重組日本血吸蟲半胱氨酸蛋白酶抑制劑可通過調(diào)節(jié)炎癥微環(huán)境對“二次打擊”膿毒癥小鼠發(fā)揮治療作用

摘要：目的 探討重組日本血吸蟲半胱氨酸蛋白酶抑制劑（rSj-Cystatin）對“二次打擊”膿毒癥小鼠的干預(yù)作用。方法 64只C57BL/6雄性小鼠隨機分為假手術(shù)組（A組）、蛋白組（B組）、“二次打擊”造模組（C組）、蛋白干預(yù)組（D組），16只/組。A組和B組小鼠首先腹腔注射PBS（100 μL/只），24 h后開腹探查盲腸，但不進行盲腸結(jié)扎和穿刺（CLP），術(shù)后30 min，分別腹腔注射PBS（100 μL/只）或含25 μg rSj-Cystatin 蛋白的PBS（100 μL/只）；C組和D組小鼠首先腹腔注射含LPS（5 mg/kg）的PBS（100 μL/只），24 h后行 CLP手術(shù)，術(shù)后30 min，分別腹腔注射PBS（100 μL/只）或含25 μg rSj-Cystatin 蛋白的PBS（100 μL/只）。每組隨機抽取6只，造模12 h后取小鼠血清、脾、肝、肺和腎組織。肝、肺和腎組織HE染色觀察其病理損傷并進行評分；酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）檢驗血清和肝、肺、腎組織勻漿中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-6（IL-6）、白細胞介素-10（IL-10）和轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）水平以及組織中巨噬細胞極化標志物iNOS和Arg-1水平；流式細胞術(shù)檢測脾臟CD3+CD4+CD25+Foxp3+T的比例變化；剩余小鼠造模后記錄72 h 生存率并觀察小鼠狀態(tài)。結(jié)果 與A、B組（100%）相比，C組（0%）72 h 生存率降低，經(jīng)rSj-Cystatin 蛋白治療后，D組生存率較C組增高（20%）。與A、B兩組相比，C組肝、肺、腎組織切片病理損傷加重，血清和組織勻漿中TNF-α、IL-6 水平明顯升高（Plt;0.05）； 經(jīng)蛋白治療后，病理損傷程度減輕，血清和組織勻漿中TNF-α、IL-6水平降低（Plt;0.05），調(diào)節(jié)因子IL-10、TGF-β水平明顯升高（Plt;0.05），同時CD3+CD4+CD25+Foxp3+T比例升高（Plt;0.05）；與A、B兩組相比，C組各器官組織中iNOS 水平均升高，而Arg-1水平呈差異性，僅在腎中呈下降趨勢（Plt;0.01）；與C組相比，D組iNOS水平下降（Plt;0.05），Arg-1水平升高（Plt;0.001）。結(jié)論 rSj-Cystatin可通過調(diào)節(jié)炎癥微環(huán)境進而對“ 二次打擊”膿毒癥起到明顯的治療作用。

關(guān)鍵詞：重組日本血吸蟲半胱氨酸蛋白酶抑制劑；脂多糖；盲腸結(jié)扎穿刺；膿毒癥；……