大姜根腐病生防木霉菌株的分離與鑒定

中圖分類號(hào)：S476.1;Q939.9 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1002-4026（2025）04-0056-11

Abstract：Gingerrootrotisasoil-borne diseaseinginger planting，which ismainlycausedbyFusarium spp.andcan induceserious reductionoreven extinctionof ginger yield.Thirty-fourTrichoderma strains withantifungal activity were isolated from thesoilcolected from representative ginger planting areas in Shandong province.Basedontheir antibiotic properties，antagonisticcoeficients，andsporeproductioncapabies，three highlyeffectiveTrichodermastrains were selectedfor their antagonismagainst Fusarium oxysporum f.sp.zingiberi（Foz）：TW20111，TW20321，and TW20323.Morphological observationsandmolecular biological identications clasifiedstrainTW20l11asTrichodermaatrovirideand strainsTW20321andTW20323asTrichodermaharzianum.Theeficacyof these threeTrichodermastrainsincontroling gingerroot rot wasassessed under greenhouse andfieldconditions.Under greenhouseconditions，T.harzianumTW20321 showed the highest control efficacy of 86.33% ，significantly promoted ginger plant height，and moderately increased ginger yieldcomparedtocarbendazimtreatment.Fieldexperimentsrevealedthatthecontroleficacyofanytwocombined Trichodermastrains wassignificantly higherthanthatofasinglestrain，withthecombinationofTW20l1andTW20321 achieving the highest control efficacy of 68.90% . This combination also resulted in the greatest increases in plant height and single plant yield，which rose by 19.31% and 27.43% ，respectively，compared to the control group.This study provided a basis for the development of new bio-pesticides for the effective control of ginger root rot.

Key words ： Trichoderma spp.； ginger root rot； Fusarium oxysporum f. sp. zingiberi； biocontrol

大姜（Zingiber officinale Rosc.）又稱生姜，屬姜科姜屬，為多年生單子葉草本植物，在我國(guó)作為一年生經(jīng)濟(jì)作物栽培。大姜根莖肥大，可供食用和藥用[1]。隨著種植面積的不斷擴(kuò)大，大姜病害的種類也日益增加，其中由尖孢鐮刀菌大姜專化型（Fusarium oxysporum f.sp.zingiberi，F(xiàn)oz）引起的根腐病近年來(lái)在大姜產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生[2]。大姜根腐病初始發(fā)病點(diǎn)是地下根莖部，病原菌在根和莖的維管束內(nèi)繁殖并分泌毒素，破壞導(dǎo)管機(jī)能，受侵染的大姜根、莖部維管束變成褐色至黑褐色，莖基部枯黃萎蔫，直至整株枯死[3]。

目前防治大姜根腐病的方法主要包括;農(nóng)業(yè)防治、物理防治、化學(xué)防治和生物防治[4。農(nóng)業(yè)防治主要有輪作、間作、脫毒等[5];物理防治主要采用土壤生物熏蒸、太陽(yáng)能輻射滅菌等[6];化學(xué)防治是防控大姜根腐病最常用的方法，主要包括化學(xué)熏蒸土壤消毒和化學(xué)農(nóng)藥噴施，土壤熏蒸常用的化學(xué)農(nóng)藥有氯化苦、棉隆、威百畝等，噴施化學(xué)農(nóng)藥包括噻唑麟、多菌靈和甲基托布津等;生物防治是利用具有生防功能的有益菌來(lái)防控大姜根腐病，使用各種生物防治劑防治植物病蟲(chóng)害，被認(rèn)為是化學(xué)殺菌劑的綠色和環(huán)保替代品7，目前常用的生防菌有木霉菌屬（Trichoderma spp.）[8]、芽孢桿菌屬（Bacillus spp.）[9]和假單胞菌屬細(xì)菌（Pseudomonasspp.）[10]等。

作為防治土傳真菌病害的生防菌劑，木霉已被廣泛用于防控由鐮刀菌、腐霉菌等導(dǎo)致的大姜病害。Das 等[1研究了4株木霉菌對(duì)黑胡椒和大姜尖孢鐮刀菌、立枯絲核菌和辣椒疫霉等3種病原菌的生防效果，其中哈茨木霉（T.harzianum）CH1對(duì)尖孢鐮刀菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用最高達(dá) 78.3% 。Rajkumari 等[12]分離到哈茨木霉（T.harzianum）MH259837對(duì)Foz表現(xiàn)出較好的拮抗效果，在田間試驗(yàn)中T.harzianum MH259837與米糠復(fù)配組合防效最高。研究表明木霉菌對(duì)防控大姜根腐病展現(xiàn)出巨大的潛力，但由于受單一菌株的定殖能力、穩(wěn)定性及適應(yīng)性等問(wèn)題制約，菌株在實(shí)際生產(chǎn)中的應(yīng)用往往受到限制。

本文從采集的山東省代表性大姜種植區(qū)土壤中篩選分離出高效拮抗大姜根腐病病原菌Foz的3株木霉菌株，并通過(guò)室內(nèi)盆栽實(shí)驗(yàn)和田間小區(qū)試驗(yàn)對(duì)檢測(cè)分離到的生防木霉菌株進(jìn)行兩兩復(fù)配對(duì)實(shí)驗(yàn)，探究其對(duì)大姜根腐病的防治效果，為研發(fā)大姜根腐病高效生防木霉菌劑奠定基礎(chǔ)。

材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試病原菌

尖孢鐮刀菌大姜專化型Foz，由本實(shí)驗(yàn)室保存。

1.1.2 培養(yǎng)基

玉米粉瓊脂培養(yǎng)基（corn meal agar，CMA）：玉米粉 30g ，瓊脂粉 18g ，蒸餾水 1000mL pH（6.0±0.2） ，121^°C 滅菌 20min 。

馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（potato dextrose agar，PDA）：去皮土豆 200g ，葡萄糖 20g ，瓊脂 18g ，蒸餾水1 000mL pH（5.6±0.2） ， 115°C 滅菌 30min 。

馬鈴薯葡萄糖肉湯培養(yǎng)基（potato dextrose broth，PDB）：去皮土豆 200g ，葡萄糖 20g ，蒸餾水 1 000mL ，pH（5.6±0.2） ， 115°C 滅菌 30min 。

合成低營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基（synthetic nutrient-poor agar，SNA）：葡萄糖 0.2g ，蔗糊 KCl 0.5g，MgSO₄0.5g ，瓊脂 18g ，蒸餾水 滅菌 30min 。

1.2 試劑

DNA Marker、Premix TaqT\"購(gòu)自寶生物工程（大連）有限公司，真菌基因組DNA提取試劑盒、瓊脂糖凝膠DNA 回收試劑盒購(gòu)自天根生化科技（北京）有限公司。引物合成、序列測(cè)定由生工生物工程（上海）股份有限公司完成。

1.3 大姜植株和根部土壤的收集

分別從濰坊昌邑市、萊蕪寨里鎮(zhèn)等大姜種植區(qū)采集健康與根腐病發(fā)病的大姜植株和大姜根部土壤各12份，分裝到無(wú)菌聚乙烯封口袋中，放入內(nèi)置冰袋的采樣保溫箱帶回實(shí)驗(yàn)室，進(jìn)行木霉菌的分離、篩選。

1.4 木霉菌的分離

去除大姜根莖表面的表土，輕輕抖落緊密附著在根系上的土壤（約 1～3mm^? ），將獲得的根際土樣品徹底均質(zhì)化，自然風(fēng)干、研磨、過(guò)100目篩（每英寸（ 25.4mm ）100孔）去除根系殘留及其他雜質(zhì)后，用于木霉菌株的分離。將根際土裝至滅菌三角瓶中，每三角瓶裝土樣 20g ，加 80mL 無(wú)菌水懸浮，用無(wú)菌水進(jìn)行系列稀釋（204號(hào) （10^-1～10^-6 ），分別取 100μL 涂布含 100μg/mL 鏈霉素的PDA平板，置于恒溫培養(yǎng)箱中 25^°C 恒溫培養(yǎng)，挑取單個(gè)菌落轉(zhuǎn)接到新的PDA平板上，經(jīng)4～5次純化獲得木霉單菌落。

1.5 木霉菌的形態(tài)學(xué)觀察

將篩選到的木霉菌分別接種到PDA、CMA和SNA培養(yǎng)基上觀察其菌落形態(tài)，菌絲體用乳酸酚棉藍(lán)染液固定后在光學(xué)顯微鏡（OlympusCX31）下記錄其分生孢子梗和孢子形態(tài)。

1.6 木霉菌的分子生物學(xué)鑒定

利用真菌基因組DNA提取試劑盒分別提取木霉菌的基因組DNA。利用表1所示引物對(duì)分別擴(kuò)增木霉菌的內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)ITS 片段[13] 聚合酶 β 亞單位（RNA polymerase subunit II，RPB2）[14]和翻譯延伸因子1A（translation elongation factor _1-α ，TEF1- ??α∝ ）片段[15]。采用瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒純化PCR產(chǎn)物回收后進(jìn)行測(cè)序分析，在 NCBI（htp：//www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST）網(wǎng)站上比對(duì)后，使用 MEGA7.0軟件和最大似然法，構(gòu)建由 ITS、RPB2 和 TEF1- σ?α∝ 序列聯(lián)合的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，并使用ITOL（https：//itol.embl.de）網(wǎng)址對(duì)發(fā)育樹(shù)進(jìn)行優(yōu)化態(tài)。

表1木霉菌分子生物學(xué)鑒定所用引物

Table 1Primers used for molecular identification of Trichoderma spp.

1.7 生防木霉菌的篩選

利用平板對(duì)峙實(shí)驗(yàn)，在PDA培養(yǎng)基上檢測(cè)分離到的木霉菌對(duì)Foz的抑菌活性。用直徑 5mm 的無(wú)菌打孔器分別在培養(yǎng)2～3d的待篩選木霉菌和Foz菌落邊緣打取菌齡相同的菌餅，分別對(duì)稱接種到PDA平板兩側(cè)，以單獨(dú)接種Foz 菌餅的PDA平板為對(duì)照，每個(gè)木霉菌株設(shè)置3個(gè)對(duì)峙平板作重復(fù)。置于 25°C 培養(yǎng)箱中

到置培養(yǎng)4～8d，培養(yǎng)完成后取出平板，測(cè)量Foz的菌落半徑，按照公式（1）計(jì)算相應(yīng)木霉菌的抑菌率。

1.8 生防木霉菌的拮抗能力測(cè)定

采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定生防木霉菌對(duì)Foz的拮抗能力，觀察木霉菌在Foz菌落上的定殖情況，確定木霉菌的拮抗系數(shù)和抗生作用級(jí)別[16]，標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表2和表3。

表2拮抗系數(shù)的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

Table 2 Classification criteria for antagonistic coefficients

表3抗生作用級(jí)別

Table3 Antibiotic activity levels

1.9 生防木霉菌對(duì)大姜根腐病的溫室防治試驗(yàn)

將篩選出的木霉菌株在PDA平板上純培養(yǎng)至產(chǎn)孢，刮取新鮮孢子懸浮于無(wú)菌生理鹽水中，血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后，調(diào)整孢子數(shù)分別為 10⁷?10⁶?10⁵CFU/mL ;同樣將Foz孢子數(shù)調(diào)整為 10⁷CFU/mL ，備用。

用無(wú)菌水沖洗大姜種苗根部的土壤，并剪掉部分大姜側(cè)根；將大姜苗浸蘸到 10⁷CFU/mL Foz孢子液中20min ，再將大姜苗移栽到塑料盆缽內(nèi)。將菌落數(shù)分別為 10⁷，10⁶，10⁵CFU/mL 的木霉分生孢子液用無(wú)菌水稀釋100倍配置成生物農(nóng)藥藥液，用 100mL 藥液進(jìn)行灌根處理，每隔7d灌根一次，共處理3次，以無(wú)菌水和多菌靈溶液灌根為對(duì)照。每個(gè)處理供試20盆大姜苗，在藥劑處理后對(duì)大姜苗進(jìn)行常規(guī)水肥管理。最后一次處理后 30d ，調(diào)查各處理大姜根腐病的發(fā)病情況。

按7級(jí)分級(jí)方法逐株調(diào)查，計(jì)算病情指數(shù)、防治效果[17]。發(fā)病嚴(yán)重度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表4。

表4發(fā)病嚴(yán)重程度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

Table 4Grading criteria for severity levels of plant diseases

病情指數(shù)及防病效果按公式（2）～（3）進(jìn)行計(jì)算：

測(cè)量株高及鮮重，根據(jù)公式（4）～（5）計(jì)算增高率和增重率。用 SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件中的Duncan's方法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，以不同大寫(xiě)字母表示各處理間在 plt;0.01 水平上存在極顯著性差異。

1.10 生防木霉菌對(duì)大姜根腐病的小區(qū)防治試驗(yàn)

在前期發(fā)病的大姜種植區(qū)利用生防木霉菌進(jìn)行防治大姜根腐病的小區(qū)防效試驗(yàn)，設(shè)置不同生防木霉菌的單施和復(fù)配施用組、空白對(duì)照組和化學(xué)農(nóng)藥多菌靈對(duì)照組。大姜種植和管理與當(dāng)?shù)卦耘鄺l件一致，調(diào)查和檢測(cè)生防木霉菌對(duì)大姜根腐病的田間生防效果。供試生防木霉菌株為T(mén)W20111、TW20321和TW20323。木霉菌用量均按照活菌數(shù) 2×10⁸CFU/g ，用量 2kg/ 畝（1畝 ≈667m² ）。試驗(yàn)共設(shè)7個(gè)處理組和1個(gè)空白對(duì)照組，菌劑均采用灌根處理方式，具體如表5所示。

表5姜根腐病小區(qū)防治試驗(yàn)處理設(shè)計(jì)

Table 5Control design against ginger root rot for field experiments

2 結(jié)果與分析

2.1 生防木霉菌的篩選結(jié)果

通過(guò)PDA、CMA和SNA純培養(yǎng)和形態(tài)學(xué)觀察，從12份不同區(qū)域的大姜根際土中共分離到木霉菌236株，加上前期保存的代表性木霉菌株—哈茨木霉LTR-2作為對(duì)照，進(jìn)行了對(duì)Foz的抑菌活性篩選，部分抑菌活性較好的木霉菌株見(jiàn)表6。

表6木霉菌株對(duì)尖孢鐮刀菌大姜專化型（Foz）的平板抑制效果及拮抗能力測(cè)定

Table 6Measurement of plate inhibition effect and antagonistic capability of Trichoderma spp. against Fusarium oxysporum f. sp. zingiberi （Foz）

通過(guò)比較表中35株木霉對(duì)Foz的平板抑制能力，篩選出8d抑制率在 80% 以上的木霉8株，分別是：TW20111（ 87.10% ）、TW20319（ 88.71% ）、TW20321（ 95.16% ）、TW20323（ 91.94% ）、TW20330（ 83.87% ）、TW20363（ 80.65% ）、TW21876（ 90.32% ）和TW21990（ 83.87% ），其對(duì)Foz的平板抑菌效果見(jiàn)圖1。

圖1部分生防木霉對(duì)尖孢鐮刀菌大姜專化型（Foz）的平板抑菌活性

Fig.1 Plate inhibition effect of screened Trichoderma spp.against Fusarium oxysporum f.sp. zingiberi （Foz）

由表6抗生作用級(jí)別達(dá)到3級(jí)及以上的木霉菌株11株，分別是TW20239、TW20302、TW20304、TW20313、TW20314、TW20321、TW20328、TW20330、TW20350、TW20397 和LTR-2。拮抗系數(shù)達(dá)到I級(jí)和級(jí)與產(chǎn)孢能力強(qiáng)的木霉菌株8株，分別是 TW2011、TW20319、TW20321、TW20323、TW20325、TW20404、TW20453 和 TW21990。

綜合上述結(jié)果，篩選確定菌株 TW20111、TW20321和 TW20323作為高效防治大姜根腐病的生防木霉，進(jìn)行下一步防效實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

2.2 生防木霉菌的鑒定結(jié)果

根據(jù)形態(tài)學(xué)觀察和ITS、RPB2和TEF1- α_?α∝ 序列的測(cè)序結(jié)果，構(gòu)建了基于MEGA7.0軟件和最大似然法的木霉聯(lián)合系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)（見(jiàn)圖2），經(jīng)鑒定發(fā)現(xiàn)木霉TW20111為深綠木霉（T.atroviride），TW20321和TW20323為哈茨木霉（T.harzianum）。

2.2.1 深綠木霉（T.atroviride）TW20111

菌落在PDA平板上生長(zhǎng)快，菌絲層較厚，致密叢束狀，初期為白色，平坦，后期因產(chǎn)生分生孢子而呈深綠色。產(chǎn)孢區(qū)常排列成同心輪紋狀。菌落背面無(wú)色，有時(shí)呈淺黃色。菌絲透明，有隔，細(xì)胞壁光滑，分生孢子梗由菌絲直立生出，無(wú)色，分枝多，對(duì)生或互生二至三級(jí)分枝，整體像樹(shù)枝;分枝與分生孢子梗近似直角，末端為小梗。小梗瓶形，分生孢子球形或長(zhǎng)橢圓形，表面粗糙，布滿小刺;單胞，靠黏液在小梗上聚集成球狀綠色的分生孢子頭。

2.2.2 哈茨木霉（T.harzianum）TW20321 和TW20323

菌落、菌絲和分生孢子梗的形態(tài)特征基本上與深綠木霉菌相同;兩者的區(qū)別在于后者的分生孢子壁光滑，沒(méi)有刺突。菌落老熟時(shí)暗綠色，反面同色。孢子梗叢束疏松，環(huán)狀排列，主分枝呈樹(shù)狀，其上很多次級(jí)分枝，常常2～3個(gè)一組，直角伸出。整個(gè)分枝系統(tǒng)呈金字塔狀。瓶梗短，基部變細(xì)，中間膨大，以大角度伸出;終極瓶梗長(zhǎng)而細(xì)，5 個(gè)以內(nèi)的瓶梗近似輪狀排列。分生孢子球形，短的倒卵形，基部平截，孢子小（2.8～3.2） μm×（2.5～2.8） μm 。

圖2木霉ITS、RPB2和TEF1- σ?α?α?α?α 序列聯(lián)合的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)

Fig.2The phylogenetic tree of ITS，RPB2，and TEF1 α_?αααα_?ααα_?αααα sequences of Trichoderma spp.

2.3 生防木霉菌對(duì)大姜根腐病的溫室盆栽防效

生防木霉菌（T.atroviride）TW20111、和哈茨木霉菌（T.harzianum）TW20321和 TW20323對(duì)大姜根腐病的溫室防治結(jié)果見(jiàn)表7。三株木霉菌株在溫室條件下對(duì)由Foz引起的大姜根腐病具表現(xiàn)出較好的防治效果，防效分別達(dá)到 77.05%.86.33% 和 82.32% ;且對(duì)大姜株高有顯著的增長(zhǎng)效果，分別為 41.62%，34.52% 和 43.76% ，與多菌靈處理防效 39.50% 相比存在顯著性差異（ plt;0.05 ）;但在增重率上不如多菌靈處理顯著，分別為 163.64% ！146.01% 和 166.16% ，低于多菌靈處理的增重率（ 171.12% ）。

表7木霉菌株對(duì)大姜根腐病的溫室防治效果

Table 7 Biocontrol efficacy of Trichoderma spp. against ginger root rot in greenhouse experiments

注：不同小寫(xiě)字母表示各處理間在 plt;0.05 水平上存在顯著性差異，以不同大寫(xiě)字母表示各處理間在 plt;0.01 水平上存在極顯著性差異。

2.4 生防木霉菌對(duì)大姜根腐病的田間小區(qū)防效

生防木霉菌對(duì)大姜根腐病的田間小區(qū)防治結(jié)果見(jiàn)表8。施用生防木霉菌可以有效降低大姜根腐病的發(fā)病率，其中木霉菌T.atrouiride TW20111單獨(dú)處理對(duì)大姜根腐病的防治效果并不顯著，但與其他兩種木霉復(fù)配后防治效果顯著高于施用單一菌劑（ _plt;0.05） ，其中 TW20111+TW20321 復(fù)配施用對(duì)大姜根腐病的防治效果最好，達(dá)到 68.90% ，高于化學(xué)農(nóng)藥多菌靈處理 63.88% 。其次為 TW20111+TW20323 組合也可達(dá) 60.78% ，上述兩種復(fù)配組合對(duì)大姜根腐病的防治效果均存在顯著性差異（ _plt;0.05） 。

施用生防木霉菌還能顯著提高大姜的各項(xiàng)生長(zhǎng)指標(biāo)，株高和單株產(chǎn)量都與空白對(duì)照存在顯著性差異（ plt;0.05） ，且復(fù)配菌劑施用效果顯著高于單獨(dú)施用一種木霉菌劑（ _plt;0.05） 。 TW20111+TW20321 復(fù)配對(duì)大姜株高和單株產(chǎn)量的促進(jìn)作用最高，分別較對(duì)照組提高了 19.31% 和 27.43% ，與多菌靈處理效果（分別為 18.83% 和 24.57% ）相比，沒(méi)有顯著性差異。這表明 TW20111+TW20321 復(fù)配施用不僅能有效防治大姜根腐病，還能對(duì)大姜產(chǎn)量起到明顯的促進(jìn)作用。

表8木霉菌株處理對(duì)大姜根腐病的田間小區(qū)防治效果

Table 8Biocontrol efficacy of Trichoderma spp. against ginger root rot in field experiments

注：不同小寫(xiě)字母表示各處理間在 plt;0.05 水平上存在顯著性差異，以不同大寫(xiě)字母表示各處理間在 plt;0.01 水平上存在極顯著性差異。

3 討論

由尖孢鐮刀菌引起的大姜根腐病是大姜生產(chǎn)上的主要限制因素之一，嚴(yán)重影響大姜的產(chǎn)量和品質(zhì)。由于鐮刀菌能在土壤中長(zhǎng)期存活，且生姜種植區(qū)同一田塊多年重茬連作的現(xiàn)象很普遍，導(dǎo)致大姜根腐病的防治尤為困難。因此研發(fā)能夠有效防治大姜根腐病的新型生物農(nóng)藥，減少化學(xué)殘留、提高食品安全，是提升大姜產(chǎn)業(yè)的當(dāng)務(wù)之急。本研究從大姜種植區(qū)土壤中分離得到了34株有抑菌活性的木霉，并篩選得到高效拮抗Foz的3株木霉菌株TW20111、TW20321和TW20323，根據(jù)形態(tài)學(xué)觀察和分子生物學(xué)鑒定其分別為深綠木霉T.atroviride 與哈茨木霉T.harzianum。

木霉菌作為一種生物防治劑，已被廣泛用于防治多種作物上尖孢鐮刀菌引發(fā)的根腐病[18]。木霉對(duì)根腐病的防治效果可能由于病原菌株、作物品種、木霉菌株和環(huán)境因素等而有所不同[19]。趙曉彤等[20]研究了長(zhǎng)枝木霉（T.longibrachiatum）SMF2和哈茨木霉（T.harzianum）T39對(duì)引起國(guó)槐根莖腐爛病的尖孢鐮刀菌的抑制效率，比較了不同培養(yǎng)液、培養(yǎng)時(shí)間和萃取溶劑對(duì)木霉代謝產(chǎn)物抑菌活性的影響，明確了 SMF2 和 T39 抑菌活性物質(zhì)的培養(yǎng)條件和提取方法。姚晨虓等[21]分離到3株拮抗煙草尖孢鐮刀菌的木霉菌，棘孢木霉（T.asperelum）Ta-0101、哈茨木霉（T.harzianum）Th-0201和毛簇木霉（T.velutinum）Tv-0207，對(duì)尖孢鐮刀菌的相對(duì)盆栽防效分別為 78.95%.69.73% 和 69.73% ，均高于甲基硫菌靈處理，且對(duì)煙草種子根長(zhǎng)和煙株表現(xiàn)出明顯的促生作用。Karuppiah 等[22]通過(guò)液體共同培養(yǎng)棘孢木霉（T.asperellum）GDFS1009 和解淀粉芽孢桿菌（Bacillusamyloliquefaciens）1841，發(fā)現(xiàn)二者的幾丁質(zhì)酶、 β -1，3-葡聚糖酶、纖維素酶和蛋白酶產(chǎn)量顯著上升，對(duì)禾谷鐮刀菌的拮抗能力顯著增強(qiáng)。

本研究進(jìn)一步通過(guò)室內(nèi)盆栽實(shí)驗(yàn)和田間小區(qū)試驗(yàn)驗(yàn)證了深綠木霉（T.atroviride）TW20111和哈茨木霉（T.harzianum）TW20321、TW20323等3株木霉菌株對(duì)Foz導(dǎo)致的大姜根腐病的防治效果，特別是 TW20111+ TW20321以及 TW20111+TW20323 復(fù)配施用表現(xiàn)出良好的防治效果。Khasto等[23]調(diào)查了綠色木霉（T.viride）和哈茨木霉（T.harzianum）對(duì)尖孢鐮刀菌的抑制作用，結(jié)果顯示對(duì)菌絲的生長(zhǎng)抑制率分別為 68.3% 和 66.7% ，而田間試驗(yàn)則發(fā)現(xiàn)綠色木霉（T.viride）處理后大姜死亡率顯著降低到 4.2% ，病害防治率提高到84.9% 。Rehman 等[24|報(bào)道綠色木霉（T.viride）和哈茨木霉（T.harzianum）具有顯著的協(xié)同效應(yīng)，對(duì)尖孢鐮刀菌菌絲生長(zhǎng)的抑制率達(dá) 87.33% ，高于二者單獨(dú)的 73.33% 和 60.00% ；二者與農(nóng)家糞肥的聯(lián)合應(yīng)用顯著降低了鷹嘴豆枯萎病的發(fā)生率，并提高了植株干重、根長(zhǎng)和籽粒產(chǎn)量。張尹強(qiáng)等[25]研究了棘孢木霉（T.asperelum）PT-29與枯草芽孢桿菌（B.subtilis）S-16馬鈴薯枯萎病主要致病菌尖孢鐮刀菌的抑菌效果，盆栽實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明二者比例為1：1共培養(yǎng)發(fā)酵液組合B1T1的防治效果最佳，達(dá)到 73.44% ，此外B1T1處理的馬鈴薯葉片過(guò)氧化氫酶、超氧化物歧化酶、過(guò)氧化物酶和苯丙氨酸解氨酶活性都明顯高于尖孢鐮刀菌對(duì)照。不同木霉菌株以及木霉與其它相容和/或親和的生防微生物的復(fù)配聯(lián)合，能夠發(fā)揮不同菌株之間的協(xié)同作用，激發(fā)新功能次級(jí)代謝物質(zhì)的表達(dá)、拓寬微生物代謝物質(zhì)的作用靶標(biāo)譜，已成為新型生物農(nóng)藥和生物菌劑的研發(fā)趨勢(shì)。

本研究篩選、鑒定的深綠木霉（T.atroviride）TW2011與哈茨木霉（T.harzianum）TW20321和 TW20323對(duì)尖孢鐮刀菌大姜專化型具有較強(qiáng)的拮抗作用，溫室盆栽實(shí)驗(yàn)和田間小區(qū)試驗(yàn)對(duì)大姜根腐病表現(xiàn)出良好的防病與促生效果，特別是3株生防木霉菌株的兩兩復(fù)配效果顯著高于單獨(dú)施用，為大姜根腐病高效生防木霉菌劑的研發(fā)奠定了基礎(chǔ)。

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