抗血栓藥材有效部位的篩選研究

　　摘　要：目的：觀察抗血栓藥材有效部位的活血化瘀作用。方法：采用小鼠腦偏癱、血小板聚集、纖溶法、玻璃毛細管法、高脂血癥模型等實驗方法，測定藥物對小鼠腦血栓的保護率，血小板聚集抑制率、纖溶率、凝血時間及血脂水平的影響。結果：甜茶藤、榕樹須、黃杞葉、首烏藤等有效部位抗血栓效果較好；榕樹須、黃杞葉和甜茶藤有一定的抗血小板聚集作用；全部水洗脫物在一定劑量范圍內對大鼠血漿纖維蛋白均具有一定的纖溶作用；榕樹須、山楂葉、黃杞葉、甜茶藤等能明顯延長凝血時間，并能明顯降低TC和TG水平。揭示榕樹須、山楂葉、黃杞葉、甜茶藤等具有較好的抗離血栓、抗血小板聚集、抗凝血和降脂作用。結論：為進一步分離有效成分提供了科學依據。
　　關鍵詞：抗血栓藥材；有效部位；篩選實驗
　　中圖分類號：R965．1　文獻標識碼：A
　　文章編號：1007—2349(2007)02—0034－02
　　廣西許多特色中草藥在民間應用證實具有活血化瘀作-用，對血栓性疾病有良好的治療效果。在我們前期篩選研究中，已觀察到柿子葉、兩面針、黃杞葉等水提物和醇提物具有抗腦血栓、降低血粘度、抑制血小板聚集等作用[1～2]。我們對初篩有效的提取物經大孔樹脂做了進一步的分離提取，得到了許多不同的有效部位，繼續進行抗血栓、抗凝、溶纖和降血脂等篩選試驗。現將實驗結果報告如下。
　　
　　1 實驗材料
　　
　　1．1 藥物　黃皮葉(Clausena lansium)、黃杞葉(Engelhardtiaroxburghiana Wall．)、榕樹須(Ficus microcarpa L)、甜茶藤(Ampelopsis grossedentata)、大果山楂葉(Crataegusscabrifolia)、首烏藤(Polygonum multiflorum Thunb．)、兩面針(Zanthoxylum mitidum)等藥材水提物經過大孔樹脂過濾，水洗脫得有效部位，由廣西中醫藥研究所化學室提供。阿司匹林腸溶片，湖南南亞大制藥有限公司生產，批號：20060124。鹽酸腎上腺素注射液，廣州明興制藥廠產品，批號MBS001。復方丹參注射液，江蘇康恬制藥有限公司生產，批號：060105。洛伐他汀膠囊為揚子江藥業集團有限公司產品。復方丹參片，天津天士力制藥股份有限公司．批號：2006304。
　　1．2試劑　膠原蛋白為Worthington biochemical corporation產品：腺苷——二磷酸鈉鹽(ADP)，中國醫藥集團上海化學試劑公司，批號：20040510。含鈣凝血酶干粉，上海榮盛生物技術有限公司生產，批號：20060510。血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)檢測試劑盒均為四川省麥克科技有限責任公司產品。
　　1．3動物 昆明種小鼠，體重18～22g；Wistar大鼠，體重200～250g，雌雄各半，均為清潔級動物，由廣西醫科大學實驗動物中心提供，許可證號：SCXK桂2003～0003。
　　1.4儀器　BS631型血小板聚集儀，北京生化儀器廠生產。722型光柵分光光度計，上海分析儀器三廠產品。電熱恒溫水浴箱，上海醫療器械七廠生產。
　　
　　2方法與結果
　　
　　2．1抗腦血栓實驗[3]。取小鼠100只，隨機分為生理鹽水組、陽性藥阿司匹林(80mg／kg)組和各藥材水洗脫物組，每組10只。各藥物組每天灌胃給藥1次，生理鹽水組給予等體積的生理鹽水，連續5d。于末次給藥后1h，小鼠尾靜脈注射膠原蛋白及腎上腺素聯合誘導劑(膠)原蛋白90ug／只，腎上腺素9ug／只)。注射后觀察15min內小鼠偏癱的未恢復數，計算藥材對小鼠腦血栓的保護率。結果見表1。
　　
　　結果表明：甜茶藤、榕樹須、黃杞葉、首烏藤等抗血栓效果較好，其次是黃皮葉、山楂葉、兩面針。提示這些有效部位具有一定的抗小鼠腦血栓作用。
　　2．2對體外ADP誘導大鼠血小板聚集的影響[4]　取體重200～250g大鼠，用3％戊巴比妥鈉0．1ml／100g體重腹腔注射麻醉后，剖開腹腔，從腹主動脈取血，注入盛有3．8％枸櫞酸鈉溶液試管中，輕輕搖勻，以100r／min離心5min，吸取上清液為富血小板血漿(PRP)，剩余血繼續以3000r／min離心10min，吸取上清液為貧血小板血漿(PPP)。將BS631型血小板聚集儀打開，預熱30min后，用PRP調零(0％)，用PPP調幅度(100％)。測定時對照管取PRP0．4ml及生理鹽水20ul，給藥管取0．4mlPRP及藥液20ul(大劑量)、10ul(小劑量)放入比濁管中，在37℃恒溫及1300r／min攪拌條件下加入ADP50ul(50ug／ml)，用自動平衡儀以20mm／min紙速記錄對照管和給藥管血小板聚集曲線，根據所記錄的曲線計算血小板聚集百分數(％)。結果見表2。
　　
　　結果表明：榕樹須、黃杞葉和甜茶藤具有一定的抗血小板聚集作用，其他藥材洗脫物無明顯影響。
　　2．3藥物對體外大鼠血漿纖維蛋白溶解的影響　采用200～300g大鼠，用3％戊巴比妥鈉0．1ml／100g體重腹腔注射麻醉后，剖開腹腔，從腹主動脈取血10ml(血液與0．1mol／L草酸鈉之比為9：1)，輕輕搖勻，以1500r／min離心10min，吸取上清液為大鼠草酸鈉血漿，取試管吸取大鼠草酸鈉血漿0．1ml，再加入含鈣凝血酶液0．1ml立即搖勻，待血漿凝塊形成后，加入稀釋好的藥液0．2ml于血漿凝塊上，每個樣品做5個濃度(對倍稀釋)，每個濃度做兩個重復管，置37℃恒溫24h，檢查血漿凝塊溶解變化情況。結果見表3。
　　
　　結果表明：全部水洗脫物在一定劑量范圍內對大鼠血漿纖維蛋白均具有一定的纖溶作用。
　　2．4對小鼠凝血時間的影響[5] 取小鼠i00只，隨機分為對照組，陽性藥復方丹參片組，各藥材水洗脫物組，每組10只。連續灌胃給藥7d，末次給藥后40min，用內徑為1mm的玻璃毛細管插入小鼠眼眶靜脈叢中取血，至毛細玻璃管血柱5cm為止，每隔30s折斷毛細玻璃管一小段，同時用肉眼觀察血柱是否移動，檢查有無凝血絲出現，以毛細管采血到凝血絲出現的時間為凝血時間，并進行組間T檢驗。結果見表4。
　　
　　與空白對照組比較:P<0.05
　　結果表明，榕樹須、山楂葉、黃杞葉、甜茶藤等能明顯延長凝血時間，具有一定的抗凝作用。
　　2．5對高脂血癥小鼠血脂的影響[6]動物高脂血癥模型制備：取1～2日新鮮雞蛋，去除蛋清，加生理鹽水攪拌均勻配成75％蛋黃乳液，于末次用藥后2h，除對照組外，每鼠腹腔注射0．5ml蛋黃乳液。
　　取小鼠110只，隨機分為空白對照組，高脂模型組，陽性藥洛伐他汀組，以及各藥材水洗脫物組，每組10只。給藥組每天灌胃給藥1次，對照組和模型組給予等體積的蒸餾水，連續10d。于末次給藥后2h，除對照組外，其余各組小鼠均腹腔注射75％蛋黃乳液0．5ml／只，造成實驗性高血脂癥。腹腔注射蛋黃乳液后禁食18～20h，摘除眼球取血，分離血清，按試劑盒方法檢測血清TC、TG的含量。結果見表5。
　　
　　結果表明：榕樹須、山楂葉、黃杞葉、甜茶藤等能明顯降低TC和TG水平，具有一定的降脂作用。
　　
　　3小結與討論
　　
　　實驗研究表明，榕樹須、黃杞葉、甜茶藤等7種藥材水洗脫物在5種動物模型中，甜茶藤、榕樹須、黃杞葉、首烏藤等抗血栓效果較好，其次是黃皮葉、山楂葉、兩面針、榕樹須、黃杞葉和甜茶藤具有一定的抗血小板聚集作用；全部水洗脫物在一定劑量范圍內對大鼠血漿纖維蛋白均具有一定的纖溶作用；榕樹須、山楂葉、黃杞葉、甜茶藤等能明顯延長凝血時間，并能明顯降低高脂血癥小鼠TC和TG水平。綜上所述，榕樹須、山楂葉、黃杞葉、甜茶藤等具有較好的抗腦血栓、抗血小板聚集、抗凝血和降脂作用，為進一步分離提取有效成分提供了科學依據。
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