甲基蓮心堿對糖尿病腎病大鼠腎臟氧化應激的影響

Effectof Neferine on Oxidative Stressin Kidney ofDiabeticNephropathy Rats

HUANGHongmei1，LI Tingl，LIYingl，YUANLul，GUShi'，XUYong2 （1.DepartmentofEndocrinology，theFirstPeople'sHospitalofSuangliuDistrict，Chengdu6O2Oo，Sichuan，hina；

2.DepartmentofEndocrinology，AfiliatedHospitalofSouthwestMedicalUniversity，Luzhou646o99，Sichuan，China）

Abstract：OjectiveToivestigatethefectofeferineenaloidativetressinatsitabeticphropatyMetdSDaleatse randomlydividedintootrolgouodeloupaetoupdosiiecotrolgouIditiotootrolouthou werfedwithigsurndigfatdettoakeDodelAftersucfulodelingroupeddrugtreatentTeontrogroundedel groupwereitragastricallyadministeredwiththesameamountofsaline，thetreatment groupwasintragastricallyadministeredwith 4 0 m g / k g neferine， and the positive control group was intragastrically administered with 1 4 m g / k g irbesartan.HE staining was used to observe the pathological conditions ofratkidneytisederticalmcroopeoecalalsisofuiaryrotenontiatsasefodEassedtete contents of TNF- ，SODandMDAinratkidneytissue.ResultsComparedwiththecontrol group，therenaltisue structureof themodel groupwas signficantldteotldttaltldd contents of MDA and TNF- were significantly increased（ .Compared with the model group，the local renal tissue of the treatment group was damaged to varying degrees，the urine protein of the treatment group was significantly reduced （ Plt;0 . 0 1 ） ，the content of SOD was increased（ Plt;0 . 0 5 ） ， and the content of MDA and TNF- was decreased in the treatment group （ .Conclusion Neferine can improve the damage of renal tissue in diabetiephoatetoedeaieaspeio of diabetic nephropathy rats.

Keywords：Neferine；Diabetic nephropathy；Oxidative stress

糖尿病腎病（diabeticnephropathy，DN）是終末期腎衰竭的主要原因[，隨著時代發展，DN的發病率也在不斷增高，已經成為當前最重要的公共衛生問題之一[2。甲基蓮心堿是一種雙芐基異喹啉生物堿，來源于睡蓮科植物成熟種子的綠色胚芽，擁有安神、抗腫瘤、抗炎和抗氧化能力[34]。但甲基蓮心堿在DN中發揮抗氧化作用尚不清楚。本研究旨在分析甲基蓮心堿對DN模型的影響，并探討甲基蓮心堿在DN中的作用機制，以期為中西醫結合治療糖尿病腎病提供理論基礎。

1材料與方法

1.1實驗動物SPF級SD雄性大鼠12只，體重 ，購于達碩實驗動物有限公司[SCXK（川）2020-0030]。動物房的溫度條件設定為 2 C ，濕度條件設定為 2 6 %～3 0 % ，明暗循環。本研究通過動物倫理審批。

1.2造模與分組大鼠隨機分為對照組、模型組、治療組和陽性對照組。對照組給予普通飼料，造模組予以高糖高脂飼料喂養。喂養4周后禁食 ，造模組大鼠單次腹腔注射 S T Z（ 3 5 m g / k g） ，正常對照組注射等體積檸檬酸緩沖液。 后取尾靜脈采血測血糖 （ G l u ） ， G l u？1 6 . 7 m m o l / L 視為DM模型造模成功；注射 S T Z7 2 h 后， 2 4 h 尿蛋白 gt; 3 0 m g 為DN模型成功。造模成功后分組藥物治療，其中對照組和模型組等量鹽水灌胃，1次/d，連續4周；甲基蓮心堿治療組使用 4 0 m g / k g 甲基蓮心堿灌胃，1次/d，連續4周；陽性對照組使用厄貝沙坦 1 4 m g / k g 灌胃，1次/d，連續4周。實驗4周后注射 1 % 戊巴比妥鈉中 3 0 0 m g / k g） 麻醉大鼠，收集樣本于 保存。

1 . 3 H E 染色將大鼠左側腎臟置于 4 % 多聚甲醛，固定 2 4 h ，后酒精脫水，二甲苯透明，石蠟包埋樣本，制成臘塊，切片，片厚約 ，烘烤、脫蠟、水化，進行常規HE染色，封片，光鏡下觀察/拍照。

1.4ELISA檢測收集大鼠腎臟組織，在液氮中研磨， 4 ‰ 離心 1 5 m i n ，取上清，按照試劑盒說明書檢測組織中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和TNF- 水平。

1.5生化分析末次給藥后采集大鼠 2 4 h 尿液，按說明書測定各組大鼠 2 4 h 尿蛋白含量。

1.6統計學方法應用SPSS25.0統計學軟件進行數據分析。計量資料均符合正態分布方差齊性，以

表示，組間比較用單因素方差（One-WayANOVA）分析。以 Plt;0 . 0 5 表示差異有統計學意義， Plt;0 . 0 1 表示統計學意義顯著。

2結果

2.1甲基蓮心堿對DN大鼠腎組織損傷的影響 HE染色結果顯示，對照組腎臟組織較為完整，未見變性、壞死和脫落；模型組腎臟組織結構受損明顯，腎小管大面積萎縮、壞死，管腔擴張，上皮細胞胞核腫脹、排列紊亂，間質內大量纖維組織增生替代原有腎小管，局部輕微炎性細胞浸潤；治療組局部腎臟組織不同程度受損，腎小管萎縮，間質不等量纖維組織增生伴少量炎性細胞浸潤；陽性對照組腎臟組織受損，腎小管萎縮略明顯，間質較多纖維組織增生伴少量炎性細胞浸潤，見圖1。

2.2甲基蓮心堿對DN大鼠尿蛋白的影響尿蛋白檢測結果顯示，與對照組相比，模型組大鼠尿液尿蛋白顯著增加（ Plt;0 . 0 1 ？ ；與模型組相比，治療組和陽性對照組尿蛋白顯著減少（ P lt; 0 . 0 1 . ；與治療組相比，陽性對照組尿蛋白增加（ Plt;0 . 0 5 ） ，見圖2。

2.3甲基蓮心堿對糖尿病腎病大鼠腎組織中炎癥因子與氧化應激的影響ELISA檢測結果顯示，與對照組相比，模型組大鼠腎組織SOD含量顯著下降中 ，MDA和TNF- σ？ α？α？α 含量顯著上升（ ：與模型組相比，治療組和陽性對照組SOD含量上升（ P lt; 0 . 0 5 ） ，MDA和TNF- 含量下降（ . Plt;0 . 0 5 ） ；與治療組相比，陽性對照SOD含量下降（ ，TNF- σ？ α？α 含量上升（ Plt;0 . 0 5 ） ，見圖3。

注：與對照組相比， ；模型組相比， ；與治療組相比， 。

注：A：大鼠腎組織SOD含量；B：大鼠腎組織MDA含量；C：大鼠腎組織TNF- 含量；與對照組相比， ；與模型組相比， 中 ；與治療組相比， 。

3討論

DN早期無明顯癥狀，不易察覺，其發病率隨糖尿病病程的延長而增加，是糖尿病死亡的主要原因之一[5，。糖尿病腎病發病后，在高糖環境下，系膜細胞上的核因子調整了單核細胞趨化蛋白的表達，導致機體出現炎癥反應，加重腎小管和腎小球的損傷，影響腎臟結構和功能。因此，及早發現糖尿病患者早期腎損傷，對DN的診斷、治療、延緩病情具有重要的臨床意義[8]。

本研究結果顯示，DN大鼠腎臟組織結構受損明顯，腎小管大面積萎縮、壞死，炎性細胞浸潤；尿蛋白含量顯著增加，氧化應激和炎癥反應加重。經過甲基蓮心堿治療后，腎臟受損得到改善，尿蛋白含量降低，氧化應激和炎癥反應得到改善。尿微量白蛋白是一種小分子量蛋白，可穿過腎小球濾過膜，健康人群腎小球基底膜處的屏障可阻止白蛋白通過，但糖尿病腎病患者腎小球肥大，基底膜增厚，系膜出現擴張，在高血糖的作用下濾過膜通透性增加，造成微量白蛋白持續性高溢出[0]。因此，尿蛋白是臨床診斷糖尿病腎病的核心指標之一[]。本研究結果顯示，甲基蓮心堿治療后，尿蛋白水平降低，這提示甲基蓮心堿可以改善糖尿病腎病的尿蛋白含量。

氧化應激在糖尿病腎病的發生和發展中起重要作用。多種因素導致了腎組織內ROS的聚集，而ROS聚集又介導DN的發生和發展[12，13]。MDA可反映氧化應激損傷的程度[14]。研究表明[15]，甲基蓮心堿可以降低肝缺血再灌注損傷模型小鼠肝臟中MDA水平，減輕氧化應激。糖尿病患者體內的糖基化終產物可刺激腎臟表達和釋放TNF- 增多，炎癥因子生成增加，引起腎小球炎癥。有研究認為，多種炎癥因子與DN的發生、發展關系密切。在急性腎損傷小鼠模型，甲基蓮心堿可以抑制LPS誘導的炎癥反應，抑制粒細胞、巨噬細胞的浸潤[18；甲基蓮心堿的抗炎特性對糖尿病也有潛在治療作用，其通過顯著抑制糖尿病小鼠中 I L-1 β 和IL-18因子的產生，抑制了海馬的炎癥反應，提高了脂質代謝，而且降低了空腹血糖及胰島素抵抗[9。此外，甲基蓮心堿可以通過降低 T N F-α ？ I L-6 炎癥標志物的活性，改善炎癥反應，促進糖尿病足創面的愈合[20]。本研究結果顯示，與對照組相比，模型組大鼠腎組織SOD含量顯著下降（ Plt;0 . 0 1 ，MDA和TNF- 含量顯著上升（ P lt; 0.01）；與模型組相比，治療組和陽性對照組SOD含量上升（ P lt; 0 . 0 5 . ，MDA和TNF- σ？ α？ α？ α 含量下降（ P lt; 0.05）；與治療組相比，陽性對照SOD含量下降（ P lt; 0.05），TNF- σ？ α？α 含量上升（ ，提示甲基蓮心堿可以改善糖尿病腎病的氧化應激和炎癥反應。

綜上所述，甲基蓮心堿可改善糖尿病腎病大鼠腎臟組織損傷，降低尿蛋白含量，緩解氧化應激水平和炎癥反應。

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收稿日期：2023-12-17；修回日期：2024-03-01

編輯/杜帆