NLRP6過表達通過AMPK/CPT1A/PGC1A通路促進肝細胞脂肪氧化分解改善非酒精性脂肪肝

摘要：目的 研究核苷酸結合寡聚化結構域樣受體含pyrin 結構域蛋白6（NLRP6）在肝臟脂代謝及非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）發展過程中的作用及機制。方法 構建高脂飼料喂養（HFD）模型小鼠，分為對照組（正常喂養）、模型組［高脂（脂質含量60%飲食）喂養］，6 只/組，持續喂養16 周。構建蛋氨酸膽堿缺乏飲食（MCD）小鼠模型，分為對照組［喂養蛋氨酸-膽堿充足（MCS）飲食］和模型組（喂養蛋氨酸-MCD飲食），6只/組，持續喂養8周。使用HE染色及油紅O染色鑒定模型是否造模成功，免疫組化染色（IHC）檢測兩種小鼠模型肝臟中NLRP6 的表達。在正常人肝細胞系LO2 細胞中使用腺病毒過表達 NLRP6，或siRNA 敲低 NLRP6，使用棕櫚酸（PA）構建NAFLD細胞模型，NLRP6 過表達處理分組Ad-Vec 組、Ad-NLRP6 組、Ad-Vec+PA組、Ad-NLRP6+PA組；NLRP6 敲低處理分組陰性對照（NC）組、sh-NLRP6 組、NC+PA組、sh-NLRP6+PA組。采用甘油三酯（TG） 試劑盒、油紅染色、qPCR、Western blotting、ATP 試劑盒和 β-羥基丁酸試劑盒檢測NLRP6對脂質代謝的影響及NLRP6對AMPK通路及使用AMPK抑制劑Compound C后AMPK通路的變化。結果 在HFD、MCD飲食誘導NAFLD小鼠模型小鼠肝臟中NLRP6 表達降低（Plt;0.001）。在細胞實驗中LO2 細胞過表達NLRP6 后，與Ad-Vec+PA組相比，Ad-NLRP6+PA組細胞內TG含量降低（Plt;0.0001），且脂質沉積減少；敲低NLRP6，與NC+PA組相比，sh-NLRP6+PA組細胞內TG含量增加（Plt;0.05），并且脂質沉積加重；與Ad-Vec+PA組相比，Ad-NLRP6+PA組PGC1A、CPT1A mRNA及蛋白表達水平增加（Plt;0.01）。脂質氧化分解代謝產物ATP、β-羥丁酸含量升高（Plt;0.05）。與Ad-Vec+PA組相比，Ad-NLRP6+PA組肝細胞中AMPK通路磷酸化水平升高（Plt;0.05）；使用AMPK抑制劑后，Ad-NLRP6引起的脂質氧化分解作用被抑制關。結論 NLRP6通過AMPK/CPT1A/PGC1A促進肝細胞脂肪氧化分解，改善脂質沉積。

關鍵詞：非酒精性脂肪肝；NLRP6；AMPK；脂肪酸氧化

非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是與肥胖、胰島素抵抗、高血壓、高血脂等代謝功能紊亂相關的疾病，全世界患病率約為25%，是最常見的慢性肝病［1］，同時也是慢性肝病進展至肝硬化和肝癌的重要過程［2］。……