miR-155-5p介導PIK3R1負調控PI3K/AKT信號通路促進原發性干燥綜合征人唾液腺上皮細胞增殖

摘要：目的 探討miR-155-5p 靶向作用于PIK3R1 調控PI3K/AKT 信號通路對原發性干燥綜合征人唾液腺上皮細胞（pSSHSGECs）的影響。方法 通過雙熒光素酶驗證miR-155-5p 與PI3K/AKT通路的靶向關系。利用TRAIL及INF-γ 刺激細胞，模擬pSS-HSGECs 細胞模型；空白組：HSGECs，模型組：TRAIL+INF-γ+HSGECs，空轉組：TRAIL+INF-γ+HSGECs+miR-155-inhibitor-NC；miR-155 抑制組：TRAIL+INF-γ+IHSGECs+miR-155-inhibitor；CKK-8 法、流式細胞術、平板克隆形成實驗分別檢測細胞活力、細胞周期及凋亡率、細胞增殖能力。ELISA、RT-PCR方法分別檢測相關細胞因子、miR-155-5p表達。蛋白質免疫印跡法檢測PI3K/AKT信號通路蛋白表達。結果 雙熒光素酶檢測結果表明，miR-155-5p 與PI3K/AKT通路存在靶向關系，且PIK3R1mRNA為二者的結合位點。與空白組相比，模型組細胞活力、細胞克隆形成能力、IL-10、IL-4水平降低；細胞凋亡率、細胞周期G2 期比例、TNF-α、IL-6、miR-155-5p、PIK3R1 mRNA表達、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比率、PIK3R1mRNA蛋白相對表達顯著升高（Plt;0.01）。與模型組及空轉組相比，miR-155抑制組細胞活力、G1期比例、克隆形成能力、IL-10和IL-4水平上升；同時細胞凋亡率、細胞周期G2期比例、TNF-α、IL-6、miR-155-5p、PIK3R1 mRNA表達、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比率及PIK3R1蛋白相對表達下降（Plt;0.05）。結論 miR-155-5p可靶向作用于PI3K1mRNA，負向調節PI3K/AKT信號通路的過表達，改善pSSHSGECs增殖與凋亡異常，調節炎癥反應。

關鍵詞：原發性干燥綜合征；miR-155-5p；PIK3R1；PI3K/AKT信號通路；炎癥因子

原發性干燥綜合征（PSS）是一種影響全身的自身免疫性疾病，主要影響包括腮腺、頜下腺、淚腺在內的多個外分泌腺體。該病以口眼干燥為主要臨床表現，并可能伴隨多器官的病變。嚴重時，這些并發癥可能危及患者生命［1， 2］。PSS發病機制復雜，涵蓋了遺傳因素、環境影響、腺體固有的缺陷以及免疫反應等多個方面［3， 4］。多種因素刺激T、B淋巴細胞、巨噬細胞等自身反應性細胞，使其產生細胞因子及免疫復合物，導致腺泡破壞，導管萎縮，腺體分泌障礙，同時受損的腺上皮細胞會釋放細胞因子和自身抗原，導致炎癥持續存在，進而引起多系統和多器官的損害［5， 6］。……