化妝品中α-熊果苷等4種原料的含量測定及方法確認

摘 要：目的：采用高效液相色譜-熒光檢測法（HPLC-FLD）同時測定美白類化妝品中α-熊果苷、β-熊果苷、氫醌和苯酚等4種原料的含量，分析檢測方法的準確性。方法：樣品用甲醇提取，SHIMADZU Shim-pack GIST C18 柱（250 mm×4.6mm×5 μm）分離，甲醇-水流動相梯度洗脫，流速0.5 mL/min，進樣量5 μL。結果：α-熊果苷、β-熊果苷、氫醌和苯酚4種原料濃度分別為0.25～20、0.25～20、0.025～2和0.05～4 mg/L范圍內線性良好（相關系數r＞0.999）；檢出限S/N＞3，定量限S/N＞10；在液態水基、膏霜乳液、凝膠、面膜和粉類化妝品均無4種原料檢出情況下，進行空白基質加標，方法回收率范圍為95.4%～103.8%；日內相對標準偏差RSD范圍為0.2%～1.8%，日間相對標準偏差RSD范圍為0.6%～2.7%（n =6）；30批美白類化妝品中，5批檢出α-熊果苷，含量范圍在80～380 μg/g；7批檢出β-熊果苷，含量范圍在90～546 μg/g。結論：《化妝品安全技術規范》（2015年版）第四章8.2化妝品中α-熊果苷等4種原料檢驗方法簡便、快速、準確、靈敏，可用于美白類化妝品中α-熊果苷、β-熊果苷、氫醌和苯酚等4種原料的同時定量測定。

關鍵詞：高效液相色譜-熒光檢測法，化妝品，熊果苷，氫醌，苯酚

DOI編碼：10.3969/j.issn.1002-5944.2024.23.036

0 引 言

α-熊果苷又名4-羥基苯-α-D-熊果苷，β-熊果苷又名4-羥基苯-β-D-熊果苷。β-熊果苷是α-熊果苷的差向異構體，兩者均能抑制氨酸酶活性[1-3]，用于化妝品中具有較好的美白效果[4-5]，α-熊果苷較β-熊果苷具有更好的美白效果和安全性[6-7]。但在多數化妝品標簽上，僅標注為熊果苷，未區分是α還是β，缺乏規范性，還因二者價格差異較大，市售化妝品標簽甚至虛假標注，存在實際添加熊果苷的種類與標簽標識不一致的現象，極大地損害了消費者利益[8]。目前，我國現行有效的《化妝品安全技術規范》（2015年版）未明確α、β2種熊果苷的使用限度[9]。氫醌和苯酚都有良好的美白作用，但因毒性大、刺激性強，長期接觸有致癌風險，所以禁用于化妝品中[10]。α、β-熊果苷是氫醌糖苷類化合物，二者在一定條件下均可降解產生氫醌[11-14]。歐盟消費者安全科學委員會（SCCS）建議，化妝品中由熊果苷降解產生氫醌的含量應＜1 μg/g[15-16]。因此，2種熊果苷及氫醌、苯酚的安全性及其在化妝品中的應用現狀值得監管部門的關注。為基本掌握美白類化妝品中實際添加熊果苷的種類以及毒性物質氫醌和苯酚的含量水平，按照《化妝品安全技術規范》（2015年版）第四章8.2化妝品中α-熊果苷等4種原料的檢驗方法，采用高效液相色譜-熒光檢測法對化妝品中α-熊果苷、β-熊果苷、氫醌和苯酚4種原料進行同時定量測定。該檢測方法能有效區分α、β-熊果苷，且對4種原料的檢測靈敏度較高，可滿足檢測需求，也為化妝品科學監管提供技術支撐。

1 儀器、試劑與材料

電子天平Sartorius BT125D；電子天平SartoriusBSA224S-CW；高效液相色譜儀配熒光檢測器島津LC-20A；高速振蕩機EYELA CM-1000；離心機Thermo fisher Multifuge X1R；昆山超聲波清洗器KQ500DE。

標準物質信息：α-熊果苷（上海安譜，批號236 0141，純度96.9%）；β-熊果苷（上海安譜，批號2354 678，純度9 9.70%）；氫醌（Dr.E，批號G1229980，純度99.49%）；苯酚（上海安譜，批號23556 6 4，純度99.9%）。甲醇（色譜純，Merck公司）。樣品均為市售化妝品。

2 方法

2.1 溶液的制備

2.1.1 標準儲備溶液

分別稱取α-熊果苷、β-熊果苷、氫醌和苯酚4種原料標準物質10 mg，經甲醇溶解定容至10 mL，配制濃度為1 mg/mL的標準儲備溶液。

2.1.2 混合標準溶液

分別量取一定體積的4種原料，置于同一個10mL容量瓶中，用甲醇定容，配制成α-熊果苷、β-熊果苷、氫醌和苯酚濃度分別為100、100、10、20 μg/mL的混合標準溶液。

2.1.3 混合標準系列溶液

分別移取0.025、0.050、0.10、0.20、0.80、2.0mL混合標準溶液，置于10 mL容量瓶中，用甲醇定容，得α和β-熊果苷濃度分別為0.25、0.5、1、2、8、20 μg/mL、氫醌濃度分別為0.025、0.05、0.1、0.2、0.8、2 μg/mL和苯酚濃度分別為0.05、0.1、0.2、0.4、1.6、4 μg/mL的混合標準系列溶液。配制過程見表1。

2.1.4 樣品前處理

稱取樣品1.0 g（精確至0.0001 g）于15 mL離心管中，用甲醇定容至10 mL，渦旋30 s，800 W，40 kHz超聲30 min，10，000 r/min離心5 min，經Nylon0.45μm濾膜過濾，取濾液作待測溶液。

2.2 色譜條件

色譜柱：SHIMADZU Shim-pack GIST C18（250mm×4.6 mm×5 μm）；流動相：A水-B甲醇，洗脫程序見表2。流速：0.5 mL/min；柱溫：25℃；進樣量：5 μL；檢測波長：α-熊果苷、β-熊果苷激發波長及發射波長分別為292、337 nm，氫醌激發波長及發射波長分別為298、345 nm，苯酚激發波長及發射波長分別為280、318 nm。

2.3 測定及計算

分別取混合標準系列以及待測溶液進行進樣和色譜分析，橫坐標為混合標準系列溶液濃度，縱坐標為峰面積，繪制標準曲線。進待測溶液，通過保留時間定性，測得峰面積后依據標準曲線得到待測溶液中4種原料的濃度，按公式（1）計算樣品中4種原料的含量。

3 方法學評價及結果

3.1 線性關系

α-熊果苷和β-熊果苷的線性范圍為0.25～20mg/L，氫醌的線性范圍為0.025～2 mg/L，苯酚的線性范圍為0.1～4 mg/L，線性范圍內，進樣量與峰面積呈良好線性關系，待測4種原料線性相關系數R 2均＞0.999。線性方程分別為Y=414267X+4067.24、Y = 4 618 2 3X +10 2 91. 6、Y = 4 0 7 757X -1214 0 . 2、Y=1.48669e+006X-706.711。

3.2 定量限

方法最低定量濃度溶液配制過程見表3。稱取基質空白，分別加入標準溶液0.050、0.050、0.060、0.030 mL，置于15 mL離心管中，按樣品前處理方法得到待測溶液進行測定。此時溶液中各組分濃度與最低定量濃度相當，實際定量限S/N＞10，α-熊果苷、β-熊果苷的最低定量限均為5.0 μg/g，氫醌的最低定量限為0.60 μg/g，苯酚的最低定量限為0.62μg/g，滿足方法定量限要求，結果見表4。

3.3 檢出限

稱取基質空白，加入方法最低定量濃度溶液4.00 mL，置于10 mL離心管中，按樣品前處理方法得到濾液進行測定。此時溶液中各組分濃度與方法檢出濃度相當，實際檢出限S/N＞3，2種熊果苷檢出限均為2.0 μg/g，氫醌檢出限為0.24 μg/g，苯酚檢出限為0.60 μg/g，滿足方法檢出限的要求，結果見表4。

3.4 精密度

分別采用4種基質的空白加標樣品考察方法的精密度，其中α-熊果苷和β-熊果苷的加標濃度為20 mg/L，氫醌的加標濃度為2 mg/L，苯酚的加標濃度為4 mg/L。在相同條件下平行處理6份樣品，按樣品前處理方法得到濾液進行測定，根據測定結果的RSD計算方法的峰面積和保留時間的日內RSD。同條件下連續測6 d，得方法峰面積和保留時間的日間相對標準偏差。結果顯示，用該方法處理不同類型化妝品時，日內相對標準偏差RSD范圍為0.2%～1.8%，日間相對標準偏差RSD范圍為0.6%～2.7%（n = 6），此外，保留時間的日內和日間RSD均小于0.1%，說明該方法精密度良好，見表5。

3.5 回收率

在液態水基、膏霜乳液、凝膠、面膜、粉類5種空白樣品中進行4種化合物在3個濃度水平的加標回收率實驗，其中α-熊果苷和β-熊果苷低、中、高3個水平的加標濃度分別為0.25、1、20 mg/L；氫醌低、中、高3個水平的加標濃度分為0.025、0.1、2 mg/L；苯酚低、中、高3個水平的加標濃度分為0.05、0.2、4 mg/L，不同濃度水平樣品平行6份，按樣品前處理方法得到待測溶液進行測定，計算平均回收率RSD。4種原料在5種基質中的回收率范圍為95.4%～103.8%，RSD范圍為0.4%～2.6%。結果顯示，回收率及精密度（RSD）均較好，說明該方法準確、靈敏，能用于多類型化妝品中4種原料的同時測定，見表6。

3.6 實際樣品分析

所測30批美白類化妝品（其中10批標識成分中含有熊果苷，20批未標識含4種原料），在10批標識成分含有熊果苷的樣品中，4批檢出α-熊果苷，含量在80～380 μg/g，6批檢出β-熊果苷，含量在90～546 μg/g。20批未標識含4種原料的樣品中，1批檢出了α-熊果苷，含量為186 μg/g ，1批檢出了β-熊果苷，含量為328 μg/g。說明美白類化妝品存在標簽與實際配方不一致的情況。

4 結 論

通過線性關系、定量限、檢出限、精密度和回收率等多個方面，驗證了《化妝品安全技術規范》（2015年版）第四章8.2化妝品中α-熊果苷等4種原料檢驗方法（液相色譜-熒光檢測器法），即同時測定液態水基、膏霜乳液、凝膠、面膜、粉類化妝品中的α-熊果苷、β-熊果苷、氫醌和苯酚的方法簡便、靈敏、快速、準確，滿足化妝品日常檢測需求，可為美白類化妝品標簽標識的規范化管理、質量控制和日常監管提供技術支持。

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作者簡介

嚴倩云，碩士研究生，理化檢驗技術師，研究方向為食品及化妝品檢測。

韓曉萍，通信作者，碩士研究生，主任藥師，研究方向為藥品及化妝品檢測。

（責任編輯：袁文靜）