多指標考察三七皂苷的大孔樹脂法純化工藝

　　摘　要：目的：多指標考察三七皂苷的大孔樹脂法提取工藝。方法：采用高效液相梯度洗脫法作為含量測定方法，以三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1三個指標考察了三七皂苷的大孔樹脂純化工藝。結果：高效液相梯度洗脫法用于三七純化工藝中各皂苷的含量測定，各皂苷得到良好分離，結果準確、可靠。三七中各皂苷，隨脂溶性的增大，大孔樹脂純化的收率呈下降趨勢。結論：用高效液相梯度洗脫法測定三七中三種皂苷能更加有效的評估大孔樹脂純化工藝，有利于工藝優化。
　　關鍵詞：D101大孔樹脂；三七高效液相；三七皂苷R1；人參皂苷Rg1；人參皂苷Rb1
　　中圖分類號：R284．2　文獻標識碼：A
　　文章編號：1007—2349(2007)02—0040－02
　　五加科植物三七Panax notoginseng(Bruk．)F．H．Chen，具有散瘀止血，消腫定痛的功效，其中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1，人參皂苷Rb1是其主要的藥效成分。采用大孔樹脂提取純化三七皂苷，是較為成熟的工藝，但一般只用紫外分光光度法測定總皂苷做為評價指標^[1～2]。Rb1的含量考察了三七皂苷的大孔樹脂純化工藝，方法更加專屬、準確。
　　
　　1儀器與試藥
　　
　　高效液相色譜儀包括二元高壓泵、2487檢測器、WatersXterra RP18 5μm(4．6×150mm)柱、Breeze工作站(美國Waters)；三七為市售；三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1含量測定對照品(中國藥品生物制品檢定所)；D101型大孔樹脂(天津農藥股份有限公司樹脂分公司)；自制重蒸餾水；色譜純乙腈(德國Merck)；其它試劑均為分析純。
　　
　　2方法與結果
　　
　　2．1樹脂型號選擇　選用普遍用于皂苷分離的D101型大孔樹脂。
　　2．2樹指預處理　用工業乙醇浸泡數天，裝柱后用工業乙醇洗至流出液與水1：2混合不產生混濁，改用大量水洗，水浸泡備用。
　　2．3色譜條件 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；乙腈：0．05％磷酸溶液梯度洗脫。0～20min，比例從15：85線性增加到30：70；20～25min，比例從30：70線性增加到45：55；25～30min，比例從45：55線性遞減到15：85。檢測波長為203mm，流速1．0ml／min^[3～4]。
　　2．4對照品溶液的制備　精密稱取在五氧化二磷干燥器中干燥至恒重的三七皂苷R1．00mg、人參皂苷Rg1 2．5mg，人參皂甙Rb1 2．00mg置5ml量瓶中，加乙腈一水(19：81)至刻度，搖勻，即得(每1ml含三七皂苷R1 0．20mg，Rg10．50mf，Rb1 0．40mg)。
　　2．5供試品溶液的制備　取藥材粉末或者樣品適量，置5ml容量瓶中，加乙腈一水(19：81)4ml，超聲處理45min，放冷，定容。
　　2．6線性關系及線性范圍　取對照品溶液，分別以2、4、12、16μL進樣，測定峰面積。以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，計算線性回歸方程，結果見表1。
　　
　　2．7精密度試驗　取供試品溶液重復測定6次，以3種皂苷的峰面積分別計算，結果三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1的RSD分別為1．22％、1．95％、1．28％。
　　2．8重現性試驗　制備6份供試品溶液，按照本文方法測定含量，結果三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1的RSD分別為2．45％、3．21％、2．53％。
　　2．9加樣回收率試驗　取同一批次已經測定含量的三七藥材粉末，取樣量減半，加入等量的三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1對照品，按供試品溶液制備方法制備，測定，計算回收率，結果三七皂苷R1的平均回收率為99．4％，RSD為3．1％(n＝6)；人參皂苷Rgl的平均回收率為101．2％，RSD為2．7％(n＝6)；人參皂苷Rb1的平均回收率為96．3％，RSD為3．6％(n＝6)。結果見圖1。
　　
　　2．10制備三七提取液　取已測含量的三七藥材10g，用70％乙醇加熱回流提取數次，合并提取液，回收乙醇至一定量，加入適量水，繼續回收至無醇味，加水使提取液總體積為20ml，10攝氏度下保存備用。
　　2．11吸附容量測定　吸取20ml提取液，通過預處理好的大孔吸附樹脂層析柱(11．3mm內徑，15g，相當于干樹脂5g，柱高為20cm)，用蒸餾水洗脫至無色，測定水吸脫液中各皂苷含量；用95％乙醇100ml再生樹脂，測定95％乙醇洗脫液中各皂苷的量(mg)。結果見表2。
　　
　　因為95％醇洗部分皂苷含量(吸附的量)約為水洗部分(沒有被吸附部分)的2倍，大約相當于上樣總量的2／3，即約14ml上樣液，所以確定上樣量為10ml。
　　2．12洗脫劑、洗脫速度<sup