不同殺菌劑對(duì)小白菜軟腐病菌室內(nèi)活性的影響及田間防效試驗(yàn)

摘 要：小白菜軟腐病是小白菜夏季栽培中的常見病害。為了篩選出對(duì)小白菜軟腐病具有顯著性防效的藥劑，本試驗(yàn)采用牛津杯抑菌圈測(cè)定法，通過建立回歸方程，進(jìn)行EC50值分析，測(cè)定了6種高效低毒的殺菌劑對(duì)小白菜軟腐病菌的離體抑菌效果及防治效果。結(jié)果表明，20%春雷霉素水分散粒劑（WG）、3%中生菌素可濕性粉劑（WP）、50%氯溴異氰尿酸可溶粉劑（SP）、30%噻唑鋅懸浮劑（SC）對(duì)軟腐病菌均具有抑菌活性，且田間軟腐病防效較好，可作為防治小白菜軟腐病的優(yōu)選殺菌劑。

關(guān)鍵詞：小白菜軟腐病；殺菌劑；EC50值；防效

中圖分類號(hào)：S634 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1008-1038（2024）11-0058-05

DOI：10.19590/j.cnki.1008-1038.2024.11.011

The Effect on Indoor Biological Activity of Different Bactericides against Pectobacterium carotovorum of Pakchoi Cabbage and"Field Control Efficiency

GAO Tianyi， REN Xiliang， MENG Qiufeng， WANG Jie

（Ningbo Academy of Agricultural Sciences/Ningbo Key Laboratory of Characteristic Horticultural Crops"in Quality Adjustment and Resistance Breeding， Ningbo 315040， China）

Abstract： Soft rot is a common disease in summer cultivation of pakchoi cabbage. To select the suitable bactericides for control of soft rot of pakchoi cabbagee by Pectobacterium carotovorum， oxford-cup antimicrobial method was used to establish the regression equation and get EC50 value， further analyzed combined with disease incidences， disease index and control effect in field. Results showed that kasugamycin 20% WG， zhongshengmycin 3% WP， chloroisobromine cyanuric acid 50% SP and zinc thiazole 30% SC had antibacterial activity against soft rot bacteria， and the control effect of soft rot was good， they could be used as the optimal bactericides for controlling soft rot.

Keywords： Pakchoi cabbage soft rot; bactericides; EC50 value; control effect

小白菜，學(xué)名不結(jié)球白菜（Brassica campestris ssp. Chinensis Makina），又名青菜、雞毛菜、油菜等，是我國(guó)重要的栽培蔬菜，具有生長(zhǎng)周期短、種類多樣、適應(yīng)性廣、可周年栽培供給和經(jīng)濟(jì)效益高等特點(diǎn)，在蔬菜保障供應(yīng)中起到了重要作用，是人們喜愛的綠葉蔬菜之一[1]。軟腐病是小白菜生產(chǎn)中發(fā)生的一種重要病害，在我國(guó)大部分產(chǎn)區(qū)廣泛發(fā)生，該病在小白菜全生育期均可造成危害，高溫高濕環(huán)境利于病菌侵染，發(fā)病初期葉基部出現(xiàn)水漬狀斑點(diǎn)，后期小白菜莖基部腐爛，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致整株腐爛死亡，造成減產(chǎn)甚至絕產(chǎn)[2]。小白菜生長(zhǎng)喜冷涼氣候條件，在夏季高溫栽培時(shí)往往出現(xiàn)生長(zhǎng)緩慢、抗性降低的情況[3]，此時(shí)軟腐病最容易爆發(fā)，防治難度最大。

使用化學(xué)殺菌劑是防治小白菜軟腐病最直接有效的方法。長(zhǎng)期以來由于軟腐病的防治用藥種類不合理、防治藥劑單一等問題，選擇高效低毒的殺菌劑對(duì)于小白菜軟腐病的防治尤為重要。傳統(tǒng)上常用的防治藥劑為農(nóng)用鏈霉素及銅制劑，然而由于農(nóng)用鏈霉素及銅制劑長(zhǎng)期大量使用，造成病原菌易產(chǎn)生抗藥性，且鏈霉素能夠在人體內(nèi)富集，2016年后已禁止在農(nóng)作物上使用[4]。總之不同藥劑對(duì)于軟腐病的防治機(jī)制和效果不同，目前對(duì)小白菜軟腐病藥劑防效研究有限，且多聚焦于傳統(tǒng)抗生素和銅制劑，針對(duì)新型殺菌劑的防效研究較少，毒力效果與田間防效研究也亟需加強(qiáng)。本研究選擇常用的6種高效低毒殺菌劑，測(cè)定了不同濃度殺菌劑對(duì)小白菜軟腐病菌室內(nèi)抑制效果，并開展田間藥效試驗(yàn)，比較了各藥劑間的防效，以期篩選出適用于軟腐病防治的藥劑。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料及供試藥劑

軟腐病病原菌（Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum），寧波市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院蔬菜所分離鑒定。20%春雷霉素水分散粒劑，四川海潤(rùn)作物科學(xué)技術(shù)有限公司；20%噻森銅懸浮劑，浙江東風(fēng)化工有限公司；3%中生菌素可濕性粉劑，深圳諾普信農(nóng)化股份有限公司；30%噻唑鋅懸浮劑，浙江新農(nóng)化工股份有限公司；50%氯溴異氰尿酸可溶粉劑，南京南農(nóng)農(nóng)藥科技發(fā)展有限公司；80%乙蒜素乳油，開封大地農(nóng)化生物科技有限公司。

1.2 菌懸液配制及不同殺菌劑室內(nèi)毒力測(cè)定

用牛津杯法測(cè)定不同殺菌劑對(duì)小白菜軟腐病菌的影響。將-80 ℃保存的軟腐病菌在NA平板上劃線活化，置于28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，在平板上挑取單菌落接種在NB培養(yǎng)基中，28 ℃、180 r/min振蕩培養(yǎng)12 h，配制成軟腐病菌菌懸液，后將菌懸液均勻涂布在NA平板上，制成含菌平板。用鑷子將已滅菌的牛津杯（外徑8 mm）均勻地放在含菌平板上，每皿放置7只牛津杯。將6種殺菌劑分別用無菌水配制成不同質(zhì)量濃度的液劑，分別吸取各濃度殺菌劑200 μL加入牛津杯內(nèi)，以加入清水的處理為對(duì)照。每個(gè)處理重復(fù)3次。置于28 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中，48 h后測(cè)量抑菌圈直徑，并按照公式（1）計(jì)算每種藥劑的抑菌率。

抑菌率/%=×100（1）

將抑菌率轉(zhuǎn)化為抑菌率概率值[5]，以藥劑濃度的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，以抑菌率概率值為縱坐標(biāo)，計(jì)算每個(gè)藥劑的毒力回歸方程y=a+bx，計(jì)算供試藥劑對(duì)供試菌株的毒力回歸方程 y=a+bx、相關(guān)系數(shù)r及有效抑制中濃度（EC50值）。以EC50值衡量不同殺菌劑對(duì)軟腐病菌的毒力。1.3 不同殺菌劑對(duì)田間小白菜軟腐病發(fā)生情況影響及防效

試驗(yàn)地點(diǎn)位于浙江省寧波市鄞州區(qū)高新農(nóng)業(yè)技術(shù)試驗(yàn)園區(qū)，參試小白菜品種為‘甬青8號(hào)’，為寧波豐登種業(yè)科技有限公司生產(chǎn)。試驗(yàn)按照《農(nóng)藥田間藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則》（GB/T 17980.114—2004）執(zhí)行，略有修改。選取常年連作小白菜、軟腐病近幾年發(fā)病嚴(yán)重的塑料薄膜大棚，將小白菜栽培于大棚內(nèi)，畦寬（連溝）1.2 m，溝渠暢通，小區(qū)面積10 m2，生產(chǎn)示范面積共333 m2。土壤肥力中等，pH 7.1。

每個(gè)處理設(shè)定3個(gè)小區(qū)，以噴施清水作為對(duì)照，不同殺菌劑的用量以各商品包裝標(biāo)注的處理用量為準(zhǔn)，詳見表1，分別在移栽后的第7天及第14天進(jìn)行施藥處理，連續(xù)施藥2次，試驗(yàn)期間不施用其他殺菌劑、除草劑和殺蟲劑，只進(jìn)行常規(guī)管理和基本的農(nóng)事操作，在第2次施藥后第2天調(diào)查不同處理間軟腐病發(fā)病情況，每個(gè)小區(qū)統(tǒng)計(jì)50株。對(duì)小白菜軟腐病進(jìn)行病害分級(jí)，并根據(jù)公式（2）（3）（4）分別計(jì)算軟腐病發(fā)病率、病情指數(shù)及防治效果。

病害等級(jí)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：0級(jí)，無癥狀；1級(jí)，始見病斑，1～2片葉發(fā)病；3級(jí)，1/3以下腐爛；5級(jí)，1/3～1/2腐爛；7級(jí)，1/2至全株腐爛。

發(fā)病率/%=×100（2）

病情指數(shù)=×100（3）

防治效果/%=×100（4）

1.4 數(shù)據(jù)處理

用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（v20.00a版）對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，多重比較分析采用LSD法分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同殺菌劑對(duì)小白菜軟腐病菌的室內(nèi)抑制作用

從表2可以看出，6種殺菌劑在NA培養(yǎng)基平板上對(duì)軟腐病菌均表現(xiàn)出一定的毒力，對(duì)病菌產(chǎn)生了不同程度的抑制作用，各藥劑的抑菌作用隨著處理濃度的增加而增加，其中抑菌率最高的為T5及T2，最大質(zhì)量濃度下抑菌率分別為82%和78%。T6、T7、T3、T4最大質(zhì)量濃度下抑菌率分別為60%、72%、64%和68%。

2.2 不同殺菌劑對(duì)小白菜軟腐病菌的室內(nèi)生物活性

如表3所示，6種殺菌劑處理的質(zhì)量濃度對(duì)數(shù)與對(duì)應(yīng)的抑菌率概率值呈正相關(guān)的線性關(guān)系，同時(shí)回歸方程的相關(guān)系數(shù)r均在0.90以上，表明試驗(yàn)設(shè)計(jì)中兩個(gè)變量的擬合度高，生物活性方程得出的各藥劑的EC50值具有較高的可靠性。EC50值由高至低順序?yàn)門3gt;T4gt;T2gt;T5gt;T6gt;T7。其中T7的EC50值最低，為3.16 μg/mL，對(duì)軟腐病菌的毒力最強(qiáng)。而T3的EC50 值為7 849.32 μg/mL，對(duì)軟腐病菌的毒力最弱，T1處理無室內(nèi)抑菌生物活性。

2.3 不同殺菌劑對(duì)小白菜軟腐病的田間防效

不同殺菌劑對(duì)小白菜軟腐病田間防效的影響如表4所示，根據(jù)每種藥劑商品包裝上的最適宜用量進(jìn)行田間施用，6種供試藥劑均有一定的防治效果，且不同殺菌劑之間的發(fā)病率、病情指數(shù)及防效間存在差異。防效由強(qiáng)至弱為T7gt;T6gt;T5gt;T4gt;T3gt;T2。T7處理的發(fā)病率及病情指數(shù)均為最低，分別為44.67%和32.29，防效最高，為38.62%。與T1處理相比，T2與T3的發(fā)病率及病情指數(shù)無顯著性差異。T7、T6、T5、T4之間防效無顯著性差異，但與T3、T2之間有顯著差異。所有處理均未發(fā)現(xiàn)藥害情況。

3 結(jié)論與討論

不同的藥劑防治病菌的機(jī)制不同，目前常用防治細(xì)菌性病害的藥劑主要包括銅制劑、抗生素類藥劑及其他類型藥劑等[6]。本研究選用了不同類型的殺菌劑進(jìn)行防效試驗(yàn)，其中春雷霉素和中生菌素屬于抗生素類藥劑，噻森銅屬于銅制劑，乙蒜素屬于植物性誘抗劑，氯溴異氰尿酸屬于氧化型消毒劑。田間試驗(yàn)結(jié)果表明，乙蒜素及噻森銅處理后軟腐病發(fā)病率及病情指數(shù)與CK處理無顯著性差異，且這兩種藥劑的防效差異不顯著；而春雷霉素、中生菌素、氯溴異氰尿酸處理后的發(fā)病率及病情指數(shù)與CK處理均有顯著性差異，表明抗生素類藥劑及氧化型消毒劑防效最佳，推測(cè)防治軟腐病最佳的方式是通過抑菌作用殺滅細(xì)菌。

噻菌銅和噻唑鋅均具有噻唑基團(tuán)，能夠通過植物內(nèi)吸和金屬離子殺菌的方式進(jìn)行病害防治[7-8]。但針對(duì)這兩種殺菌劑對(duì)軟腐病的毒力測(cè)定及防效比較還未有研究。本研究發(fā)現(xiàn)，在室內(nèi)生物活性測(cè)定及田間防效試驗(yàn)中，30%噻唑鋅SC的EC50值、田間軟腐病發(fā)病率及病情指數(shù)均低于20%噻森銅SC，防效高于20%噻森銅SC，但無顯著性差異，前人研究表明由于銅化合物殺菌劑在田間長(zhǎng)期使用，能夠使病原菌出現(xiàn)耐銅現(xiàn)象[9]，推測(cè)本研究所用軟腐病菌對(duì)銅離子有一定的耐受能力，而對(duì)鋅離子的耐受能力較弱，因此銅制劑在田間小白菜軟腐病的防治中可能會(huì)存在防效不佳的情況，可用噻唑鋅替代噻森銅進(jìn)行防治。30%噻唑鋅SC的EC50值高于20%春雷霉素WG、3%中生菌素WP和50%氯溴異氰尿酸SP，但田間防效并無顯著性差異，推測(cè)噻唑鋅雖然毒性弱，但噻唑基團(tuán)的通過植物內(nèi)吸作用一定程度上增強(qiáng)了田間植株對(duì)軟腐病菌的防護(hù)作用。

乙蒜素是一種植物仿生農(nóng)藥，是大蒜素提取物，在許多病原菌防治中能起到很好的防效，包括馬鈴薯晚疫病、大豆細(xì)菌性斑點(diǎn)病、獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病等[10-13]。本研究中發(fā)現(xiàn)，80%乙蒜素EC的EC50值為55.76 μg/mL，對(duì)軟腐病菌具有毒性作用，且毒力高于30%噻唑鋅SC（EC50值為1 495.17 μg/mL），但對(duì)田間軟腐病的防效最差。韓鳳英等[14]研究發(fā)現(xiàn)大白菜軟腐病的田間防治過程中，氨基·乙蒜素微乳劑防效最差。本文研究與前人報(bào)道一致，推測(cè)原因可能為乙蒜素屬于在蔬菜和土壤中易消解的農(nóng)藥，防效期短[15]。軟腐病菌在土壤中存活時(shí)間較長(zhǎng)，具有持續(xù)侵染植株的能力，乙蒜素雖然具有一定的抑菌能力，但田間施用后分解過快，防治期較短。

篩選適宜防治軟腐病的高效低毒藥劑，對(duì)軟腐病的綠色防控具有重要意義。目前已有研究進(jìn)行了白菜軟腐病的室內(nèi)毒力測(cè)定，但并未進(jìn)一步進(jìn)行相關(guān)田間防效試驗(yàn)[16]。本研究通過室內(nèi)毒力測(cè)定及田間防效試驗(yàn)，對(duì)6種殺菌劑的EC50值、田間病情指數(shù)、防效指標(biāo)進(jìn)行了綜合分析，發(fā)現(xiàn)20%春雷霉素WG、3%中生菌素WP、50%氯溴異氰尿酸SP及30%噻唑鋅SC對(duì)防治軟腐病的防治效果較好，可作為防治小白菜軟腐病的優(yōu)選殺菌劑。

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基金項(xiàng)目：寧波市公益類科技計(jì)劃項(xiàng)目（2021S072）

第一作者簡(jiǎn)介：高天一（1987—），男，助理研究員，博士，主要從事十字花科蔬菜抗病育種研究工作