缺氧微環境下補陽還五湯通過抑制BNIP3-PI3K/Akt通路抑制類風濕關節炎滑膜成纖維細胞的線粒體自噬

摘要：目的 在低氧微環境下，以BNIP3-PI3K/Akt信號通路為核心，研究補陽還五湯參與FLS-RA線粒體自噬的調控機制。方法 將成纖維樣滑膜細胞（FLS）體外培養，分為正常對照組（FLS-RA正常培養）、模型對照組（IL-1β誘導）、補陽還五湯含藥血清低、中、高干預組（IL-1β 誘導+濃度分別為5%、10%、20%含藥血清），除正常對照組外，其余組細胞按照10% O2濃度低氧處理。AnnexinV-APC/7-AAD雙染測定細胞凋亡和T-AOC試劑盒檢測細胞總抗氧化能力。探針分子測定細胞ROS，ATP試劑盒測定細胞ATP水平、線粒體膜電位（Δψm）、細胞Ca2+平衡穩態的變化。Western blotting法檢測BNIP3、PI3K、AKT蛋白表達水平，RT-qPCR法檢測BNIP3、PI3K、AKT及自噬相關因子LC3、Beclin-1、P62 mRNA 的表達。結果 補陽還五湯組能夠降低細胞的凋亡百分比（Plt;0.05），且呈濃度依賴性。補陽還五湯組總抗氧化力降低，T-AOC濃度（U/mL）降低，ROS產生增加。觀察到自噬小體的形成，ATP 酶水平釋放量增加（Plt;0.05）；線粒體膜電位、Ca2+水平均呈下降趨勢。補陽還五湯組BNIP3 蛋白表達升高，PI3K、AKT表達降低；與模型組相比，補陽還五湯組BNIP3、P62、mRNA表達升高（Plt;0.05）；PI3K、AKT、LC3、Beclin-1、mRNA表達降低，Beclin-1的表達差異無統計學意義（Pgt;0.05）；LC3的表達僅在中藥小劑量組差異無統計學意義（Pgt;0.05）。結論 在低氧環境下，補陽還五湯可能通過抑制BNIP3介導的PI3K/AKT通路，從而抑制了自噬因子的表達。

關鍵詞：低氧；補陽還五湯；類風濕關節炎；滑膜成纖維細胞；BNIP3-PI3K/Akt；線粒體自噬

類風濕關節炎（RA）是一種病因不明且致殘率較高的自身免疫性疑難疾病，以關節滑膜組織內反復發作的慢性炎癥為主要病理特征［1］。成纖維樣滑膜細胞（FLS）是RA病程中的主要效應細胞之一，其自噬/凋亡的平衡失調在關節破壞和慢性持續性炎癥中起關鍵性作用［2］。……