堿提油菜子多糖的抗腫瘤活性研究

(華中農業大學a．食品科學技術學院；b．理學院，武漢430070)

摘要：對堿提菜子多糖及其級分多糖進行了抗腫瘤活性研究，并初步探討了其作用機理#65377;結果表明，堿提菜子粗多糖和級分多糖都能夠起到一定的抑瘤效果，同時不會對荷瘤鼠的肝#65380;腎#65380;脾以及胸腺有明顯的損傷作用，可以提高荷瘤鼠NK細胞的活性，提高T淋巴細胞的轉化能力和巨噬細胞的吞噬能力，促進荷瘤鼠的血清溶血素的形成#65377;

關鍵詞：油菜子；堿提菜子多糖；抗腫瘤活性

中圖分類號：S565．4．099文獻標識碼：A文章編號：0439－8114(2008)06－0696－03

Study on the Anti－tumour Effect in Vitro of Polysaccharide Extracted by Ultrasonic－ NaOH from Rapeseed(RSPS)

FENG Ruia，b，XUE Ai－fangb，LI Xiu－juana，CHEN Haob，WU Mou－chenga

(a．College of Food Science and Technology； b． College of Science， Huazhong Agricultural University， Wuhan 430070， China)

Abstract：The anti－tumor activity of RSPS and the mechanism were studied in this paper．The results showed that RSPS has anti－tumor effect， and do not hurt liver， kidney， spleen or thymus of the mice． It could improve the activity of NK cell， the transformation of T cell and the phagocytosis of macrophage， and the formation of serum hemolysin．

Key words： rapeseed； polysaccharide from rapeseed； anti－ tumour effect

目前，全世界每年約有1 000萬人被確診為癌癥患者，約500萬人死于癌癥，占全世界每年死亡人數的10%左右#65377;我國每年死于腫瘤的人數近百萬，待治人數約150萬左右，其中新患者約100萬#65377;腫瘤已繼心腦血管疾病之后成為我國居民死亡的第二大疾病#65377;活性多糖是目前研究較多的一類天然生物活性物質，大量研究表明[1－3]，某些活性多糖能夠通過活化巨噬細胞和刺激抗體產生，達到提高人體免疫力#65380;抵抗腫瘤的作用#65377;為了提高油菜子的綜合利用率，本文在前期研究工作的基礎上[4－6]，對堿提菜子多糖及其級分多糖進行了抗腫瘤活性研究， 擬考察菜子多糖抗腫瘤活性并探求作用機理#65377;

1材料與方法

1．1試驗材料

1)試驗樣品經過文獻方法脫蛋白后的粗多糖RSPS以及DEAE－Saphadex A－25柱層析分離的級分多糖RSPS－2#65380;RSPS－3[5]#65377;

2)試驗動物SPF級昆明種小白鼠，雌性，體重20．0±2．0 _g，由湖北省實驗動物研究中心提供#65377;生產許可證號SCXK(鄂)2003－0005，使用許可證號SYXK(鄂)2003－0014#65377;S180細胞株(S180種鼠)，購自華中科技大學同濟醫學院藥理研究室#65377;

3)主要試劑RPMI1640培養液，Gibco USA；小牛血清，杭州四季青公司；環磷酰胺，江蘇恒瑞醫藥股份有限公司；伴刀豆球蛋白A(ConA)，Sigma公司；SOD試劑盒，南京建成生物工程研究所；MDA試劑盒，南京建成生物工程研究所；LDH試劑盒，南京建成生物工程研究所；GSH－Px試劑盒，南京建成生物工程研究所；其他試劑均為國產分析純試劑#65377;

1．2試驗方法

無菌獲取S180種鼠的腹水，以生理鹽水配成腫瘤細胞濃度為每毫升1×106個的細胞懸液，接種到小鼠右后腿皮下，每只0．2 mL#65377;試驗小鼠隨機分為正常對照組(NC)#65380;模型對照組(TC)#65380;陽性對照組(20 mg·kg^－1·d^－1的Cy)#65380;樣品組(RSPS50#65380;100#65380;200 mg·kg^－1·d^－1#65380;RSPS－2和RSPS－3 100 mg·kg^－1·d^－1)，共8組，每組10只#65377;除正常對照組外，其余各組動物均接種S180腫瘤細胞#65377;

接種次日開始，按試驗分組及劑量對小鼠進行灌胃給藥#65377;正常對照組及模型對照組給等體積生理鹽水，連續9 d#65377;第10天結束試驗，對小鼠稱重#65380;眼眶取血后處死小鼠，解剖摘取小鼠瘤塊及免疫器官，進行相關指標[7－8]的分析測定#65377;

2結果與分析

2．1菜子多糖體內的抑瘤率及免疫器官指數

菜子多糖體內抗腫瘤的抑瘤率見表1，免疫器官指數見表2#65377;結果表明，接種了S180肉瘤的小鼠體重增重會減小，胸腺會出現明顯的萎縮現象，導致荷瘤鼠的免疫力降低，脾指數增大；而抗腫瘤藥物環磷酰胺可能會導致小鼠體重增重有所回升，促進胸腺的萎縮，使脾指數恢復接近正常組；菜子多糖可以使小鼠體重增重加快，明顯提高荷瘤鼠的胸腺指數，使其接近正常水平并降低增大的脾指數#65377;粗多糖RSPS在高中低劑量組的抑瘤率分別為12．75%#65380;39．26%和36．91%，中劑量組的抑瘤效果最好；在同樣的中劑量條件下，兩個級分多糖RSPS－2和RSPS－3的抑瘤率分別為49．33%和37．25%，RSPS－2的抑瘤率要高于RSPS和RSPS－3#65377;

2．2組織切片病理學觀察

腫瘤組織石蠟切片經HE染色，正常細胞核被染成黑色，胞漿被染成紅色#65377;組織生長異常時，可能出現胞核聚集，則出現局部深染#65380;不均勻，或者核分散消失則不見核染色#65380;只見胞漿所染紅色#65377;各組的腫瘤切片見圖1#65377;由圖可見，模型組腫瘤細胞#65380;組織結構清晰#65380;典型，造模是成功的；抗腫瘤藥物環磷酰胺對腫瘤的抑制作用很明顯，但是同時也會損傷胸腺和肝臟；菜子多糖對腫瘤有不同程度的抑制作用，同時未見對肝#65380;腎#65380;脾#65380;胸腺造成損傷#65377;

2．3菜子多糖對荷瘤鼠NK細胞活性的影響及T淋巴細胞轉化的影響

體外檢測NK細胞活性是了解NK細胞功能及其與某些疾病關系的一個重要手段#65377;淋巴細胞轉化試驗是檢測機體細胞免疫功能的一種體外試驗，轉化率的高低可以直接反映機體細胞免疫功能的水平#65377;當T淋巴細胞受到ConA刺激后發生母細胞增殖反應，或細胞特別是增殖細胞中的線粒體水解酶可將MTT分解為藍紫色結晶，其光密度值能反映細胞的增殖情況#65377;由表3可知，接種了S180腫瘤細胞的小鼠NK細胞活性和T淋巴細胞的轉化能力與正常組相比會下降；抗腫瘤藥物環磷酰胺可以提高T淋巴細胞轉化的能力但同時進一步損傷NK細胞；菜子多糖可以明顯提高荷瘤鼠NK細胞的活性和T淋巴細胞轉化的能力，粗多糖RSPS在中劑量條件下效果比高低劑量條件下的效果好，同等劑量條件下，RSPS－2能顯著提高荷瘤鼠的NK細胞活性，使其恢復甚至超過正常組#65377;由此可以初步推斷，RSPS－2的抗腫瘤是通過提高其淋巴細胞及NK細胞的活力來間接作用于腫瘤細胞，從而起作用的#65377;

2．4菜子多糖對荷瘤鼠巨噬細胞吞噬能力及遲發型超敏反應(DTH)的影響

巨噬細胞是機體抗腫瘤免疫中的重要效應細胞，具有吞噬#65380;免疫調節等功能，其抗腫瘤作用的最大特點是對腫瘤細胞的殺傷具有選擇性#65377;遲發型超敏反應是檢測細胞免疫功能的常用方法之一，是由特異性致敏效應T細胞介導的細胞免疫反應#65377;二硝基氟苯(DNFB)是一種半抗原，將其按一定濃度涂于小鼠腹壁后會與皮膚蛋白結合形成全抗原，能刺激T淋巴細胞增殖成致敏淋巴細胞，再次攻擊后會誘發遲發型超敏反應(DTH)#65377;DTH與機體免疫能力一致，它是由特異性致敏效應T細胞介導的細胞免疫反應，是檢測細胞免疫功能的常用方法之一#65377;試驗結果(表4)表明，接種了S180腫瘤的小鼠，巨噬細胞的吞噬能力下降，遲發型超敏反應的程度明顯低于正常組；抗腫瘤藥物環磷酰胺會加劇破壞巨噬細胞的吞噬能力，提高荷瘤鼠遲發型超敏反應的程度使之超過正常水平；而菜子多糖普遍可以提高荷瘤鼠的巨噬細胞的吞噬能力，提高荷瘤鼠遲發型超敏反應的程度#65377;其中，級分多糖RSPS－2的效果已經超過正常組，而RSPS－3和RSPS也可以使荷瘤鼠的巨噬細胞的吞噬能力有所回升，提高荷瘤鼠的遲發型超敏反應程度，使之接近正常水平#65377;

2．5菜子多糖對荷瘤鼠血清溶血素形成的影響

菜子多糖對荷瘤鼠血清溶血素形成的影響見表5#65377;接種了S180腫瘤細胞的小鼠，血清溶血素比正常水平有所下降，抗腫瘤藥物環磷酰胺則明顯降低了荷瘤鼠血清溶血素的形成；粗多糖RSPS在高中劑量組可以明顯提高荷瘤鼠的血清溶血素的形成，使之超過正常水平；級分多糖RSPS－2和RSPS－3的影響沒有RSPS明顯，但是也可以使荷瘤鼠的血清溶血素接近或超過正常水平#65377;

3結論

抗腫瘤藥物環磷酰胺的使用，可起到明顯的抑瘤作用，但是同時會造成肝的腫大和胸腺的損傷；菜子多糖可以起到一定的抑瘤效果，但不會對荷瘤鼠的肝#65380;腎#65380;脾以及胸腺有明顯的損傷作用，可以提高荷瘤鼠NK細胞的活性，提高T淋巴細胞的轉化能力和巨噬細胞的吞噬能力，提高荷瘤鼠的血清溶血素的形成#65377;推測其機理，可以初步斷定，RSPS－2是通過提高NK細胞活性，提高T淋巴細胞的轉化能力和巨噬細胞的吞噬能力來起到抗腫瘤作用的#65377;

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