益氣養(yǎng)陰化濁通絡方通過調控miR-21a-5p/FoxO1/PINK1介導的線粒體自噬減輕糖尿病腎病小鼠的足細胞損傷

摘要：目的 探討益氣養(yǎng)陰化濁通絡方（YYHT）對高糖誘導小鼠腎足細胞（MPC5）損傷的保護作用及潛在機制。方法 大鼠分別灌胃19、38、76 g/kg YYHT及生理鹽水1周制備低、中、高濃度含藥血清和空白血清。體外培養(yǎng)MPC5，分為對照組（5.5 mmol /LD-葡萄糖+miR-21a-5p-inhibitor-NC+空白血清）、模型組（30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-inhibitor-NC+空白血清）、YYHT-L（30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-inhibitor-NC+低濃度含藥血清）、YYHT-M（30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-inhibitor-NC+中濃度含藥血清）、YYHT-H（30 mmol/L D-葡萄糖+NC+高濃度含藥血清）、miR-21a-5p 抑制劑組（30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5pinhibitor+空白血清）。qRT-PCR檢測miR-21a-5p表達及FoxO1、PINK1、Parkin 的mRNA表達，Western blotting檢測足細胞標志蛋白（Nephrin、Podocin）及FoxO1、PINK1、Parkin蛋白表達，MDC染色檢測自噬熒光。將MPC5分為陰性對照組（30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-NC+空白血清）、miR-21a-5p-mimic 組（30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-mimic+空白血清）、YYHT-L（30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-mimic+低濃度含藥血清）、YYHT-M（30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5pmimic+中濃度含藥血清）、YYHT-H（30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-mimic+高濃度含藥血清），熒光素酶報告基因實驗檢測miR-21a-5p/FoxO1 轉錄調控，RIP檢測miR-21a-5p 與靶基因FoxO1 結合。結果 與對照組相比，模型組miR-21a-5p 表達升高（Plt;0.05），F(xiàn)oxO1、PINK1、Parkin mRNA表達降低（Plt;0.05），F(xiàn)oxO1、PINK1、Parkin、Nephrin、Podocin蛋白表達及自噬熒光降低（Plt;0.05）；與模型組相比，不同劑量YYHT含藥血清及miR-21a-5p-inhibitor促進Nephrin及Podocin蛋白表達（Plt;0.05），抑制miR-21a-5p表達（Plt;0.05），增強FoxO1、PINK1、Parkin 的mRNA和蛋白表達及自噬熒光（Plt;0.05）。與miR-21a-5p-NC組相比，miR-21a-5p-mimic組抑制FoxO1 轉錄（Plt;0.05），促進miR-21a-5p 與FoxO1 的結合（Plt;0.05）；與miR-21a-5p 組相比，YYHT含藥血清組促進FoxO1 轉錄（Plt;0.05），抑制miR-21a-5p 與FoxO1 的結合（Plt;0.05）。結論 益氣養(yǎng)陰化濁通絡方可能通過調節(jié)miR-21a-5p/FoxO1/PINK1介導的線粒體自噬，減輕高糖誘導的小鼠腎足細胞損傷。

關鍵詞：糖尿病腎病；益氣養(yǎng)陰化濁通絡方；線粒體自噬；足細胞損傷；miR-21a-5p/FoxO1/PINK1

糖尿病腎病（DKD）是終末期腎臟病的重要原因，也是糖尿病（DM）累及微血管的主要并發(fā)癥，全球約30%以上的DM患者將發(fā)展為DKD，嚴重威脅著患者的身心健康［1， 2］。DKD的發(fā)病機制復雜，目前認為與代謝、血流動力學、氧化應激、炎癥及自噬等密切相關［3， 4］。……