ＣＸＣＲ３在銀屑病患者的表達及其臨床意義

【摘要】 目的 研究銀屑病患者皮損內趨化性細胞因子受體CXCR3的表達及其臨床意義。方法 利用熒光定量聚合酶鏈反應法測定20例尋常型銀屑病患者皮損內及17例正常對照者皮膚中CXCR3 mRNA的定量表達，采用直線相關回歸分析方法分析CXCR3 mRNA的表達與銀屑病病情嚴重程度(PASI)的關系。結果 銀屑病皮損內CXCR3 mRNA高于正常對照者皮膚內的表達水平(P<0.01)。銀屑病皮損內CXCR3 mRNA的表達與患者病情嚴重程度呈顯著的正相關(r=0.72465，P<0.01)。結論 趨化性細胞因子受體CXCR3可能在銀屑病的發病中起重要作用。

【關鍵詞】 銀屑??；趨化性細胞因子受體；CXCR3；熒光定量聚合酶鏈反應

文章編號：1003-1383(2007)04-0362-02

中圖分類號：R 758.63

文獻標識碼：A

Expression and clinical significance of CXCR3 mRNA in patient with psoriasis vulgaris

MA Ze-lin1，ZHOU Zhi-gang1，Li Chang-xing1，Hu-Bin2

(1.Dongguan Hospital of Chronic Disease，523008 Dongguan，2.Daan Gene Diagnostic Center of Sun Yat-sen University，510080 Guangzhou)

【Abstract】 Objective To study the expression and clinical significance of chemokines receptor CXCR3 in psoriatic lesional skin.Methods Twenty adult patients with psoriasis vulgaris and 17 health people were sequentially chosen in this study. The production CXCR3 mRNA was measured by Fluorescence Quantitative Polymerase Chain Reaction Method. The relationship between CXCR3 and disease severity(PASI) was assessed by linear regression and correlation.Results Expression of CXCR3 mRNA in psoriasis lesional skin was higher than that in control group(P<0.01).Expression of CXCR3 mRNA was markedly positive correlation with PASI(r=0.72465，P<0.01).Conclusion Our data suggest an important role of CXCR3 in the development and advance of psoriasis vulgaris.

【Key words】 psoriasis vulgaris；chemokines receptor；CXCR3；Fluorescence Quantitative Polymerase Chain Reaction Method

銀屑病是一種慢性炎癥性增生性疾病，嚴重影響著患者的生活質量，人群發病率為0.5%～4%，其發病機制可能與遺傳、細胞因子及其受體、新生血管形成、細胞凋亡異常等有關^[1~3]。炎性細胞浸潤運動需要在局部形成適當的趨化因子濃度梯度，同時相應的靶細胞在趨化因子的作用下向局部遷移^[3]，因而趨化因子及其受體在本病發病機制中的研究越來越受到重視。為進一步研究趨化因子受體在銀屑病發病中的作用，本研究采用熒光定量PCR法定量測定CXCR3在銀屑病患者皮損內的表達及探討其臨床意義，現將結果報道如下。

資料和方法

1.一般資料 20例尋常型銀屑病患者為2006年1～6月東莞市慢性病防治院皮膚科門診患者(進行期)，其中男11例，女9例；年齡范圍20～46歲(平均36.8歲)；病程10天～3年。所有患者治療前2個月內未系統應用免疫抑制劑或皮質類固醇制劑或中藥制劑；銀屑病皮損嚴重指數(PASI)為8.9~48.6(30.1±14.1)。正常對照組17例為健康者外科整形手術切除的皮膚，其中男9例，女8例，年齡范圍20～46歲(平均36.8歲)。

2.方法

(1)RNA的提?。航M織塊置勻漿器，加TRIZol冷凍勻漿，提取后的RNA，-80℃保存備用。

(2)RNA樣品鑒定：電泳檢查：每樣品取5 μl RNA置1%的瓊脂糖凝膠上電泳，泳畢溴化乙錠染色20 min，置紫外燈下觀察。紫外分光光度計測吸光度值及計算樣品濃度。

(3)引物的設計和合成：參考16 sRND基因文庫設計引物，CXCR3引物序列如下：FO：5'-CCG TCC AGT GGG TCT TTG G -3'，RO：5'-CTG CGT AGA AGT TGA TGT TGA AGA G -3'，引物擴增片斷長度為72 bp，TaqMan Probe：5'-FAM- TCT GGC CTC TGC AAA GTG GCA -TAMRA-3'，由ABI 3900臺式高通量DNA合成儀合成。

(4)逆轉錄反應：取4 μl RNA模板做逆轉錄反應，儀器為PE9700PCR儀，反應體系如下：(德國QIAGEN 公司RT PCR試劑盒)5×逆轉錄buffer 4 μl，上游引物(10 pM/μl)0.4 μl，下游引物(10 pM/μl)0.4 μl，dNTPs(25 mM)0.2 μl，MMLV(10 U/μl)1 μl，DEPC水10 μl，總體積20 μl。反應條件：37℃ 1 h，然后95℃ 3 分鐘。

(5)熒光定量PCR反應體系進行：由熒光定量儀PE 7000型PCR擴增儀擴增完成。反應體積為50 μl，反應體系：5×定量PCR buffer 10 μl，上游引物F1 μl，下游引物R1 μl，dNTPs0.5 μl，熒光探針1 μl，Taq 酶1.5 μl，cDNA 5 μl，ddH2O 30 μl(PCR buffer成分：10 mM Tris-HCl (pH8.0)，50 mM KCl，2 mM MgCl2)。反應條件為：93℃ 2分鐘，然后93℃45秒，55℃45秒，共40個循環。反應結束后，計算待測樣本CXCR3 mRNA表達量(copy/μg RNA)。

3.統計學分析 采用SAS 8.01 for window 統計軟件進行統計分析，組間比較采用秩和檢驗和直線相關回歸分析。

結果

1.銀屑病患者皮損內CXCR3 mRNA的表達明顯高于正常對照者皮膚中的表達(表1)。

表1 銀屑病治療前皮損和正常皮膚內CXCR3 mRNA的表達分組例數CXCR3 mRNA(拷貝/μg RNA)uPCXCR3組2086662.68 ±64471.11 -4.0990<0.0001正常對照1717169.08 ±27978.81

2.銀屑病中CXCR3 mRNA表達與病情PASI(30.1±14.1)呈顯著正相關性(r=0.72465，P=0.0003)。見圖1。

討論

銀屑病組織病理學主要特征是角質形成細胞過度增生、炎癥細胞浸潤、新生血管形成^[2，3]。炎性細胞浸潤運動需要在局部形成適當的趨化因子及其受體濃度梯度，同時相應的靶細胞在趨化因子及其受體的作用下向局部遷移^[4]。趨化因子最初發現的功能與炎性細胞趨化有關，但近年研究表明趨化因子及其受體與細胞因子共同參與免疫系統的調控^[5]，因而趨化因子及其受體在本病發病機制中的研究越來越受到重視。IP-10在銀屑病患者的皮損中表達持續上調，在活動期斑塊型銀屑病的角質形成細胞和真皮浸潤細胞可測到IP-10，有效治療后IP-10表達減少^[6]。趨化因子的生物活性是通過結合趨化因子受體來實現的。CXCR3為IP-10特異性的受體，在IL-2活化的T細胞和嗜酸粒細胞高度表達，而在其他T細胞、B細胞、單核細胞和桿狀細胞上未能檢測出^[7]。但關于CXCR3銀屑病患者皮損內表達如何的研究甚少。本研究發現銀屑病患者和健康者皮膚均有CXCR3 mRNA的表達，但銀屑病患者的表達量明顯高于健康對照者。此外，銀屑病患者皮損內CXCR3 mRNA的表達與病情嚴重程度呈顯著的正相關，即CXCR3 mRNA的表達量越高其病情越重，反之亦然。這些研究結果表明，銀屑病患者CXCR3的過度表達可能直接或間接與其配體結合促進了炎癥細胞浸潤和新生血管形成，最終形成銀屑病皮損。

參考文獻

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(收稿日期：2007-06-18 修回日期：2007-07-20)

(編輯：潘明志 英文審校：鐘京梓)

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