氟苯尼考在黃羽肉雞體內的殘留消除規律

關鍵詞氟苯尼考；黃羽肉雞；殘留消除；休藥其中圖分類號 文獻標識碼A文章編號 0517-6611（2025）08-0194-06doi： 10.3969/j.issn.0517-6611.2025.08.040

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AbstractObetie]Tostudyesieelnationreglarityoflofencolinllo-feathredlenddeteetdraalpod.[Method]36 healthychickens（bodyweight ）were selected and randomly divided into 6 groups. The first group was used as the blank control group，and the other 5 groups were given .The drug was given with concentrated water twice a day for5 days. The muscle，liver，kidney and sebum of yellow-feathered broiler were collected ，1d， ，5 dand after drug withdrawal，respectively.The residueaountofofecolandfofecoleinisueplesasteindbghpefoanceliqudcromatogahadeas spectrometry，ndteithdrawalperiodascaluatedbyW.4softare.esultrfencondflofenicolmineremiedinliver cle，kidneyand sebum of yelow-feathered broilers immediatelyafter withdrawal，andtheresidue reachedits peak at ，and the residual amountwaslargestinkidney.Thewithdrawal periodofflorfenicolinmuscle liver kidneyandsebumof yellow-featheredbroilerswas 3.46 d， 4.16 d and ，respectively.[Conclusion]According to the Guidelines for the Elimination Test of Veterinary Drug Residues of the MinistryofAgricultureandRuralAfairs，thwithdrawalperiodof thetesteddrugflrfenicolinchickenswasrecommendedtobe5days. KeywordsFlorfenicol； Yellow-feathered broiler；Residue depletion；Drug withdrawal period

氟苯尼考，又名氟甲礬霉素，是動物專用酰胺醇類抗生素[1]。該藥于20世紀90年代初上市，于1999 年在我國批準為國家二類新獸藥2；因其具有抗菌譜廣、安全高效、不易產生耐藥等特點，而被廣泛應用于全球畜禽（豬、牛、雞）及水產（甲殼類動物、淡水魚、海水魚）等養殖動物的細菌性疾病治療[3-6]，因其治療效果好，而經常被當作飼料添加劑直接喂養動物。養殖動物服用氟苯尼考后，大部分氟苯尼考藥物會被吸收，呈全身性分布，且產生一些代謝產物如氟苯尼考胺、氟苯尼考醇等。毒理學研究證實氟苯尼考及其代謝物可誘導肝毒性、生殖毒性、胚胎毒性、血液毒性和免疫毒性等[7-9]，氟苯尼考及其代謝物的殘留給人類的健康產生潛在危害，也會影響養殖業的可持續發展。因此，對于氟苯尼考在動物源性食品中殘留量的控制及合理制定休藥期顯得尤為重要。

我國農業農村部最新發布的GB31650—2019《食品安全國家標準食品中獸藥最大殘留限量》[10]明確規定，氟苯尼考的最高殘留限量值是以氟苯尼考和氟苯尼考胺之和計算。該研究以農業農村部《獸藥殘留消除試驗指導原則》[\"為參考，選擇 2 0 % 的氟苯尼考粉，通過飲水添加的方式對黃羽肉雞進行持續給藥，建立氟苯尼考和氟苯尼考胺的高效液相色譜-串聯質譜法（LC-MS/MS）的分析方法，并對黃羽肉雞組織中的氟苯尼考和氟苯尼考胺殘留量進行檢測，計算相應休藥期，為黃羽肉雞的科學給藥提供依據

1材料與方法

1.1試驗藥物和試劑氟苯尼考粉，含量為 2 0 . 0 % ，生產批號DXU211210，河北遠征禾木藥業有限公司；氟苯尼考標準品，含量為 9 9 . 6 % ，中國獸醫藥品監察所；氟苯尼考胺標準品，含量為 9 9 . 7 % ，天津阿爾塔科技有限公司；氯霉素-D5標準品，濃度為 ，天津阿爾塔科技有限公司；甲醇、乙晴，色譜級，賽默飛世爾科技（中國）有限公司；正已烷、甲酸、甲酸銨、乙酸乙酯，分析純，天津市科密歐化學試劑有限公司。

1.2主要儀器液相色譜串聯質譜儀，LCMS-8045型，購自島津企業管理（中國）有限公司；臺式高速離心機，2-16R型，購自湖南恒諾儀器設備有限公司；超聲波清洗機，PHS-3E型，購自上海儀電科學儀器股份有限公司；水浴氮吹儀，YST-24型，購自上海滬析實業有限公司。

1.3試驗動物36只70＼～80日齡健康黃羽肉雞（公母各半），購自安徽健朗畜牧育種有限公司，體重約 ，每只雞分別以腳標進行標識，在飼養觀察欄進行7d的適應期后進行臨床檢查，確定試驗雞健康程度再進行殘留消除試驗；試驗雞在適應期及試驗期間按常規飼養，自由飲水和采食。飼料和飲水確保不添加任何藥物的全價飼料。

1.4給藥與樣品采集36只試驗雞隨機分為6組，公母各半，依據《獸藥殘留消除試驗指導原則》\"進行試驗設計。第一組作為空白對照組，其余5組以每天2次集中飲水給藥方式，連續給藥5d，劑量為 。停藥后 、5d、7d分別隨機從給藥組選擇6只（公母各半）及空白對照組1只，屠宰取雞的肌肉、肝臟、腎臟和皮脂組織。采集完的樣品做好標記，于 保存。

1.5氟苯尼考和氟苯尼考胺含量檢測

1.5.1組織樣品預處理。組織樣品自然解凍后，取 （ 1 . 0 0 ± 0.01）g組織于 離心管中，加入氯霉素-D5內標工作液 ，再加入3m L氨化乙酸乙酯進行提取，旋渦 水浴超聲 離心 ，取上清液于另一 離心管中，重復提取2次，合并3次提取液，氮吹近干用標定的移液管，移取 （204 3 0 % 乙腈水溶液定容，旋渦 ，水浴超聲 。加入 飽和正己烷脫脂，渦動 離心 ，棄去上層，下層提取液重復脫脂一次。取下層液過 濾膜，待LC-MS/MS分析，測定組織中氟苯尼考和氟苯尼考胺的濃度。

1.5.2 LC-MS/MS檢測條件。

1.5.2.1 色譜條件。色譜柱為 Shim-pack GIST HP（2.1 ， ）；流動相A為 0 . 0 1 % 甲酸- 甲酸銨水溶液，B為 0 . 0 1 % 甲酸 甲酸銨甲醇；柱溫4 0% ；流速 ；進樣量 ；梯度洗脫，程序參數見表1。

1.5.2.2質譜條件。離子源為 （氟苯尼考胺）和 （氟苯尼考和氯霉素-D5）；掃描方式為MRM；干燥氣溫度 ；干燥氣流速 ；霧化器壓力 ；氟苯尼考和氟苯尼考胺的檢測參數見表2。

1.5.3標準曲線的繪制。采用雞空白組織制備氟苯尼考和氟苯尼考胺空白組織添加樣品，制得雞肝中氟苯尼考和氟苯尼考胺終濃度分別為 4 ， 2 5 ， 2 0 0 ， 2 5 0 ， 4 0 0 ， 5 0 0 ， 1 0 0 0 ， ，肌肉中氟苯尼考和氟苯尼考胺終濃度分別為 ，皮脂中氟苯尼考和氟苯尼考胺終濃度分別為 ，雞腎中氟苯尼考和氟苯尼考胺終濃度分別為5、15、20、70、150、 的組織樣品，渦旋 ，按照“1.5.2”檢測條件進行檢測。以測定后的氟苯尼考和氟苯尼考胺特征離子峰面積與氯霉素-D5內標特征離子峰面積之比 （ C ） 為縱坐標，以所對應的藥物濃度之比（S）為橫坐標，繪制標準曲線，求得各自的標準曲線回歸方程和相關系數 （ r ） 。

1.5.4定量限和檢出限。采用雞空白組織添加氟苯尼考和氟苯尼考胺標準品，使得雞肝中氟苯尼考和氟苯尼考胺終濃度分別為 ，肌肉、皮脂和雞腎中氟苯尼考和氟苯尼考胺終濃度分別為 的空白組織添加樣品，渦旋 ，按照“1.5.1\"組織樣品預處理方法進行處理，并按照“1.5.2”檢測條件進行檢測，每種濃度的組織樣品分別進樣、檢測5次，記錄色譜圖并進行積分，分析信噪比，以信噪比 S / N ？ 3 時的氟苯尼考和氟苯尼考胺添加濃度為檢出限（LOD），滿足 S / N ？ 1 0 檢出的最低濃度為定量限（LQD），并分析定量限的精密度和準確度。

1.5.5回收率和精密度的測定。采用雞空白組織添加氟苯尼考和氟苯尼考胺標準品， 雞肝臟空白組織添加樣品， 雞肌肉空白組織添加樣品 雞皮脂空白組織添加樣品，制備5、 雞腎臟空白組織添加樣品，按照“1.5.1”組織樣品預處理方法進行處理，并按照“1.5.2”檢測條件進行檢測；同時以現配隨行的基質加標標準曲線對樣品進行定量，計算上述每個組織4個濃度的添加回收率。同一組織4個濃度中每個濃度單日內設5個平行，進行連續3d重復試驗，計算變異系數。

1.6統計與分析試驗數據采用Excel進行分析，得出在最后一次給藥后的 時氟苯尼考和氟苯尼考胺在雞組織中的殘留量，試驗數據結果以平均值 ± 標準差（ SD）表示。采用WT1.4軟件按 9 5 % 置信區間計算氟苯尼考殘留標志物（以氟苯尼考和氟苯尼考胺總量計）在肝臟、肌肉、皮脂、腎臟中的休藥期。

2 結果與分析

2.1組織中氟苯尼考和氟苯尼考胺的特異性檢測分析組織樣品，對空白組織基質、氟苯尼考和氟苯尼考胺混合標準工作液、添加氟苯尼考的空白組織、氟苯尼考胺和給藥后氟苯尼考和氟苯尼考胺肉雞組織樣品進行測定。結果顯示，組織中內源性雜質不干擾樣品的測定。特征離子色譜圖（圖1）中目標化合物氟苯尼考和氟苯尼考胺的保留時間（4.46、 ）處沒有雜質干擾，藥峰與雜質峰分離良好，表明該方法有較好的特異性，氟苯尼考和氟苯尼考胺穩定出峰時間分別在 。

2.2組織中氟苯尼考和氟苯尼考胺標準曲線和線性范圍從表3可以看出，肝臟中氟苯尼考和氟苯尼考胺在 4 ～ 線性關系良好，肌肉、雞腎、皮脂中氟苯尼考和氟苯尼考胺在 線性關系均良好，相關系數 ？ ，符合檢測要求。

2.3組織中氟苯尼考、氟苯尼考胺檢出限和定量限該方法中氟苯尼考和氟苯尼考胺在雞肝中的檢出限為 ，定量限為 ；在肌肉、腎臟和皮脂中的檢出限均為 ，定量限均為 。

2.4組織中氟苯尼考、氟苯尼考胺回收率和精密度從表4可以看出，組織中氟苯尼考和氟苯尼考胺的添加回收率均超過 9 0 % ，變異系數均不超過 10 % 。

2.5氟苯尼考和氟苯尼考胺在黃羽肉雞體內不同組織中殘留消除規律氟苯尼考以 劑量每天2次飲水給藥，連續給藥5d，停藥后氟苯尼考和氟苯尼考胺在黃羽肉雞肌肉、肝臟、腎臟和皮脂中的殘留量見表5。結果顯示，給藥結束后 ，雞各組織中氟苯尼考的殘留量最高，隨后迅速降低。氟苯尼考殘留量最高的組織是腎臟，平均殘留量為

，其次為皮脂，平均殘留量為 ，肝臟中的殘留量為 ，殘留量最小的是肌肉，平均殘留量為 。氟苯尼考胺殘留量最高的組織是腎臟，平均殘留量為 ，其次為肝臟，平均殘留量為 ，皮脂的平均殘留量為 ，殘留量最小的是肌肉，平均殘留量為 0

給藥結束1d后，肝臟、肌肉、腎臟和皮脂中氟苯尼考和氟苯尼考胺殘留量迅速下降。至3d時，肝臟組織中的氟苯尼考和肌肉中的氟苯尼考胺均未檢出。給藥結束后5和7d，肝臟、肌肉、腎臟和皮脂組織中氟苯尼考總殘留量均低于各組織最大殘留限量（MRL）[]的規定值。

表3氟苯尼考和氟苯尼考胺標準曲線回歸方程、相關系數

2.6黃羽肉雞不同組織中氟苯尼考休藥期的計算參照《食品安全國家標準食品中獸藥最大殘留限量》（GB31650—2019）[1]中規定的氟苯尼考限量（肝臟中為 ，肌肉中為 ，皮脂中為 ，腎臟中為 ，利用WT1.4軟件對測定的氟苯尼考殘留量數據進行處理，氟苯尼考在黃羽肉雞體各組織中的殘留消除擬合情況見圖2。結果顯示，氟苯尼考在黃羽肉雞肝臟、肌肉、皮脂、腎臟中的休藥期分別為3.46、4.75、4.68和 。按照農業農村部《獸藥殘留消除試驗指導原則》[\"]中以最高的殘留限量擬定休藥期的規定，推薦受試藥物氟苯尼考在雞體內的休藥期為 。

3討論

3.1組織中氟苯尼考和氟苯尼考胺殘留檢測方法該研究參考《食品安全國家標準動物性食品中氟苯尼考及氟苯尼考胺殘留量的測定液相色譜-串聯質譜法》（GB31658.5—2021）[12]，在該方法的基礎上進行了適量優化，在提取時減少了乙酸的處理以及MCX固相萃取柱凈化處理，試驗結果表明，減少乙酸的處理對樣品提取回收率沒有影響。該方法中氟苯尼考和氟苯尼考胺在肝臟中的檢出限為 ，定量限為 ；在肌肉、皮脂、腎臟中的檢出限均為 ，定量限均為 。肝臟中氟苯尼考和氟苯尼考胺在 線性關系良好，肌肉、皮脂和腎臟中氟苯尼考和氟苯尼考胺在 線性關系均良好，相關系數 ，符合檢測要求。該試驗采用具有高靈敏度的高效液相色譜-串聯質譜法對氟苯尼考和氟苯尼考胺進行殘留檢測。考慮到基質效應對準確度的影響，采用內標法校正，提高方法的準確度，保證樣品檢測數據的可靠性。

3.2雞組織中氟苯尼考殘留消除規律氟苯尼考的殘留不僅有原型藥物，還有氟苯尼考胺、氟苯尼考醇和一些尚不清楚的代謝物形式，但在動物組織中的主要代謝產物為氟苯尼考胺，故通常以氟苯尼考和氟苯尼考胺作為動物體內氟苯尼考的殘留標示物[13-14]。氟苯尼考在動物體內分布呈全身性，但主要集中在肝臟、腎臟、肌肉、皮脂中。在該研究中經過5d的自由飲水給藥后，黃羽肉雞體內肝臟、肌肉、皮脂和腎臟中均有氟苯尼考和氟苯尼考胺殘留檢出，這與前人的研究結果相同[15-16]，試驗在給藥結束后6h，肝臟、肌肉、腎臟和皮脂中氟苯尼考和氟苯尼考胺的殘留量均達到最高，這與米璐等[17-18]報道的氟苯尼考殘留總量在給藥后0d在各個組織中達到頂峰的結果相似。該研究中給藥結束后6h氟苯尼考和氟苯尼考胺殘留總量的分布規律為腎臟 ： gt; 肝臟 gt; 皮脂 gt; 肌肉，且氟苯尼考胺在腎臟和肝臟中的殘留量均大于氟苯尼考，這與宋志超等[1]研究得出的肝臟和腎臟中氟苯尼考胺的殘留量明顯較高的結果一致，說明經口服后氟苯尼考進入肝臟和腎臟組織中，更容易在酶的作用下代謝分解成氟苯尼考胺等代謝產物[19]。該研究中氟苯尼考在皮脂中的平均殘留量雖然不高，但代謝最慢，到給藥結束后5d氟苯尼考殘留總量才低于MRL值，這可能與氟苯尼考親脂特性及肉雞的脂肪含量較高等有關[20]

3.3休藥期有研究發現，不同的氟苯尼考產品、不同劑量在不同品種上的休藥期也有所不同。在白羽雞中，以 劑量連續口服喂藥5d，得出氟苯尼考在白羽肉雞體內休藥期為 [21]。在北京油雞中，以公雞 和母雞 劑量口服飼喂氟苯尼考粉，休藥期不低于

。在羅斯雄雞中，給藥劑量 ，連續口服給藥3d，氟苯尼考的休藥期為 。在三黃肉雞中，氟苯尼考磺酸鹽按 劑量肌肉注射給藥，每天一次，連續 氟苯尼考的休藥期建議為 。在京海黃雞中，口服給藥劑量分別為25、50和 ，在雞肌肉中氟苯尼考及其代謝產物氟苯尼考胺總殘留量的休藥期分別為 $1 、 3 、 7 ＼mathrm { ＼ d } ^ { [ 1 5 ] }$ 休藥期的差異可能是與不同的動物品種、養殖環境、給藥方式、給藥劑量和動物健康狀況等因素有關?！吨袊F藥典》（2015年版）中規定的氟苯尼考在雞體內休藥期為 該研究中，按 連續給藥5d，氟苯尼考的休藥期為 。該研究可為黃羽肉雞生產上出欄前應急治療用藥提供參考和依據。

4結論

受試藥物氟苯尼考粉按照 劑量每天2次集中飲水給藥，連續給藥 。按照 采集組織樣品（肌肉、肝臟、腎臟、皮脂），利用建立的LC-MS/MS方法測定氟苯尼考和氟苯尼考胺在雞組織的殘留量，用WT1.4軟件對氟苯尼考在雞各組織中殘留量數據進行處理，按照 9 5 % 置信區間計算獲得黃羽肉雞肌肉、肝臟、腎臟、皮脂中的休藥期分別為4.75、3.46、4.16和 。按照農業農村部《獸藥殘留消除試驗指導原則》中以最高的殘留限量擬定休藥期的規定，推薦此次受試藥物氟苯尼考在黃羽肉雞體內的休藥期為 。

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