羊肚菌液體菌種制作技術試驗與示范

羊肚菌是一種珍稀食用菌，屬子囊菌亞門盤菌綱盤菌目羊肚菌科，別稱羊肚菜、狼肚菜等。羊肚菌分布廣泛，在全國除海南省外均有栽培，近年來已成為食用菌栽培品種的新貴，市場對羊肚菌的需求不斷上升。

遼寧省羊肚菌栽培面積持續增長，但羊肚菌液體菌種的生產還沒有試驗推廣，筆者在遼寧省鐵嶺縣茂森食用菌培育中心實施了液體菌種培養試驗，現總結如下供交流參考。

1溫度對羊肚菌母種活化的影響

以羊肚菌主栽品種六妹羊肚菌、七妹羊肚菌、梯菱羊肚菌為研究對象，自3種羊肚菌新鮮子實體菌柄部位用組織分離法獲得菌株Y1（六妹）、Y2（七妹）、Y3（梯菱），經ITS、RPB1、RPB2及TEF1多基因序列聯合分析，確定3株羊肚菌分別為六妹羊肚菌[Morchellasextelata（Mel-6）]、七妹羊肚菌[M.eximia（Mel-7）]、梯菱羊肚菌]M.importuna（Mel-10）]。

將試驗菌株母種平板活化后，用直徑 5mm 的打孔器打出大小相同的圓形菌塊，菌塊接種于PDA固體培養基中央。設置5個培養溫度，分別為10、15，20，25，30‰ ，于恒溫條件下進行暗培養，每個溫度處理3次重復。分別于培養后 ^48，72h 在菌落邊緣畫線標記，測量兩次標記線之間的長度，即菌絲生長速度 （cm/d） ，并記錄菌落、菌絲等培養特征。

供試菌株在不同溫度處理下平均生長速度見表1，在 10～30^cC 范圍內，3個羊肚菌菌株菌絲均萌發、生長。培養溫度為 10% 時，菌絲生長緩慢稀疏，菌落邊緣較整齊； 20% 時，菌絲生長速度分別為1.52、1.44，1.48cm/d ，菌絲呈放射狀生長，粗壯濃密，菌落邊緣整齊； 25^°C 時，3個菌株菌絲生長速度均達到最高值，分別為 1.68，1.57，1.56cm/d ，菌絲放射狀生長，較粗壯，較濃密，菌落邊緣整齊；培養溫度超過25^°C 時，菌絲生長速度顯著下降； 30% 時，3個菌株菌絲生長速度分別下降至 0.83，0.89，0.82cm/d ，菌絲逐漸纖細，分枝增多，菌落邊緣整齊度下降。綜合考慮3個菌株的菌絲生長速度，結合菌落邊緣整齊度、菌絲濃密程度等生長特征，確定 20% 為菌絲生長最佳溫度。實際生產中，培養溫度應低于最適宜溫度 2～3C 因此，本試驗確定羊肚菌菌絲培養最佳溫度為 18～20% 。3個試驗菌株對溫度變化的響應差異不顯著，以下試驗選擇Y1作為研究對象。

2羊肚菌液體菌種培養基配方篩選

以六妹羊肚菌Y1為供試菌株，以菌絲體濕重、菌絲球直徑為考察指標，篩選適宜羊肚菌菌絲生長的液體菌種培養基配方。

2.1液體菌種培養基配方為確定搖瓶菌種和發酵罐菌種生產最適培養基，根據前期工作基礎，結合相關參考文獻，已知羊肚菌菌絲生長的適宜碳源為葡萄糖，氮源為蛋白肺。本試驗以PDA培養基為對照，設置5個培養基配方（表2）進行試驗。以菌絲體生物量（濕重）和菌絲球直徑作為參考指標，確定適宜培養基配方。不同配方生產試驗在鐵嶺縣茂森食用菌培育中心羊肚菌菌種生產車間進行。

2.2液體菌種培養及測定方法配制上述培養基，滅菌結束后，待培養液溫度降至 以下時，于超凈工作臺上接種。每瓶接種2塊 5mm 菌種塊，于20°C，150r/min 條件下培養，每個配方3次重復。培養 ^48h 后，置于磁力攪拌器上打碎菌絲體，繼續搖床培養至6d，測定菌絲體生物量（濕重）、菌絲球大小（直徑）。

2.3結果與分析由表3可以看出，不同培養基配方培養的羊肚菌液體菌種菌絲球大小和菌絲體生物量之間的差異。菌絲體生物量的累積與氮源添加量呈正相關，隨培養基中蛋白脈添加量的增加，菌絲體生物量呈現升高趨勢。P1＼～P5培養基菌絲體生物量均顯著高于對照組（ （Plt;0.05） ，其中， ^p4，p5 培養基菌絲體生物量達最大值，且兩者之間差異不顯著0 （Pgt;0.05） ，菌絲體濕重分別為 83.4，82.5mg/mL 5種培養基菌絲球直徑均小于 0.45cm ，其中，P4培養獲得的菌絲球直徑最小，為 0.28cm 。根據菌絲體濕重、菌絲球直徑兩個指標，確定P4為最佳培養基。

3小結

2022—2023年在鐵嶺縣茂森食用菌培育中心的生產試驗示范區試驗，累計試驗2批次，每批次800L 按照羊肚菌液體菌種生產技術規程進行菌種生產及出菇試驗，并跟蹤生產過程，分別在羊肚菌菌絲生長各個時期進行實地考察調研。經2022—2023年初步驗證結果表明，按照本試驗制備的羊肚菌液體菌種，具有菌種生產周期短、菌齡一致、生產成本低、接種方便等優點，比傳統的固體制種培養期縮短60% 左右，同時解決了固體接種發菌周期長、生產成本高、污染率高、菌齡不一致等問題，降低原料成本和用工成本。

羊肚菌液體菌種應用到實際生產中，可節約大量制作固體菌種的小麥，減少生產菌種產生多余的廢棄物，具有良好的生態效益，有利于推動羊肚菌產業持續健康發展。

代勇，撫順市農業綜合行政執法隊，郵編113006（遼寧）。

收稿日期：2025-01-16