福尼亞南部的兩個漁場的小魚進行常規病毒檢查時發現的。CRV沒有較強的致病性而且不會引起很高的死亡率，也沒有特殊的臨床癥狀描寫。分離出CRV的病魚腮瓣細胞增生，但是這種細胞增生可能并不只是由于CRV造成的，也可能還伴隨細菌的繼發性感染。

CRV具有雙重殼包裹，內殼直徑55nm，外殼直徑75nm。聚丙烯酰胺凝膠中電泳分析表明，該病毒RNA由11個片段組成。7種結構性多肽的分析結果顯示其分子量在32000～132000之間。該病毒感染的適合溫度是25℃，在20～30℃時均可復制，在BB細胞系上的半數組織培養感染量（TCID）是108.1ml，在CCO細胞系上的TCID則是107..3ml。CRV可在分離到CCV細胞病毒的同一細胞系上分離到，而且其細胞病理產物與CCV的很相似。CRV與抗CCV抗體沒有血清學交叉反應，但是卻與其他的呼腸弧病毒如金體美洲鳊病毒（Golden Shiner Virus，GSV）和馬蘇大馬哈魚病毒（Chum Salmon Virus，CSV）有血清學上的聯系。

盡管有間接證據表明CRV會導致斑點叉尾鮰幼魚（體重5g左右）的急性死亡，但CRV對商業養殖的斑點叉尾鮰影響似乎很小，并且該病毒還未在南加利福尼亞以外的地區報導過。

4展望

對于斑點叉尾鮰病毒性疾病的治療，目前還沒有很好的方法，但是疫苗的使用無疑帶來了一絲曙光。Nusbaum等利用RT-PCR技術，從CCV中擴增出一段衣殼DNA，制成DNA疫苗，對斑點叉尾鮰有一定免疫保護作用。針對斑點叉尾鮰病毒性疾病，今后的研究方向是建立一套迅速、準確地檢測方法，在不殺死魚體的情況下，通過取血能檢測魚體內病毒的感染情況，以區別細菌性疾病的感染，抓住治療的時機。