酶解羊毛粉代魚粉補(bǔ)雙蛋氨酸對(duì)大口黑鱸肝臟指標(biāo)的影響

關(guān)鍵詞：大口黑鱸（Micropterussalmoides）；包膜蛋氨酸；氧化應(yīng)激；脂質(zhì)代謝中圖分類號(hào)：X954；F326.4 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1004—6755（2025）08-0075—04

Abstract：To investigate the effects of supplementing crystalline methionine or coated methionine in diets where enzymatically hydrolyzed wool powder replaces fishmeal on hepatic biochemical parameters in Micropterus salmoides ，three experimental groups were established： the control groups （Do） contained 49% fishmeal，the second group （Dl） partial replacement of fishmeal with enzymatically hydrolyzed wool powder+crystalline methionine ，and the third group （D5） partial replacement of fishmeal with enzymatically hydrolyzed wool powder + coated methionine. Results showed ：compared to Do， the Dl group exhibited significantly reduced hepatic levels of total protein（TP），total antioxidant capacity（T-AOC），superoxide dismutase（SOD），and catalase（CAT）（ Plt;0. 001 ），alongside significantly elevated triglyceride（TG）and malondialdehyde（MDA）levels（ Plt;0， 01 ）.Nosignificant differences were observed in total cholesterol（T-CHO），glucose（GLU），alkaline phosphatase（AKP）， or acid phosphatase（ACP）（ Pgt;0.05 .Compared to D1，the D5 group demonstrates significantly increased TP，T-AOC，SOD，and CAT levels （ Plt;0.001 ）with significantly decreased TG and MDA levels（ Plt;0 . 01）. Similarly，T- CHO，GLU，AKP，and ACP showed no significant changes （ Pgt;0.05 . Conclusion，supplementation with coated methionine effectively alleviated oxidative stress and lipid metabolism disorders in Micropterus salmoides induced by partial replacement of fishmeal with enzymatically hydrolyzed wool powder.

Key words： Micropterus salmoides ; coated methionine; oxidative stress; lipid metabolism

大口黑鱸（Micropterussalmoides）對(duì)飲食蛋白有很高的要求（主要來自魚肉），因?yàn)轸~類更喜歡利用氨基酸（AAS），而不是葡萄糖和脂肪酸，作為主要的代謝燃料[1]。魚粉（FM）是水產(chǎn)飼料中最重要的飼料蛋白來源之一[2]。國際上超過2/3的FM被用作水產(chǎn)飼料，在中國約占 60%^[3] 0我國是畜禽大國，每年都會(huì)因?yàn)橥涝桩a(chǎn)生大量畜禽毛發(fā)，而家禽羽毛中粗蛋白含量非常高，僅有部分水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物必需氨基酸的含量較低，而在其他生物體活動(dòng)不可或缺的氨基酸種類及其含量上均高于魚粉[4]，羽毛粉雖難消化但可少量應(yīng)用于配合飼料，但部分魚類對(duì)不同方法處理后的羽毛粉利用與消化吸收能力存在明顯的差異性，比如水解和酶解[5]。不良的飲食易導(dǎo)致大口黑鱸發(fā)生氧化應(yīng)激和代謝紊亂，進(jìn)而影響經(jīng)濟(jì)效益。

在FM替代方案中，往往因替代蛋白的氨基酸不平衡而導(dǎo)致養(yǎng)殖動(dòng)物生長率較低，在魚類營養(yǎng)的視角下，只有在飲食中補(bǔ)充必不可少的氨基酸時(shí)，這種替代方案才有效。蛋氨酸是替代蛋白的第一限制性氨基酸，相較于晶體蛋氨酸，包膜蛋氨酸具有良好的緩釋效果，可持續(xù)維持氨基酸的供應(yīng)。因此，本研究旨在探究酶解羊毛粉替代魚粉的配合飼料中補(bǔ)充晶體和包膜兩種形式蛋氨酸對(duì)大口黑鱸肝臟生化指標(biāo)的影響，以期通過尋找飼料替代物及添加蛋氨酸等來提高大口黑鱸的產(chǎn)能及經(jīng)濟(jì)效益。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

大口黑鱸購自天津市某養(yǎng)殖場(chǎng)。酶解羊毛粉為實(shí)驗(yàn)室自制，蛋氨酸購自贏創(chuàng)特種化學(xué)公司，酶活試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

本試驗(yàn)是以魚粉、酶解羊毛粉、豆粕以及不同形態(tài)的蛋氨酸為主要蛋白來源，制備了3種不同的飼料，主要的飼料成分見表1。設(shè)置3個(gè)處理組，對(duì)照組含 49% 魚粉（命名為DO），第二組使用酶解羊毛粉替代部分魚粉 + 晶體蛋氨酸（命名為D1），第三組使用酶解羊毛粉替代部分魚粉 + 包膜蛋氨酸（命名為D5）。

選取60尾初始體質(zhì)量 （10，27±0.02）g 均質(zhì)健康的個(gè)體，隨機(jī)分為3組（20尾/組），養(yǎng)殖周期10周。嚴(yán)格構(gòu)建符合大口黑鱸生理需求的養(yǎng)殖環(huán)境。

表1飼料組成 （%）

注：其他*，包括面粉、維生素預(yù)混料、礦物質(zhì)預(yù)混料等含量一致成分。

1.3樣品采集和肝臟生化指標(biāo)測(cè)定

試驗(yàn)全程遵循標(biāo)準(zhǔn)化生物樣本制備流程：無菌采集肝臟組織進(jìn)行相關(guān)酶活測(cè)定，所有操作步驟均嚴(yán)格按照試劑盒的說明書進(jìn)行，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

使用SSPS22.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，以評(píng)估不同組別之間的差異。結(jié)果以平均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)誤差表示， Plt;0.05 表示組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1補(bǔ)充兩種形式蛋氨酸的飼料對(duì)大口黑鱸肝臟血脂生化指標(biāo)的影響

為探究酶解羊毛粉替代魚粉且補(bǔ)充兩種不同形式蛋氨酸的飼料對(duì)大口黑鱸肝臟血脂生化指標(biāo)的影響，檢測(cè)各組大口黑鱸肝臟研磨液的總蛋白（TP）、總膽固醇（T一CHO）、甘油三酯（TG）、葡萄糖（GLU）、堿性磷酸酶（AKP）和酸性磷酸酶（ACP）的表達(dá)情況。結(jié)果如圖1所示，與D0組相比，D1組大口黑鱸肝臟中TP含量顯著降低（ Plt;0.01? ，TG含量極顯著升高 （Plt;0. 001） ，T-CHO、GLU、AKP和ACP含量未見顯著差異 Rgt;0.05） ；與D1組相比，D5組大口黑鱸肝臟中TP含量極顯著升高 （Plt;0.05） ，TG含量極顯著降低（ Plt;0. 001 ，T-CHO、GLU、AKP和ACP含量未見顯著差異（ Pgt;0.05 。

圖1各組大口黑鱸肝臟血脂生化指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果

注：a.總蛋白 TP/（U?L^-1 ）；b.總膽固醇 T-CHO/（mmol ：L^-1 ）；c.甘油三酯 TG/（mmol?L^-1） ；d.葡萄糖GLU/（U·L^-1 ）；e.堿性磷酸酶 AKP/（mmol?L^-1 ）；f.酸性磷酸酶ACP/[mmol?L^-1 。 ? 表示差異顯著（ Plt;0.05 ，**表示差異極顯著（ Plt;0.01） ，***表示差異極顯著（ Plt;0.001） °

2.2補(bǔ)充兩種形式蛋氨酸的飼料對(duì)大口黑鱸肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

為探究酶解羊毛粉替代魚粉且補(bǔ)充兩種不同形式蛋氨酸的飼料對(duì)大口黑鱸肝臟抗氧化指標(biāo)的影響，檢測(cè)各組大口黑鱸肝臟研磨液的丙二醛MDA（U/L）、總抗氧化能力 T-AOC（mmol/L） 、超氧化物歧化酶 SOD（U/L） 和過氧化氫酶CAT1 U/L） 的表達(dá)情況。結(jié)果如圖2所示，與D0組相比，D1組大口黑鱸肝臟中MDA含量極顯著升高（ Plt;0 .01），T-AOC（ Plt;0， 01 ）、SOD（ Plt;0.01 和CAT（ Plt;0.001 ）含量極顯著降低；與D1組相比，D5組大口黑鱸肝臟中MDA含量極顯著降低（ ?Plt;0. 01 ，T-AOC（ Plt;0. 01 ）、SOD（ Plt;0.01 和CAT（ Plt;0. 001 含量極顯著升高。

3討論

魚類的肝臟生化指標(biāo)與魚類自身的代謝、營養(yǎng)狀況以及魚體健康均有著密切的聯(lián)系[7-8]。TP、TG和CHO以及GLU是蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和糖類三大營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收后在魚體血液內(nèi)的最主要存在形式[9-10]。血清TP是機(jī)體蛋白的來源之一，可以用于修復(fù)組織并提供能量[11]。血清中TP的含量在一定程度上反映了機(jī)體蛋白質(zhì)的消化、吸收和代謝程度。血清中CHO和TG的含量反映了動(dòng)物體內(nèi)的脂類代謝狀況[12]。在本研究中發(fā)現(xiàn)，添加兩種不同形式蛋氨酸的酶解羊毛粉飼喂的大口黑鱸肝臟和血清中的GLU、AKP、ACP等生化指標(biāo)并無顯著差異。然而，酶解羊毛粉并添加晶體蛋氨酸部分代替魚粉后，肝臟和血清中的TP含量極顯著降低，TG含量極顯著升高，提示具有高脂蛋白血癥的風(fēng)險(xiǎn)，而添加包膜蛋氨酸的酶解羊毛粉可緩解上述現(xiàn)象，進(jìn)一步說明包膜蛋氨酸更易維持蛋白質(zhì)的代謝平衡，進(jìn)而調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝。以上結(jié)果表明與添加晶體蛋氨酸相比，酶解羊毛粉添加包膜蛋氨酸更適合替代魚粉，而不會(huì)影響大口黑鱸的機(jī)體代謝。

圖2各組大口黑鱸肝臟抗氧化指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果

注：a.丙二醛MDA/ U?L^-1 ；b.總抗氧化能力 T- AOC/[mmol?L^-1 ；c.超氧化物歧化酶 SOD/（U?L^-1） ；d.過氧化氫酶 CAT/（U?L^-1）^* 表示差異顯著 （Plt;0.05） ，**表示差異極顯著（ Plt;0.01） ，***表示差異極顯著（ Plt;0.001? 。

抗氧化酶活性是魚類組織中抗氧化應(yīng)激的主要保護(hù)機(jī)制，其活性與其表達(dá)水平和濃度密切相關(guān)。抗氧化酶，如SOD、T一AOC和CAT是對(duì)自由基產(chǎn)生干擾非常重要的氧化應(yīng)激酶，能夠清除多余自由基，抵御氧化損傷[13]。SOD催化超氧化物自由基還原為過氧化氫，將它們從細(xì)胞系統(tǒng)中消除。MDA是脂質(zhì)過氧化的天然生物標(biāo)志物和主要終結(jié)產(chǎn)物，可與蛋白質(zhì)的游離氨基發(fā)生作用，引起蛋白質(zhì)分子內(nèi)和分子間交聯(lián)而導(dǎo)致細(xì)胞損傷[14]。在本研究中，添加晶體蛋氨酸的酶解羊毛粉處理組顯著升高了MDA含量，降低了SOD、T一AOC、CAT的含量，導(dǎo)致肝臟的氧化應(yīng)激。但有趣的是，在添加包膜蛋氨酸的酶解羊毛粉的飼喂組中，MDA含量下降，SOD、T一AOC和CAT上升，顯著緩解了氧化應(yīng)激損傷。這些結(jié)果說明添加包膜蛋氨酸的酶解羊毛粉代替魚粉更能維護(hù)大口黑鱸的氧化還原穩(wěn)態(tài)。在羅非魚的研究中，也比較了兩種不同形式的蛋氨酸添加劑對(duì)魚體的影響，結(jié)果顯示包膜蛋氨酸較晶體蛋氨酸具有更高的利用效率和更好的促生長效果，這與本研究中的包膜蛋氨酸更適合大口黑鱸的結(jié)論相似[15]。總之，添加蛋氨酸的酶解羊毛粉能夠代替大口黑鱸飼料中一定比例的魚粉，并且與添加晶體蛋氨酸相比，添加包膜蛋氨酸的酶解羊毛粉更有利于大口黑鱸的代謝穩(wěn)態(tài)和氧化還原平衡。

5結(jié)論

隨著全球水產(chǎn)養(yǎng)殖的擴(kuò)大和加強(qiáng)，魚類的營養(yǎng)獲取方式正從魚和魚粉向顆粒水產(chǎn)飼料過渡。研究發(fā)現(xiàn)，使用酶解羊毛粉代替魚粉后，相較于晶體蛋氨酸，通過補(bǔ)充包膜蛋氨酸可以有效改善羊毛粉替代物造成的氧化應(yīng)激損傷和脂質(zhì)代謝紊亂。由于魚粉產(chǎn)量供給不平衡以及價(jià)格成本高，更多的可持續(xù)資源旨在代替魚粉如酶解羊毛粉等新型蛋白源備受關(guān)注，利用多種蛋白質(zhì)來源對(duì)水產(chǎn)飼料的經(jīng)濟(jì)和可持續(xù)發(fā)展至關(guān)重要。

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