基于腺苷酸活化蛋白激酶/Unc-51樣自噬激活激酶1信號通路探討高原低氧適應對肝缺血再灌注損傷大鼠模型的保護作用

Abstract：ObjectieToinvestigateteprotetiveefectofigaltudehypoxialimatizatiogaisthpaticishemia-pefusion injury（IRI）iats，aswellastemechansmofactionofhghaltitudehypoxiaalimatizationinactivatingautophagyMethodA totalof 56male Sprague-Dawleyratswererandomlydividedintoplainsham-operationgroup（P-Sgroup），plainmodel group（P-M group），acutehigh-altitude hpoxiasham-operationgroup（AHH-Sgroup），acutehig-altitudehypoxiamodelgroup（AHH-Mgroup）， high-litudehypoxiaacimatizationsham-operationgoup（H-Sroup），igaltdehypoxiaacimatizationmodelgoup（HHA-M group），andhigh-alitudehypoxiaaclimatizationmodelgroupwiththeadenosinemonophosphate-activatedprotein kinase（AMPK） inhibitorcompoudC（HHA-M-CCgroup），with8ratsineachgroup.Theratsinteacutehigh-altitudehypoxia groupsandthehighaltitudehypoxiaaclimatizationgroupswereplacedinalow-presureoxygenchambeatanaltitudeof5Oometersfor1wkand12 weks，respectively；theratsinthesham-operationgroupswere givenlaparotomytoexposetheportalvein withoutvascularclamping; the rats in the HHA-M-CC group were given abdominal injection of 20mg/kg CC at 1 hour before surgery，while those in the other groups weregiveninjectionofanequalvolumeofnormalsaline.Anautomaticbiochemicalanalyzer wasusedtomeasurethelevelsof liver functionparametersincludingalanineaminotransferase（ALT），aspartateaminotransferase（AST），andtotalbilirubin（TBil）；HE staining wasusedtoobserveliverhistopathologicalchanges；transmisionelectronmicroscopywasusedtoobservetheforationof autophagosomes in liver issue；RT-qPCR wasused tomeasure themRNA expresionlevelsof AMPKand Unc-51likeautophagy activatingkinase1（ULK1）inlivertissue；Western Blotwasused tomeasuretheprotein expresionlevelsofphosporylated AMPK（p-AMPK），phosphorylatedULK1（p-ULK1），Beclin-1，and microtubule-associated protein1lightchain3Ⅱ（LC3）. Ananalysisofvariancewasusedforcomparisonofcontinuousdatabetweenmultiple groups，andtheleastsignificant diference t 1 test was sued forcomparison between two groups.ResultsCompared withthe AHH-Mand HHA-M-CC groups，the HHA-M group had significantly reductions in the levels of ALT，AST，and TBil （all Plt;0.05 ），alleviation of liver histopathological injury，a significant reduction in Suzuki score （all P lt;0.05），a reduction in the degree of abnormal morphological structure of hepatocytes undertransmisioelectronmicroscopy，andsignificantincreases inthenumberofautophagosomes，themRNAexpressonlevels of AMPK and ULK1（all Plt;0.05 ），and the protein expression levels of p-AMPK，p-ULK1，Beclin-1，and LC3 II（all P lt;0.05）. ConclusionHigh-altitude hypoxiaaclimatizationcanalleviate HRIinSDratsbyactivating theAMPK/ULK1signaling pathway and enhancing autophagy in hepatocytes.

Keywords：Hypoxia；Reperfusion Injury；Autophagy；Rats，Sprague-Dawley

Research funding：The ManagementProjectofGeneral HospitalofWesternTheaterCommandofPLA（2021-XZYG-A12）；Sichuan Provincial Natural Science Foundation Project （41C4137G）

全球有超過1.4億人口生活在高原地區[1]，其中最顯著的挑戰是由于海拔上升、氣壓下降形成的持續性低氧環境[2]。在高原地區，人體被迫以多種方式適應這種低氧環境，這與氧化應激、線粒體功能障礙、細胞凋亡和細胞自噬等機制密切相關[3-6]。目前，高原低氧環境下肺、腦及心血管疾病已受到廣泛研究[7-9]，而關于肝臟疾病的研究卻鮮有報道。

肝缺血再灌注損傷（hepaticischemia-reperfusioninjury，HIRI）是肝移植、創傷、切除及失血性休克后肝功能障礙和肝衰竭的主要原因，其病理生理機制包括缺氧誘導的細胞損傷和遲發性損傷導致的炎癥通路激活[10]。這說明高原低氧環境可能會影響HIRI的病理生理機制。自噬是將自身細胞器或細胞質中的蛋白包被形成囊泡，通過自噬溶酶體，使囊泡內容物降解的過程[11]，已被證實為機體低氧適應的重要調節機制[12]，并在肝臟、腎臟、下肢及心肌等組織的缺血再灌注損傷中發揮保護作用[13-16]。然而，目前關于高原低氧環境下HIRI的研究較少，尤其是自噬在其中的具體作用及機制研究未見報道。因此，本研究通過模擬高原環境，對實驗大鼠進行低氧預處理，建立HRI模型，以探索高原低氧適應調控腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine 5^′ -monophosphate-activatedproteinkinase，AMPK）/Unc-51樣自噬激活激酶1（Unc-51 like autophagy activating kinase1，ULK1）信號通路對肝臟組織的保護作用。

1材料與方法

1.1實驗動物成年雄性SD大鼠56只，質量 （180±10）g 4～6周齡，購于北京斯貝福生物技術有限公司，實驗動物生產許可證號：SCXK（京）2024-0001;思諾實驗動物使用許可證號：SYXK（川）2021-246。飼養于中國人民解放軍西部戰區總醫院實驗動物中心。大鼠在 24～26°C /12h 光照晝夜循環的室內環境中，適應性喂養1周后進行實驗。

1.2藥品與試劑AMPK抑制劑復合物C（批號：HY-13418A）購自美國MCE公司；ALT（批號：140123019）AST（批號：140223014）等試劑盒購自深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司；TBil試劑盒購自貝克曼庫爾特國際貿易（上海）有限公司；蘇木精和伊紅（HE）染色試劑盒（批號：YE2080）購自合肥博美生物科技有限責任公司；RNA抽提Trizol（批號：19221ES50）購自上海YEASEN公司；反轉錄試劑盒（批號：RR047A）購自北京寶日醫生物技術有限公司；BCA蛋白定量試劑盒（批號：PO009）購自上海Beyotime公司;PVDF膜（批號：ISEQ00010）購自美國Sigmaaldrich公司；抗體磷酸化AMPK（p-AMPK）（批號：AF3423）購自上海

Affinity公司;抗體磷酸化ULK1（p-ULK1）（批號：80218-1-RR）、LC3B（批號：18725-1-AP）、Beclin-1（批號：11306-1-AP）購自武漢Proteintech公司；內參 β -Actin（批號：AC026）購自武漢Abclonal公司。

1.3儀器設備低壓氧艙（型號：dyc-3280）購自貴州風雷航空軍械有限責任公司；動物用生化分析儀（型號：BS-240VET）購自深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司；數碼三目攝像顯微鏡（型號：BA210Digital）購自廈門麥克奧迪實業集團有限公司：數字切片掃描儀（型號：P250FLASH）購自濟南丹吉爾電子有限公司；透射電子顯微鏡（型號：JEM-1400FLASH）購自日本電子JEOL；實時熒光定量儀（型號：QuantStudioTM3）購自美國ThermoFisher儀器有限公司；垂直電泳槽（型號：JY-SCZ4 I+ 購自北京君意東方電泳設備有限公司。

1.4實驗方法

1.4.1動物造模采用隨機數字表法，將56只SD雄性大鼠隨機分為平原假手術組（P-S）、平原模型組（P-M）、急性高原低氧假手術組（AHH-S）、急性高原低氧模型組（AHH-M）高原低氧適應假手術組（HHA-S）、高原低氧適應模型組（HHA-M）以及含AMPK抑制劑復合物C的高原低氧適應模型組（HHA-M-CC），每組8只。急性高原低氧組和高原低氧適應組分別將大鼠置于海拔5000米的低壓氧艙中1周和12周。HHA-M-CC組術前1h行腹腔注射 20mg/kg 劑量AMPK抑制劑復合物 C^[17] ，其余組注射等體積生理鹽水。預處理結束后，通過吸入 3% 的異氟醚對大鼠進行麻醉。假手術方式為剖腹手術暴露肝門靜脈，未夾閉血管;HIRI模型建立方法參考相關文獻[18]。建模結束后采集血液和肝臟標本進一步分析。

1.4.2大鼠肝功能指標檢測采用全自動生化分析儀檢測大鼠血清ALT、AST、TBil水平，具體操作步驟嚴格按照說明書進行。

1.4.3HE染色觀察肝組織病理變化取各組大鼠肝組織，用 4% 多聚甲醛溶液固定，經脫水、石蠟包埋、切片、脫蠟后，行HE染色，封片后于光學顯微鏡下觀察肝組織病理變化。采用Suzuki組織學分級評估其組織病理學損傷。

1.4.4透射電鏡觀察肝細胞超微結構取各組大鼠新鮮肝組織約 0.1mm³ ，經 3% 戊二醛溶液預固定 ，1% 四氧化俄溶液再固定、脫水、滲透、包埋、超薄切片（厚度 50nm ），再經醋酸鈾（ 10～15min 和枸橡酸鉛 （1～2min） 染色后，于JEM-1400FLASH透射電鏡下觀察并采集圖像。

1.4.5RT-qPCR法檢測肝組織AMPK、ULK1mRNA表達按照說明書，使用TRIzol試劑從每組小鼠肝組織中提取總RNA。根據操作說明，使用逆轉錄試劑盒生成cDNA。反應條件如下： 95^°C 預變性 5min，95T 變性40個循環 15s，60^°C 退火延伸 34s 。使用 2^-ΔΔCt 方法計算相對基因表達水平（ β -Actin作為參考基因）。引物由上海生工生物工程技術服務有限公司合成，詳細信息見表1。

表1引物序列 Table1 Primer sequence

1.4.6WesternBlot檢測肝組織中p-AMPK、p-ULK1、Beclin-1、微管相關蛋白1輕鏈3Ⅱ型 LC3I ）蛋白的表達取各組肝組織，按照全蛋白提取試劑盒說明書步驟提取總蛋白，采用BCA法測定總蛋白濃度，取 40μg 總蛋白上樣，行SDS-PAGE電泳，轉移至PVDF膜上，加入 5% 脫脂奶粉室溫封閉 ^2h ；加入兔抗 p -AMPK（ 1：2 000 ， p -ULK1（1：2000）Beclin-1（1：2000）、LC3（1：2000）多克隆抗體 4^°C 孵育過夜；次日TBST洗膜3次，加入山羊抗兔二抗（1：5.000）室溫孵育 ^1h ；TBST洗膜3次，ECL曝光顯影，應用UVPBioSpectrum410成像系統曝光并分析目的條帶灰度值，使用ImageJ軟件分析目的蛋白相對表達量。

1.5統計學方法 使用SPSS25.0和GraphPad Prism9.0軟件進行統計分析。計量資料采用 表示，多組間比較采用方差分析，進一步兩兩比較采用LSD-t檢驗。 Plt;0.05 為差異有統計學意義。

2結果

2.1高原低氧環境對大鼠血清生化水平的影響與P-M組和HHA-M組比較，AHH-M組血清ALT、AST、TBil水平明顯升高（ P 值均 lt;0.05 ）；與HHA-M組比較，HHA-M-CC組血清ALT、AST、TBil水平明顯升高（ P 值均 lt;0.05 ），接近AHH-M組（圖1）。

2.2高原低氧環境對大鼠肝組織細胞形態的影響 HE染色結果顯示，假手術組（S組）肝細胞形態基本正常，模型組（M組）可見肝細胞廣泛壞死、炎性細胞浸潤及肝竇內淤血等，其中AHH-M組大鼠肝組織損傷程度最為嚴重；采用Suzuki評分來評估其組織病理學損傷可以發現，與P-M組（ 2.33±0.58 和HHA-M組（ 3.17±0.29 比較，AHH-M組 5.50±0.50） 病理損傷程度明顯加重（ P 值均 lt;0.05 ）；與HHA-M組比較，HHA-M-CC組（ 4.50±0.50 病理損傷程度明顯加重 （Plt;0.05 ，接近AHH-M組（圖2）。

2.3高原低氧環境對大鼠肝細胞超微結構變化的影響透射電鏡觀察結果顯示，P-M組肝細胞形態結構較異?；蜉p度異常，且不含自噬；AHH-M組肝細胞結構明顯異常，且不含自噬;HHA-M組肝細胞形態結構較異?；蜉p度異常，且含有大量自噬；HHA-M-CC組肝細胞形態結構異常且含有較多自噬（圖3）。

2.4高原低氧環境對大鼠AMPK、ULK1mRNA表達的影響與P-M組和AHH-M組比較，HHA-M組AMPK、ULK1的mRNA表達水平明顯升高（ P 值均 lt;0.05 ；與HHA-M組比較，HHA-M-CC組AMPK、ULK1的mRNA表達水平明顯下降（ P 值均 lt;0.05 （圖4）。

圖1各組大鼠血清生化水平比較

圖2各組大鼠肝組織的病理變化（HE染色， ×400 ）

圖3透射電鏡觀察肝臟自噬體（TEM， ×200000 ）

Figure 3 Observing autophagosome by transmission electron microscope（TEM， ×20000 ）

圖4各組大鼠肝組織AMPK/ULK1信號通路mRNA相對表達量

2.5高原低氧環境對大鼠AMPK/ULK1信號通路及自噬相關蛋白的影響與P-M組和AHH-M組比較，HHA-M組p-AMPK ?p -ULK1、Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白表達水平明顯升高（ P 值均 lt;0.05 ）；與HHA-M組比較，HHA-M-CC組p-AMPK、p-ULK1、Beclin-1、LC3II蛋白表達水平明顯下降（ P 值均 lt;0.05 （圖5）。

3討論

缺血再灌注是肝手術或肝移植中不可避免的環節，該過程中難免會造成肝細胞損傷，導致術后出現肝炎癥、損傷甚至嚴重的肝功能障礙，在極端情況下，這些損傷有可能演進為多器官功能衰竭甚至死亡[19]。其病理生理機制包括缺氧誘導的細胞損傷和遲發性疾病以及損傷引起的炎癥通路激活[20-24]。目前，高原環境對HIRI的影響及其機制的研究尚少?？紤]到全球超過1.4億人口居住在高原環境中[]，其低溫、低壓和低氧的特殊環境可能顯著影響HIRI的病理生理機制。因此，探究這一環境下的相互作用及其機制對于改善高原環境下的HIRI具有重要的研究意義。

ALT、AST是臨床常被用來評價肝功能的2項指標。正常情況下，ALT、AST在血清中的水平很低，當肝細胞遭到破壞時，ALT和AST被釋放入血，在一定范圍內，血清中轉氨酶的水平越高表示肝細胞損傷程度越重。在本研究中，相較于S組，M組大鼠ALT、AST水平較高且肝組織損傷程度較重，提示HIRI模型制備成功。與P-M組比較，AHH-M組血清中ALT、AST水平升高，肝組織損傷程度加重，提示急性高原低氧環境可以加重HIRI；與AHH-M組比較，HHA-M組血清中ALT、AST水平降低，肝組織損傷程度減輕，提示高原低氧適應可以緩解HIRI。

在高原環境中，人類面臨多種挑戰，尤其是由海拔升高和氣壓下降引發的低氧顯得尤為突出[2，19]。人體在高原低氧暴露時會經歷一系列生理及病理變化，以適應低氧環境并保持對組織的氧氣供應[25]。急性高原低氧暴露期間，組織內的血液氧分壓降低，導致氧自由基和活性氧增加，觸發氧化應激過程。這些過程會導致內皮細胞脂質過氧化、酶羥基化增加，從而損害內皮細胞并增加炎癥因子的生成，可能引發嚴重的缺氧應激損傷[26-27]。高原低氧適應后，身體通過一系列代償反應恢復機能，能有效抵抗各種缺氧損害。已有研究表明，高原低氧適應能提高機體自噬水平，從而減輕心臟缺血再灌注損傷[28]。為了進一步探索高原低氧適應緩解HIRI的機制，本研究采用透射電鏡觀察肝細胞超微結構的改變，發現HHA-M組自噬體數量相較于其余組尤為突出，提示其機制可能與自噬體的產生緊密相關。

圖5大鼠肝臟自噬相關Beclin-1、LC3ⅡI和AMPK/ULK1信號通路相關蛋白表達及半定量分析 igure 5Expression of AMPK/ULK1 signaling pathway and autophagy related proteins in each group of rat

自噬是一種通過形成囊泡將自身細胞器或細胞質中的蛋白質包裹起來，再通過自噬溶酶體降解囊泡內容物的過程，是細胞內蛋白質降解的主要途徑[1129-30]。自噬在各種缺血再灌注損傷中扮演關鍵角色[31-34]，并被認為對HIRI具有保護作用。通過使用遺傳或化學方法來阻斷或增加自噬水平，在調節肝細胞功能和調節肝臟病變方面發揮了前所未有的作用[35-36]。研究表明，高原低氧適應可通過調節AMPK相關通路發揮多種作用[37]。作為肝臟能量代謝的核心調節因子，AMPK不僅促使合成代謝向分解代謝的轉變，還參與內質網應激和自噬的調節[38]。據報道，AMPK激活能夠誘導ULK1去磷酸化，使ULK1與自噬相關基因持續交互，從而觸發自噬[39]。本研究發現，高原低氧適應可緩解HIRI并增強肝組織自噬。這表明高原低氧適應對HIRI的保護作用至少部分依賴于自噬的激活。為了驗證AMPK/ULK1通路是否參與了高原低氧適應對HIRI的保護作用，本實驗對大鼠預注射AMPK抑制劑，隨后再進行模型建立。發現與HHA-M組比較，HHA-M-CC組ALT、AST、TBil水平顯著升高，肝組織損傷程度加重，自噬體數量減少，自噬相關蛋白Beclin-1、LC3II以及AMPK/ULK1通路蛋白表達水平降低。進一步表明，急性高原低氧可能對大鼠肝組織的自噬功能產生可逆性損害，從而降低其對HIRI的抵抗能力。然而，隨著大鼠逐漸適應高原低氧環境，自噬信號通路得以重建并進入高度響應狀態，這使得大鼠對HIRI的抵抗能力顯著增強。

綜上所述，本研究首次揭示了高原低氧適應通過AMPK/ULK1通路調控自噬，從而在保護HIRI方面發揮關鍵作用也為高原低氧適應環境下緩解HIRI的藥物提供了新的靶點。未來仍需更深人的研究來探討是否存在其他關鍵作用路徑，以及這些路徑間的潛在互動。筆者計劃在進一步研究中篩選出關鍵的自噬基因，獲得正確的KO基因，最終解釋高原低氧適應在保護HIRI中的分子機制。

倫理學聲明：本研究方案于2024年1月15日經由中國人民解放軍西部戰區總醫院倫理委員會審批，批號：2023ky080-1，符合實驗室動物管理與使用準則。

利益沖突聲明：本文不存在任何利益沖突。

作者貢獻聲明：夏鑫負責實驗操作，整理數據，撰寫文章；雷寰、羅豫川、林治宇負責指導實驗和寫作，分析數據；汪濤、陳儒德負責實驗設計，數據分析，擬定寫作思路，修改文章及定稿。

參考文獻：

[1]KHURANAP，GUPTAA，SUGADEVR，etal.HAHmiR.DB：Aserver platformfor high-altitude humanmiRNA-genecoregulatorynetworks and associated regulatory circuits[J].Database（Oxford），2020，2020： baaa101.DOl：10.1093/database/baaa101.

[2]BIAN SZ， ZHANG JH，GAO XB，et al.Risk factors for high-altitude headache upon acute high-altitude exposure at 3700m in young Chinese men：A cohort study[J].J Headache Pain，2013，14（1）：35. DOI： 10.1186/1129-2377-14-35.

[3]DONKOR N，GARDNER JJ，BRADSHAW JL，et al. Ocular inflammationandoxidativestressasaresultofchronic intermittenthypoxia： Aratmodel of sleepapnea[J].Antioxidants（Basel），2024，13（7）： 878.DOl： 10.3390/antiox13070878.

[4]MIALET-PEREZ J， BELAIDI E. Interplay between hypoxia inducible Factor-1and mitochondria incardiacdiseases[J].Free Radic Biol Med，2024，221： 13-22. DOl：10.1016/j.freeradbiomed.2024.04.239.

[5]ZHOU Y，HE LN，WANG LN，et al.Human amniotic mesenchymal stromal cell-derived exosomes promote neuronal function by inhibiting excessive apoptosis in a hypoxia/ischemia-induced cerebral palsy model： A preclinical study[J].Biomed Pharmacother， 2024，173：116321. DOl：10.1016/j.biopha.2024.116321.

[6]MARTINEZ-CANTON M，GALVAN-ALVAREZV，GALLEGO-SELLES A，etal.Activation of macroautophagyandchaperone-mediated autophagyin humanskeletal muscleby high-intensityexercise innormoxiaand hypoxiaandafterrecoverywithorwithoutpost-exercise ischemia[J].Free Radic Biol Med，2024，222：607-624.DOl：10.1016/j. freeradbiomed.2024.07.012.

[7]ALSUP C，LIPMAN GS，POMERANZ D，etal. Interstitial pulmonary edemaassessedby lung ultrasound onascent to high altitude and slightassociationwith acute mountain sickness：A prospective observationalstudy[J].HighAltMedBiol，2019，20（2）：150-156.DOl：10.1089/ ham.2018.0123.

[8]LI WH，LI YX，RENJ. High altitude hypoxia on brain ultrastructure of rats and Hsp70 expression changes[J].Br J Neurosurg， 2019，33（2）： 192-195.DOl：10.1080/02688697.2018.1519108.

[9]FENGZL，ZHAOT，CHENGX，etal.Effects of simulated high-altitude hypobaric hypoxia on cardiac structure and function in rats[J].Chin J Appl Physiol，2019，35（2）：173-177，4. DOl： 10.12047/j.cjap.5751. 2019.038. 馮振龍，趙彤，成祥，等.模擬高原低壓低氧環境對大鼠心臟結構和功能 影響[J].中國應用生理學雜志，2019，35（2）：173-177，4.DOI：10.12047/ j.cjap.5751.2019.038.

[10]QU XY，YANG T，WANG X，et al. Macrophage RIPK3 triggers inflammation and cell death via the XBP1-Foxo1 axis in liver ischaemiareperfusion injury[J]. JHEP Rep，2023，5（11）：100879.DOl：10.1016/j. jhepr.2023.100879.

[11]WANG JH，AHN IS，FISCHER TD，et al.Autophagy suppresses agedependent ischemia and reperfusion injury in livers of mice[J].Gastroenterol0gy，2011，141（6）：2188-2199.e6.DOl：10.1053/j.gastro. 2011.08.005.

[12] LIU JJ， HAO HJ， HUANG H， et al. Hypoxia regulates the therapeutic potential of mesenchymal stem cels through enhanced autophagy [J].Int JLow Extrem Wounds，2015，14（1）： 63-72.DOl：10.1177/15347 34615573660.

[13]FANWS，HAND，SUN ZC，et al.Endothelial deletion of mTORC1 protects against hindlimb ischemia in diabetic mice via activation of autophagy，attenuation of oxidative stressand alleviation of inflammation[J].Free Radic Biol Med，2017，108：725-740.DOl：10.1016/.freeradbiomed.2017.05.001.

[14]DELBRIDGE LMD，MELLOR KM，TAYLOR DJ，etal.MyoCardial stress and autophagy： Mechanisms and potential therapies[J]. Nat Rev Cardiol，2017，14（7）： 412-425.DOl： 10.1038/nrcardio.2017.35.

[15]DAl SH，CHEN T，LI X，et al. Sirt3confers protection against neuronal ischemiaby inducingautophagy：Involvement of the AMPK-mTOR pathway[J].Free Radic Biol Med，2017，108：345-353.DOl：10.1016/j. freeradbiomed.2017.04.005.

[16]PUT，LIAO XH，SUNH，etal.Augmenterofliver regenerationregulates autophagy inrenal ischemia-reperfusion injury via the AMPK/mTOR pathway[J].Apoptosis，2017，22（7）：955-969.DOl：10.1007/s10495- 017-1370-6.

[17]MOHAMED DZ，EL-SISI AEE，SOKAR SS，et al. Targeting autophagy to modulate hepatic ischemia/reperfusion injury：A comparative study betweenoctreotide andmelatoninasautophagy modulators through AMPK/PI3K/AKT/mTOR/ULK1and Keap1/Nrf2 signaling pathways in rats [J].EurJPharmacol，2021，897：173920.DOl：10.1016/j.ejphar.2021. 173920.

[18] LIGGETT JR，KANG JM，RANJIT S，et al. Oral N-acetylcysteine decreases IFN- γ production and ameliorates ischemia-reperfusion injury in steatotic livers[J].Front Immunol，2022，13：898799.DOl：10.3389/ fimmu.2022.898799.

[19]OLTHOF PB，van GOLEN RF，MEIJER B，et al.Warm ischemia timedependent variationin liver damage，inflammation，and functionin hepatic ischemia/reperfusion injury[J].Biochim Biophys Acta Mol Basis Dis，2017，1863（2）：375-385.DOl： 10.1016/j.bbadis.2016.10.022.

[20].CARDINALJ，PANPH，TSUNGA.Protective roleof cisplatin in ischemic liverinjurythroughinductionofautophagy[J].Autophagy，2oo9，5（8）： 1211-1212. DOl： 10.4161/auto.5.8.9972.

[21]RAUTOU PE， MANSOURI A， LEBREC D，et al. Autophagy in liver diseases[J].JHepatol，2010，53（6）：1123-1134.DOl： 10.1016/jhep. 2010.07.006.

[22]RICKENBACHER A，JANG JH，LIMANI P，et al. Fasting protects liver from ischemic injury through Sirt1-mediated downregulation of circulating HMGB1in mice[J].JHepatol，2014，61（2）：301-308.DOI： 10.1016/j.jhep.2014.04.010.

[23] WANG DW， MA Y，LI ZT，et al. The role of AKT1 and autophagy in theprotective effect of hydrogensulphideagainst hepatic ischemia/ reperfusion injury in mice[J].Autophagy，2012，8（6）： 954-962.DOI： 10.4161/auto.19927.

[24]HU J， ZHU XH， ZHANG XJ，et al. Targeting TRAF3 signaling protectsagainst hepatic ischemia/reperfusions injury[J].J Hepatol，2016， 64（1）：146-159. DOl： 10.1016/j.jhep.2015.08.021.

[25]SCHOENE RB.Ilnesses at high altitude[J]. Chest，2008，134（2）： 402- 416.DOl： 10.1378/chest.07-0561.

[26] IRARRAZAVAL S， ALLARD C，CAMPODONICO J， et al. Oxidative stress inacute hypobaric hypoxia[J].HighAlt Med Biol，2017，18（2）： 128-134. DOl：10.1089/ham.2016.0119.

[27]YUHAl GU，ZHEN Z. Significance of the changes occurring in the levelsof interleukins，SODand MDA inratpulmonary tissue followingexposure to different altitudesand exposure times[J].ExpTher Med，2015，10（3）：915-920.DOl：10.3892/etm.2015.2604.

[28]HUYJ，SUN Q，LI ZP，etal.Highbasal level of autophagy in high-altituderesidentsattnuates myocardial ischemia-reperfusion injury[J].J Thorac Cardiovasc Surg，2014，148（4）：1674-1680.DOl：10.1016/j jtcvs.2014.03.038.

[29]KANG JW，CHO HI，LEE SM.Melatonin inhibits mTOR-dependent autophagy during liver ischemia/reperfusion[J].Cell Physiol Biochem， 2014，33（1）：23-36.DOl：10.1159/000356647.

[30]CZAJA MJ. Functions of autophagy in hepatic and pancreatic physiologyand disease[J].Gastroenterology，2011，140（7）：1895-1908. DOl： 10.1053/j.gastro.2011.04.038.

[31]XIN DQ，CHU XL，BAl XM，et al.L-Cysteine suppresses hypoxiaischemia injury in neonatal mice by reducing glial activation，promoting autophagic flux and mediating synaptic modification via formation[J].Brain Behav Immun，2018，73：222-234.DOl：10.1016/j. bbi.2018.05.007.

[32]SONG DD，ZHANG TT，CHEN JL，et al. Sphingosine kinase 2 activates autophagy and protects neurons against ischemic injury through interactionwith Bcl-2via itsputativeBH3domain[J].Cell DeathDis， 2017，8（7）：e2912. DOl：10.1038/cddis.2017.289.

[33]XIEY，JIANG DF，XIAO J，et al. Ischemic preconditioning attenuates ischemia/reperfusion-induced kidney injurybyactivatingautophagy via the SGK1 signaling pathway[J].Cell Death Dis，2018，9（3）：338. DOI：10.1038/s41419-018-0358-7.

[34]ZHENG Z，ZHANGL，QUY，etal.Mesenchymal stem cells protect against hypoxia-ischemia brain damage by enhancing autophagy through brainderived neurotrophic factor/mammalin target of rapamycin signaling pathway[J].Stem Cells，2018，36（7）：1109-1121.DOl： 10.1002/stem.2808.

[35]HU YY，ZHANG X，LUO Y，et al.Advances in the protective mechanism andclinical implicationsofautophagyin liverfailure[J].JClin Hepatol， 2023，39（10）：2485-2490.DOl：10.3969/j.issn.1001-5256.2023.10.030. 胡洋洋，張興，羅越，等.自噬對肝衰竭的保護作用機制與臨床價值[J]. 臨床肝膽病雜志，2023，39（10）：2485-2490.DOl：10.3969/j.issn.1001- 5256.2023.10.030.

[36]PAN M，SHl XY. Role of mitophagy in the development and progression of liver-related diseases[J].JClinHepatol，2024，40（2）：413-418.DOl： 10.12449/JCH240232. 潘萌，史曉燕.線粒體自噬在肝臟相關疾病發生發展中的作用[J].臨床 肝膽病雜志，2024，40（2）：413-418.DOI：10.12449/JCH240232.

[37]PEI CX，SHENZR，WUYC，etal.EleutherosideB pretreatmentattenuates hypobaric hypoxia-induced high-altitude pulmonaryedema by regulating autophagic flux via the AMPK/mTOR pathway[J].Phytother Res，2024，38（12）：5657-5671.DOl：10.1002/ptr.8333.

[38]STEINBERG GR， HARDIE DG. New insights into activation and functionof theAMPK[J].NatRevMol CellBiol，2023，24：255-272.DOI： 10.1038/s41580-022-00547-x.

[39]GUOF，WENWL，MI ZP，etal.NRSN2 promotes themalignant behavior of HPV-transfected laryngeal carcinoma cels through AMPK/ULK1pathwaymediatedautophagyactivation[J].Cancer Biol Ther，2024，25（1）： 2334463. DOl： 10.1080/15384047.2024.2334463.

收稿日期：2024-12-01：錄用日期：2025-01-20本文編輯：王亞南