過表達(dá)HDAC1通過誘導(dǎo)SP1去乙酰化改善類固醇誘導(dǎo)的小鼠骨細(xì)胞凋亡

摘要：目的 探究組蛋白脫乙酰基酶1（HDAC1）通過特異性蛋白1（SP1）調(diào)控激素性股骨頭壞死（SONFH）的作用機(jī)制。方法 將小鼠骨樣細(xì)胞MLY-O4分為對照組、曲古抑菌素（TSA）組、類固醇組、類固醇+oe-NC組、類固醇+oe-HDAC1組、oe-NC組、oe-HDAC1組。對照組細(xì)胞正常培養(yǎng)，不接受試劑誘導(dǎo)及細(xì)胞轉(zhuǎn)染；TSA組細(xì)胞接受400 nmol/L TSA處理24 h；類固醇組接受1 μmol/L地塞米松誘導(dǎo)24 h；類固醇+oe-NC組或類固醇+oe-HDAC1組接受oe-NC或oe-HDAC1轉(zhuǎn)染，通過LipoHigh 脂質(zhì)體高效轉(zhuǎn)染試劑行細(xì)胞轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染48 h后進(jìn)行類固醇誘導(dǎo)。oe-NC組或oe-HDAC1組接受oe-NC或oe-HDAC1轉(zhuǎn)染。觀察各組細(xì)胞在HDAC、HDAC1蛋白、SP1蛋白、凋亡相關(guān)蛋白（裂解capase-3及Bax）、乙酰化水平、細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡方面的差異，采用通過免疫共沉淀驗(yàn)證HDAC1 與SP1 的相互作用。結(jié)果 類固醇組與對照組相比細(xì)胞凋亡率升高，HDAC1 下調(diào)，裂解caspase-3 及Bax 上調(diào)，細(xì)胞增殖顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）。TSA組、類固醇組與對照組相比，乙酰化水平顯著升高，SP1 蛋白顯著上調(diào)，類固醇+oc-HDAC1 組與類固醇+oe-NC組相比，乙酰化水平降低，HDAC1 上調(diào)，SP1、裂解caspase-3、Bax 下調(diào)，細(xì)胞增殖增強(qiáng)，細(xì)胞凋亡降低（Plt;0.05）。oe-NC組及oe-HDAC1組Input樣本存在HDAC1蛋白條帶，表明兩組樣本均可表達(dá)HDAC1，兩組IgG抗體上并未檢測出HDAC1蛋白，而兩組SP1抗體上均存在HDAC1，表明HDAC1可與SP1相互作用。結(jié)論 HDAC1通過介導(dǎo)去乙酰化修飾抑制SP1表達(dá)，從而抑制類固醇誘導(dǎo)的骨細(xì)胞凋亡，并促進(jìn)骨細(xì)胞增殖。

關(guān)鍵詞：激素性股骨頭壞死；SP1；HDAC1；去乙酰化

激素性骨頭壞死是大劑量使用類固醇的常見并發(fā)癥，而股骨頭在類固醇使用中受累最多［1， 2］。激素性股骨頭壞死（SONFH）表現(xiàn)為股骨頭塌陷［3］，其發(fā)病機(jī)制與類固醇誘導(dǎo)的免疫抑制及脂質(zhì)代謝紊亂息息相關(guān)。……