HPV感染聯合細胞DNA檢測在宮頸癌篩查中的臨床應用價值

宋曉兵

【摘要】 目的 檢測宮頸癌患者中HPV感染情況， 探討HPV感染與宮頸癌相關性， 聯合細胞DNA檢測， 在宮頸癌篩查中的應用價值， 提高準確率。方法 100例宮頸癌患者HPV及DNA檢測情況， 石蠟切片對比分析， 結果 HPV感染聯合細胞DNA檢測確診99例， 確診率為99%。結論 HPV感染聯合細胞DNA倍體分析應用于宮頸癌篩查， 可以減少誤診及漏診， 明確病因， 提高診斷的準確性。

【關鍵詞】 HPV感染；細胞DNA倍體；宮頸癌篩查；臨床應用

近年來， 隨著宮頸癌篩查的普及， 發病年齡提前， 人們對于HPV感染與宮頸癌的研究取得了較大的進展， 它是宮頸癌發生的必要因素， 沒有持續高危HPV感染， 沒有可能發生宮頸癌。

1 HPV感染方式

在宮頸癌的病因學上， 幾乎所有宮頸癌都是由15種致癌性HPV病毒引發的持續性感染， 有必要了解一下HPV病毒的基本知識和它的感染方式。HPV病毒是很小的雙鏈DNA病毒， 在細胞核內復制， 有20面衣殼， 其感染方式有兩種。

1. 1 允許性感染：病毒DNA游離于細胞中， 并能自我復制。此種感染方式不會致癌， 最終的結果是導致細胞破裂死亡。

1. 2 整合性感染， 病毒DNA整合到宿主基因組內， 根據病毒自我復制的活躍程度， 又分為以下兩種。

1. 2. 1 潛伏感染：病毒不發生獨立的自我復制， 僅在宿主細胞分裂時和宿主DNA一起復制， 因此拷貝極低， 雖然可以長期存在， 但常常檢測不到病毒的存在， 對宿主的危害性也很小， 即使在一定的情況下如老年女性絕經后免疫功能下降， 又重新進入活躍復制狀態， 現在， 研究表明， 危害性不大。

1. 2. 2 病毒活躍復制， 能夠產生新的完整病毒顆粒， HPV的DNA具有兩個編碼區， 分別產生兩種蛋白， 一類為早期基因區， 位于整個鱗狀上皮分化早期如基底細胞內， 共有E1～E2， E4～E7， 6個早期蛋白， 需要了解的的主要有①E4蛋白， 雖然從基底層開始就能產生， 但在鱗狀上皮細胞分化較好， 出現鱗化時產生的量達到最多， 此蛋白的功能是分解破壞細胞角蛋白網， 產生挖空細胞的外觀， 因此， 真正典型挖空細胞只出現在整個鱗狀上皮已經開始明顯分化的中表層內。②E6和E7蛋白， 是病毒的癌基因， 是HPV能夠致癌的罪魁禍首， E6通過與野生型P53結合， 促使其降解， E7能夠結合Rb基因， 并抑制其活性。在它們二者的共同作用下， 使細胞宛如一輛失控的車輛， 在細胞周期內一路狂奔， 不斷復制， 同時喪失分化能力， 這就是HPV致癌的根本原因。CE2蛋白， 能夠抑制E6， E7的功能， 制約兩種蛋白發揮作用， 不讓它們過分擾亂宿主細胞的細胞周期， 讓宿主細胞繼續保留分化、成熟的能力， 以保證衣殼蛋白的供應和完整子代病毒顆粒的產生。因此， HPV感染人體后， 如果E2和E6/E7的相互制約能夠達到平衡， 宿主細胞雖然有一定程度的損傷和破壞， 但依然能夠分化和成熟， 此時， 患者表現為濕疣， 一旦發生整合感染， E2失去功能， 宿主細胞過度增殖， 就會產生癌前病變， 甚至最終發展為癌。HPV16多見于宮頸鱗狀細胞癌， HPV18見于腺癌和神經內分泌癌[1]。

2 細胞DNA檢測

如果HPV（+）， 陰道鏡活檢， 發現病變相應治療， 未發現病變， 錐切， HPV（-）， 每半年一次， 直至正常， 然后每年一次， 一旦發現異常， 立即進行陰道鏡活檢， 而宮頸細胞DNA定量分析是通過對細胞核內遺傳物質DNA倍體定量檢測， 判斷細胞的生理狀態和病理狀態；在細胞惡變過程中， 遺傳物質DNA含量早于細胞形態發生改變， 通過評價細胞核各參數改變的程度， 對于腫瘤預后進行判斷， 指導腫瘤的治療， 是癌及癌前病變篩查的有效工具。

每一種正常細胞的體細胞核內均有23對染色體， 只有增殖期的細胞才會有染色體的復制和加倍， 但在生理狀態下， 人體絕大多數細胞處于靜止期， DNA含量相對恒定， 當致癌因素早期作用于細胞時， 細胞核內DNA結構和含量發生改變， 最終發展為細胞形態異常和惡性增殖。因此， 細胞DNA定量分析可通過測量細胞核內DNA含量變化， 在細胞形態不明顯前即可檢測出病變細胞， 實現癌及癌前病變的早期診斷。癌癥是一種染色體疾病， 致癌物質、罕見的遺傳病癥及偶發的有絲分裂錯誤都是通過產生非整倍體引發腫瘤的， 非整倍體以千計的基因和它們編碼的蛋白處于失衡狀態， 為細胞發展成更嚴重的非整倍體創造了條件。不過， 從非整倍體早期發展成惡性腫瘤需要較長時間， 在這段時間內， 醫生可見從容的進行檢測和實施外科手術。在癌癥早期， 還可以通過檢查非整倍體來區分惡性腫瘤和相貌雷同的良性腫瘤， 當癌癥進入晚期， 檢查與耐藥或轉移性相關的非整倍體， 醫生就可以選擇最合適的質量方案， 癌癥的發生都是從細胞惡變開始的， 即細胞核的改變開始， DNA是人體染色體組成成分， 是遺傳物質， DAN突變（染色體的變化和DNA含量的變化）是癌變基礎， 在癌變過程中， 染色體不穩定導致其數目和結構的高度異常， 最終積累， 演化為癌癥[2]。

細胞DNA定量分析標準DNA指數和臨床意義：

DI=1（0.8～1.2）， 二倍體細胞、2C細胞， 正常細胞， 可以定期正常篩查， 2～3年。

DI在1～2（1.2～1.8）， 1～2個異常細胞， 少說細胞為正常細胞的增殖周期， 多為慢性炎癥或HPV感染， 如有細胞鋒出現， 腫瘤可能性大， 建議臨床4～6個月進行復查， 以便明確原因。

DI=2（4倍體細胞、4C細胞）， 如果大于細胞總數的10%， 可能是癌前病變和腫瘤細胞， 建議活檢。

DI>2.5（異倍體細胞、5C細胞）， 癌前病變細胞、腫瘤細胞、HPV感染， 建議臨床活檢。endprint

DI>4.5（異倍體細胞、9C細胞）， 多為腫瘤細胞。

3 討論

DNA倍體分析是反應腫瘤良惡性的客觀指標， 因此聯合HPV檢測提高了宮頸癌篩查的準確率及病因學并簡便易行。DNA倍體分析的基本原理是細胞核通過全自動DNA倍體細胞圖像分析系統進行掃描處理。細胞片染色質量控制采用大鼠肝細胞片作對照， 一般情況下， 該系統對每張玻片上5000個以上的細胞核進行掃描分析， 對每個細胞核的123個核特征參數值包括細胞核面積、細胞核積分吸光度、具體結構特征和長度特征， 自動進行分類和計數， 如正常上皮細胞、增生或癌變細胞、淋巴細胞及未參與診斷的垃圾細胞（重疊細胞核， 聚焦不良細胞核和核碎片等）。全自動DNA倍體分析系統可以自動的測定出每例玻片上的DAN指數（DI）>1.25， >2.5細胞數占被測細胞總說的百分比， 不正常上皮細胞DI的均值. 然后自動打印DNA倍體分析直方圖和細胞點陣圖. 凡是有>5C細胞的玻片， 都要在顯微鏡下逐一進行核實， 以排除該系統垃圾和重疊細胞核誤認為異常細胞[3]。

研究表明， 腫瘤細胞DNA非整倍體是惡性腫瘤的特征標記之一， 隨著DNA含量的上升， 異倍體細胞或非正倍體的出現率也隨之升高， 因此， 測定細胞核DNA含量與倍體可以了解細胞增殖狀態， 從而判斷細胞有無惡變傾向或惡性程度， 其對惡性腫瘤的早期診斷具有重要價值， 隨著臨床分期及病理分級的增加， DI值、DNA異倍體檢出率逐漸增加， 腫瘤組織細胞DI值越高， 腫瘤惡性度越高。所以， HPV感染聯合細胞DNA檢測在宮頸癌篩查中的臨床應用價值越來越重要：①早期檢測出宮頸癌及癌前病變；②腫瘤的惡性程度及預后評估， 整倍體腫瘤其預后通常較非整倍體腫瘤好；③指導腫瘤的治療， 經過放療、化療治療后， 非整倍體細胞是否消失直接反映治療的效果好壞對于宮頸癌療效的評估， 浸潤性宮頸癌中， 非整倍體細胞越多放療敏感越強；④明顯提高傳統涂片和液基細胞學檢測工作效率和準確性。

參考文獻

[1] 回允中.婦產科診斷病理學.北京：人民衛生出版社，2007：273-278.

[2] 陳樂真.婦產科診斷病理學.人民軍醫出版社，2002：115-120.

[3] 回允中.婦科病理圖譜.第2版.北京：人民衛生出版社， 2007： 92-105.endprint