三色堇VwF3H基因啟動子克隆及其功能分析

摘要：【目的】探究三色堇黃烷酮-3-羥化酶基因（VwF3H）啟動子功能，并驗證其與花青素相關MYB轉錄因子的互作關系，為揭示F3H基因在植物花青素合成過程中的調控機制提供參考依據。【方法】以三色堇為研究材料，通過FPNI-PCR克隆VwF3H基因啟動子序列，分析其功能元件、組織表達特異性及核心功能片段等，并通過酵母單雜交試驗探究VwMYB27和VwMYB29能否與VwF3H基因啟動子結合。【結果】VwF3H基因啟動子序列長2017 bp，含有較多光響應元件及激素響應元件；根據MYB等重要轉錄因子的位置，將其分為4段：VwF3H1（2017 bp）、VwF3H2（1353 bp）、VwF3H3（745 bp）和VwF3H4（446 bp）。VwF3H基因在三色堇花瓣中的相對表達量最高，顯著高于根、莖和葉片中的相對表達量（Plt;0.05，下同）。VwF3H基因啟動子全長具有較強的轉錄活性，缺失片段-2017～-1353 bp的VwF3HS2轉錄活性明顯降低，缺失更多堿基的VwF3HS3和VwF3HS4則基本無轉錄活性，說明VwF3H基因啟動子的高活性序列位于-2017～-1353 bp區域。VwF3H基因啟動子在煙草葉片和花中啟動GUS基因的能力不同，以花器官中的轉錄活性更強，說明VwF3H基因表達存在一定組織特異性；此外，VwF3H基因啟動子在煙草中的轉錄活性明顯低于CaMV35S啟動子，但在三色堇中的轉錄活性明顯高于CaMV35S啟動子，推測VwF3H基因還存在物種偏好性，且更適合作為三色堇花瓣轉化載體的啟動子。VwF3H基因啟動子的3-氨基-1，2，4-三唑（3-AT）自激活抑制濃度為250 mmol/L；VwMYB27與VwF3H基因啟動子存在互作關系，而VwMYB29與VwF3H基因啟動子無直接的互作關系。【結論】VwF3H基因啟動子在三色堇中具有較強的轉錄活性，其高活性序列位于-2017～-1353 bp區域；VwF3H基因啟動子能與VwMYB27相互作用，而參與三色堇花瓣色斑的形成。

關鍵詞：三色堇；黃烷酮-3-羥化酶基因（F3H）；啟動子；MYB轉錄因子

中圖分類號：S681.9文獻標志碼：A文章編號：2095-1191（2025）02-0368-10

Cloning and functional analysis of the promoter of VwF3H gene"in pansy（Viola×wittrockiana Gams）

XU Xiao-lan1，LI Jie1，XU Hui-xian1，ZHOU Yang1，ZHAO Ying1，PENG Ting2*，WANG Jian1*

（1College of Tropical Agriculture and Forestry，Hainan University/Key Laboratory of Germplasm Resources Biology of Tropical Special Ornamental Plants of Hainan/Key Laboratory of Genetics and Germplasm Innovation of Tropical Forest"Trees and Ornamental Plants，Ministry of Education，Haikou，Hainan 570228，China；2College of Life Sciences， Huazhong Agricultural University，Wuhan，Hubei 430070，China）

Abstract：【Objective】To explore the function of the promoter of the flavanone-3-hydroxylase gene in pansy（Viola×wittrockiana Gams）（VwF3H）and verify its interaction with anthocyanin-related MYB transcription factors，which could provide reference for revealing the regulatory mechanism of F3H gene in the process of plant anthocyanin synthesis.【Method】Using pansy as the research materials，the VwF3H gene promoter sequence was cloned by FPNI-PCR，and its functional elements，tissue expression specificity and core functional fragments were analyzed.Yeast one-hybrid assay was conducted to investigate whether VwMYB27 and VwMYB29 could bind to the VwF3H gene promoter.【Result】VwF3H gene promoter sequence was 2017 bp long and contained numerous light-responsive and hormone-responsive ele-ments.Based on the positions of important transcription factors such as MYB，it was divided into 4 segments：VwF3H1（2017 bp），VwF3H2（1353 bp），VwF3H3（745 bp）and VwF3H4（446 bp）.The relative expression of VwF3H gene was the highest in pansy petals，significantly higher than in roots，stems and leaves（Plt;0.05，the same below）.The full-length VwF3H gene promoter exhibited strong transcriptional activity.The transcriptional activity of VwF3HS2，with a de-letion from-2017 to-1353 bp，was greatly reduced，while VwF3HS3 and VwF3HS4，with more bases deleted，showed almost no transcriptional activity，indicating that the high-activity sequence of the VwF3H gene promoter was located in the-2017 to-1353 bp region.The ability of the VwF3H gene promoter to drive GUS gene expression differed between to-bacco leaves and flowers，with stronger transcriptional activity in floral organs，suggesting tissue-specific expression of VwF3H gene.Additionally，the transcriptional activity of VwF3H gene promoter in tobacco was significantly lower than that of the CaMV35S promoter，but it was significantly higher than that of the CaMV35S promoter in pansy，suggesting species preference of the VwF3H gene promoter and its suitability as a promoter for petal transformation vectors in pansy.The self-activation inhibition concentration of 3-amino-1，2，4-triazole（3-AT）for VwF3H gene promoter was 250 mmol/L.VwMYB27 interacted with VwF3H gene promoter，whereas VwMYB29 did not directly interact with it.【Conclusion】VwF3H gene promoter exhibits strong transcriptional activity in pansy，with its high-activity sequence located in the-2017 to-1353 bp region.VwF3H gene promoter interacts with VwMYB27 and is involved in the formation of petal color patterns in pansy.

Key words：Viola×wittrockiana Gams；flavanone-3-hydroxylase gene（F3H）；promoter；MYB transcription factor

Foundation items：National Natural Science Foundation of China（32160719，32060365）；Guizhou Natural Science Foundation（ZK〔2022〕095）；Hainan Graduate Student Innovation Research Project（QHYS2022-120）

0引言

【研究意義】黃烷酮-3-羥化酶（Flavanone-3-hydroxylase，F3H）屬于2-酮戊二酸依賴性雙加氧酶（2-ODD）家族，在三羥基黃烷酮轉化為二氫黃酮醇的過程中發揮主導作用，是花青素合成途徑中的關鍵酶（Wang et al.，2021）。啟動子是指基因上游RNA聚合酶識別、結合和開始轉錄的一段DNA序列，具有多種環境響應及轉錄因子結合的元件，探究啟動子功能對深入了解其對應基因的表達和互作機制具有重要意義（王映紅等，2023；王佳音等，2024）。三色堇（Viola×wittrockiana Gams）為堇菜科（Viola-ceae）堇菜屬（Viola）二年生草本花卉，是我國栽培面積最大的冬春季花卉，其花色十分豐富，主要色素成分為花青素（李琴，2013），而F3H基因在花青素的形成過程中發揮重要作用，因此，研究三色堇F3H基因（VwF3H）啟動子功能對解析VwF3H基因表達規律和調控機制，以及培育三色堇新花色品種具有重要意義。【前人研究進展】F3H在花青素的合成與積累過程中起關鍵作用，其活性最先在紫羅蘭（Mat-thiola incana）的酶粗提取物中得到證實（Forkmann et al.，1980），隨后在歐芹（Petroselinum crispum）（Britsch et al.，1981）和矮牽牛（Petunia hybrida）（Froe-melet al.，1985）的酶制劑或細胞懸浮培養物中也檢測到F3H，且有研究證實缺乏F3H會導致大麗花（Dahlia pinnata）、馬鞭草（Verbena officinalis）、百日草（Zinnia elegans）等花呈白色（Forkmann and Stotz，1984）。Nishihara等（2014）研究表明，過表達F3H基因可使夏堇（Torenia fournieri）花色發生改變；蔣寶鑫等（2023）研究證實，將比利時杜鵑（Rhododendron hybridum）的F3H基因轉入擬南芥中能增加轉基因擬南芥花青素的積累；Xu等（2023b）研究發現，草莓（Fragaria vesca）F3H氨基酸序列中的1個氨基酸突變會減弱其催化活性，進而減少花青素合成，導致草莓果實呈粉色。相似研究結論在水稻（Oryza sativa）（Jan et al.，2021）、李（Prunus salicina）（Li et al.，2021）、毛茛（Ranunculus japonicus）（Xu etal.，2023a）等作物中也得到證實，進一步說明F3H基因對花青素的合成起關鍵作用。啟動子在植物F3H基因的表達過程中發揮重要作用。Charrier等（1998）將苜蓿（Medicago sativa）的F3H基因啟動子轉入擬南芥中，結果發現F3H基因啟動子能催動GUS報告基因在黃酮類化合物存在的組織表達；Strygina和Khlest-kina（2022）研究證實，啟動子結構差異是引起小麥（Triticumaestivum）F3H基因組織特異性表達的主要原因之一；Bai等（2024）研究表明，茶樹（Camellia sinensis）F3Ha基因具有光響應及激素響應元件，受藍光或外源植物激素脅迫時能啟動F3H基因表達，即啟動子結構中的特殊元件對促進F3H基因表達有重要影響。此外，MYB轉錄因子在花青素的合成過程中也發揮重要作用，主要通過與啟動子結合而啟動花青素合酶基因的表達。在燈盞花（Erigeron bre-viscapus）中，MYBP1通過與F3H基因啟動子互作而促進花青素合成（Zhao et al.，2022）；在茄子（Solanummelongena）中，MYB35能與CHS、F3H、DFR和ANS基因的啟動子結合而調控花青素合成（Li et al.，2021）。【本研究切入點】已有研究證實，三色堇中的VwMYB27和VwMYB29能促進花青素合成（龔勝，2015；曾媛，2016），但具體結合哪些花青素合成酶基因啟動子尚未明確。【擬解決的關鍵問題】以克隆獲得的VwF3H基因序列為基礎，采用FPNI-PCR克隆其啟動子序列，分析其功能元件、組織表達特性及核心功能片段等基本功能，并與VwMYB27和VwMYB29進行互作分析，探究VwMYB27和VwMYB29能否與VwF3H基因啟動子結合，為揭示F3H基因在植物花青素合成過程中的調控機制提供參考依據。

1材料與方法

1.1試驗材料

供試三色堇為黃底紫斑品種，種植于海南大學儋州校區農科基地。大腸桿菌DH5α感受態細胞和農桿菌GV3101感受態細胞購自上海唯地生物技術有限公司；pMD19-T載體購自寶日醫生物技術（北京）有限公司；pCAMBIA1301載體由熱帶特色花木資源生物學重點實驗室保存提供；多糖多酚植物基因組DNA提取試劑盒（DP360）和RNAprep Pure多糖多酚植物總RNA提取試劑盒（DP441）購自天根生化科技（北京）有限公司；反轉錄試劑盒（R333）購自南京諾唯贊生物科技股份有限公司；GUS染色試劑盒（SL7161）購自北京酷來搏科技有限公司。

1.2試驗方法

1.2.1三色堇DNA提取使用多糖多酚植物基因組DNA提取試劑盒抽提三色堇花葉混樣基因組DNA。

1.2.2 VwF3H基因表達分析使用RNAprep Pure多糖多酚植物總RNA提取試劑盒抽提三色堇根、莖、葉和花瓣的RNA，并反轉錄合成cDNA。根據VwF3H基因序列設計擴增引物，以18S rDNA為內參基因，進行VwF3H基因組織表達差異分析，引物序列、反應體系及擴增程序參照曾媛（2016）的研究方法。

1.2.3目的基因啟動子克隆非特異性擴增引物選用FPNI-PCR提供的引物序列（Wang et al.，2011），并根據克隆獲得的VwF3H基因編碼序列（CDS）設計下游特異性引物（表1），以反轉錄合成的cDNA為模板進行3輪PCR擴增，PCR反應體系及擴增程序參照FPNI-PCR。第3輪擴增產物經1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測后，選擇條帶單一的擴增產物測序。測序正確的擴增產物連接至pMD19-T載體并轉化DH5α感受態細胞，菌液PCR鑒定陽性克隆，選擇檢測正確的菌液保存備用。

1.2.4啟動子序列順式作用元件分析使用Plant-CARE數據庫對三色堇F3H基因上游啟動子區域進行順式作用元件預測分析，并通過TBtools進行可視化。

1.2.5啟動子截斷及表達載體構建根據Plant-CARE預測結果，將VwF3H基因啟動子序列分為4段，采用不同引物對啟動子片段進行擴增，經雙酶切及連接等步驟，替換pCAMBIA1301載體上的35S啟動子，獲得重組質粒VwF3HS1：：GUS（-2017～-1 bp）、VwF3HS2：：GUS（-1353～-1 bp）、VwF3HS3：：GUS（-745～-1 bp）和VwF3HS4：：GUS（-446～-1 bp），通過熱激法將重組質粒轉化至農桿菌GV3101感受態細胞中，然后涂布于LB+卡那霉素（Kana）+利福霉素（Rif）培養基上擴大培養，挑取單菌落進行PCR驗證。

1.2.6煙草瞬時轉化將重組質粒VwF3HS1：：GUS、VwF3HS2：：GUS、VwF3HS3：：GUS和VwF3HS4：：GUS的農桿菌陽性克隆菌液接種至LB+Kana+Rif液體培養基中，28℃下搖床（200 r/min）擴大培養12h；然后5000 r/min離心10 min收集菌體，使用浸染液重懸菌體至OD600 nm=0.8，室溫下放置4h。采用打孔器分別將大葉煙草的葉片和花瓣打成大小相同的小圓片，將菌液及煙草葉片和花瓣混合放入注射器中，堵住針管口，抽至最大量程，反復10次直至出現水漬狀，然后轉移至1.5%瓊脂培養基上暗培養3d。

1.2.7三色堇瞬時轉化取三色堇花瓣以打孔器打成小圓片，浸染方法與1.2.6相同。浸染后的花瓣置于1.5%瓊脂培養基上暗培養3d。

1.2.8 GUS染色取瞬時轉化的葉片及花瓣置于2 mL離心管中，加入GUS染色液，使其全部浸沒，真空泵1 mPa抽吸10min，28℃下放置12h，取出使用75%乙醇脫色。

1.2.9酵母單雜交試驗構建pGADT7-VwMYB27、pGAD7T-VwMYB29和pHIS2-VwF3Hpro載體，以pHIS2-VwF3Hpro載體和pGADT7空載體共轉染酵母Y187感受態細胞，取5μL菌液滴于含0、10、20、30、40、50、60、70和80 mmol/L 3-氨基-1，2，4-三唑（3-AT）的SD/-Trp/-His/-Leu固體培養基上，28℃倒置培養3 d，觀察不同3-AT濃度下pHIS2-VwF3HPro與pGADT7共轉染菌株的生長狀態。未見菌落生長說明自激活活性被抑制，若自激活活性未被抑制則再提高3-AT濃度，篩選出抑制自激活活性的最佳3-AT濃度。然后將pGADT7-VwMYB27和pGAD7T-VwMYB29分別與pHIS2-VwF3Hpro共轉染Y187感受態細胞，取陽性克隆菌液滴于含基因所對應最佳抑制自激活活性3-AT濃度的SD/-THL培養基上進行互作關系驗證。

2結果與分析

2.1 VwF3H基因上游序列克隆及其啟動子序列分析結果

從三色堇中擴增獲得2308bp的VwF3H基因上游片段序列，測序比對分析發現，有291bp的序列與VwF3H基因5'端序列重合，去除重疊序列后，從基因起始密碼子起的上游序列長度為2017 bp。經生物信息學分析發現，2017 bp的VwF3H基因上游序列含有89個順式作用元件（表2），包括啟動子的必需元件TATA-box和CAAT-box等，符合一般高等植物啟動子的特征，因此可確定為VwF3H基因啟動子序列。所有順式作用元件可分為三大類：第一類與植物生長發育相關，占57.3%；第二類與植物激素調節相關，如脫落酸和茉莉酸等，占11.2%；第三類與非生物脅迫響應相關，如光響應性和耐鹽性等，占31.5%。三色堇VwF3H基因啟動子序列中包含較多光響應元件及激素響應元件，故推測三色堇VwF3H基因受光、外源激素及非生物脅迫等誘導表達。

2.2 VwF3H基因組織表達分析結果

由圖1可看出，VwF3H基因在三色堇根、莖和葉片3個部位的相對表達量較低，在花瓣的相對表達量最高，顯著高于根、莖和葉片中的相對表達量（Plt;0.05，下同）。可見，VwF3H基因具有明顯的組織表達特異性，主要在花瓣中表達，且在花瓣中的表達效率顯著高于其他組織部位，因此后續研究主要在花瓣中進行。

2.3 VwF3H基因啟動子核心片段確定

根據MYB等重要轉錄因子的位置，將VwF3H基因啟動子分為4段：VwF3H1、VwF3H2、VwF3H3和VwF3H4（圖2）。使用特異性引物擴增獲取不同長度的VwF3H基因啟動子核心片段，經雙酶切及連接等操作后替換pCAMBIA1301載體上的35S啟動子，構建VwF3H基因啟動子5'端缺失重組質粒VwF3HS1：：GUS、VwF3HS2：：GUS、VwF3HS3：：GUS和VwF3HS4：：GUS，分別轉化農桿菌GV3101感受態細胞后進行擴大培養，單菌落PCR驗證結果顯示，VwF3H基因啟動子核心片段VwF3H1、VwF3H2、VwF3H3、VwF3H4大小分別為2017、1353、745和446 bp（圖3）。

2.4煙草和三色堇的瞬時轉化結果

以重組質粒VwF3HS1：：GUS、VwF3HS2：：GUS、VwF3HS3：：GUS和VwF3HS4：：GUS分別瞬時轉化煙草葉片和花瓣，以CaMV35S啟動子為對照。GUS染色結果顯示：CaMV35S啟動子在煙草葉片中具有較強的轉錄活性，VwF3HS1全長啟動子在煙草葉片的葉脈中有微弱活性，而其他5'端缺失的短截序列在煙草葉片中均不具備轉錄活性（圖4-A）；同樣，CaMV35S啟動子在煙草花瓣中具有較強的轉錄活性，VwF3HS1全長啟動子也具有較強的轉錄活性，VwF3HS2和VwF3HS3的轉錄活性明顯降低，而VwF3HS4幾乎沒有轉錄活性（圖4-B）。以相同方法瞬時轉化三色堇花瓣，GUS染色結果表明，CaMV35S啟動子具有一定的轉錄活性，但明顯低于在煙草葉片和花瓣中的轉錄活性；VwF3HS1全長啟動子在三色堇花瓣中的轉錄活性很強，明顯高于CaMV35S啟動子。此外，GUS活性隨缺失片段長度的增加而逐漸降低，VwF3HS2的轉錄活性明顯降低，而VwF3HS3和VwF3HS4基本無轉錄活性（圖4-C），說明VwF3H基因啟動子的高活性序列位于-2017～-1353 bp區域。

2.5 VwF3H基因啟動子與VwMYB27和VwMYB29互作關系驗證結果

在VwF3H基因啟動子中預測到多個與MYB轉錄因子相關的順式作用元件，故推測其與三色堇中促進花青素形成的MYB轉錄因子存在互作關系。本課題組前期研究發現，VwMYB27和VwMYB29具有促進花青素合成的作用（龔勝，2015；曾媛，2016），因此擬通過酵母單雜交試驗驗證其是否能與VwF3H基因啟動子互作，結果（圖5）顯示，3-AT濃度提高至250 mmol/L時才能有效抑制pHIS2-VwF3HPro與pGADT7共轉染菌株在SD/-Trp/-His/-Leu固體培養基上的生長，故確定VwF3H基因啟動子的3-AT自激活抑制濃度為250 mmol/L。

以VwF3H為靶基因，進一步驗證VwMYB27和VwMYB29是否與VwF3H基因啟動子存在互作關系，酵母單雜交試驗結果（圖6）顯示，陽性對照pGADT7-Rec53+pHIS2與pGADT7-VwMYB27+pHIS2-VwF3Hpro共轉染菌株均能在含250 mmol/L 3-AT的SD/-Trp/-His/-Leu固體培養基上生長良好，而陰性對照pGADT7+pHIS2與pGADT7-VwMYB29+pHIS2-VwF3Hpro的共轉染菌株無法在含250 mmol/L 3-AT的SD/-Trp/-His/-Leu固體培養基上正常生長。可見，VwMYB27與VwF3H基因啟動子存在互作關系，而VwMYB29與VwF3H基因啟動子無直接的互作關系。

3討論

啟動子對基因表達具有重要作用（陳榮珠，2020；唐維等，2024），因此，通過啟動子序列分析可預測基因表達受哪些生長環境、激素及轉錄因子等調控。鐘小菊等（2021）通過克隆分析斑地錦（Euphorbia maculata）F3H基因（EmF3H）啟動子序列，發現在EmF3H基因啟動子序列內含有光反應元件、應激反應元件及激素反應元件等；曹鑫嫻等（2023）通過克隆分析苦蕎（Fagopyrum tataricum）F3H基因啟動子序列，發現其含有大量與脫落酸、茉莉酸甲酯等激素響應及光調控相關的順式作用元件，說明多數F3H基因均參與光照及激素等非生物脅迫應答。本研究也發現，VwF3H基因啟動子中含有較多光響應及激素響應元件，故推測VwF3H基因與其他植物的F3H基因一樣，響應植物體的非生物脅迫，通過促進花青素的積累而提高植物的抗逆能力。

啟動子長度通常對其活性影響較大，每個啟動子均有1個活性較強的核心區域，可通過啟動子缺失片段加以研究。在沙冬青（Ammopiptanthus mon-golicus）中，通過對CIP基因啟動子進行缺失分析，推測MYCATERD1元件是響應干旱脅迫的關鍵元件（Ge et al.，2024）；在木薯（Manihot esculenta）中，通過缺失分析確定MeSSIII-1基因啟動子的-264～-1 bp區域為核心區域，而-987～-1228 bp和-488～-264 bp區域能顯著提高啟動子轉錄活性，-987～-747 bp和-747～-488 bp區域為抑制結構域（Lu et al.，2024）。在本研究中，VwF3H基因啟動子全長具有較強的轉錄活性，缺失片段-2017～-1353 bp的VwF3HS2轉錄活性明顯降低，缺失更多堿基的VwF3HS3和VwF3HS4則基本無轉錄活性，說明VwF3H基因啟動子的高活性序列位于-2017～-1353 bp區域，且該區域主要存在MYB、MRE等與MYB轉錄因子相關的元件，故推測VwF3H基因表達與MYB轉錄因子密切相關，或與TATA-box核心啟動子元件數量有關。因此，今后可通過更短的片段短截進一步縮小高活性序列的位置。

F3H基因啟動子序列通常具有一定的組織表達特異性，在特定器官組織中高表達。Charrier等（1998）研究發現F3H基因啟動子轉錄活性與類黃酮積累的部位有關；趙霞（2010）研究發現，津田蕪菁（Brassica rape subsp.rapa）F3H基因啟動子序列主要在轉基因煙草幼苗的葉片和葉柄部位表達。本研究發現，VwF3H基因啟動子在煙草葉片和花中啟動GUS基因的能力不同，以花器官中的轉錄活性更強，說明VwF3H基因表達存在一定組織特異性。此外，VwF3H基因啟動子在煙草中的轉錄活性明顯低于CaMV35S啟動子，但在三色堇中的轉錄活性明顯高于CaMV35S啟動子，推測VwF3H基因還存在物種偏好性。CaMV35S是目前使用較廣泛的組成型啟動子，但也有研究報道顯示其在不同植物種類、不同器官組織、不同環境條件下的表達模式存在明顯差異（Schnurr and Guerra，2000），在煙草（Pret'Ova et al.，2001）和棉花（Sunilkumar etal.，2002）中已得到驗證。本研究中，CaMV35S啟動子在三色堇中的轉錄活性較低，說明其可能不適宜作為三色堇轉化載體的啟動子，而VwF3H基因啟動子擁有更強的轉錄活性，因此更適合作為三色堇花瓣轉化載體的啟動子。

MYB轉錄因子能與F3H基因啟動子結合，調控花青素合成。在桃（Prunus persica）中，MYB10.1和MYB10.3能調控F3H基因表達，促進花青素積累（Rahim et al.，2014）；在黃連木（Pistacia chinensis）中，MYB113能與F3H基因啟動子結合，進而調控花青素合成（Song et al.，2021）。本研究中，VwF3H基因啟動子能與VwMYB27相互作用，VwMYB27屬于MYB家族的S4亞組，而桃的MYB10.1和MYB10.3（Rahim etal.，2014）及黃連木的PcMYB113（Song et al.，2021）屬于MYB家族的S6亞組。可見，F3H基因啟動子能結合不同類型的MYB轉錄因子，與VwMYB27相近的MYB轉錄因子可能也存在類似的結合作用。本研究還發現，VwF3H基因啟動子與

VwMYB29無直接互作關系，說明VwMYB29并非通過VwF3H基因發揮調控花青素合成的作用，具體作用于哪些基因還需進一步驗證，同時說明在三色堇中MYB轉錄因子間調控較復雜，且不同亞組間的功能差異明顯。

4結論

VwF3H基因啟動子在三色堇中具有較強的轉錄活性，其高活性序列位于-2017～-1353 bp；VwF3H基因啟動子能與VwMYB27相互作用，而參與三色堇花瓣色斑的形成。

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（責任編輯：蘭宗寶）