一例鴨疫里默氏桿菌病的病原分離鑒定及治療

摘 要：為確診廣西田東縣某肉鴨場疑似鴨漿膜炎的發病原因，無菌采集發病鴨的腦、肝臟及心臟組織，開展細菌分離培養與鑒定，并進行藥敏試驗和致病性試驗。結果顯示，分離菌在鮮血瓊脂平板上呈表面平滑、略微凸起、邊緣規則整齊、具有光澤且半透明的奶油狀菌落；革蘭氏染色、鏡檢為陰性短小桿菌，瑞氏染色則呈現兩極濃染特征。生化試驗鑒定結果與鴨疫里默氏桿菌的生化特性相符，致病性試驗表明其具有較強致病性，藥敏試驗顯示該菌對氟苯尼考、多西環素、紅霉素高度敏感。試驗結果表明，引發該鴨場發病的病原為鴨疫里默氏桿菌，通過采取相應治療措施，病情得到了有效控制。

關鍵詞：鴨疫里默氏桿菌；分離鑒定；藥敏試驗；治療

中圖分類號：S858.32 文獻標識碼：C 文章編號：1673-1085（2024）11-0016-05

鴨疫里默氏桿菌病又稱鴨傳染性漿膜炎，是一種由鴨疫里默氏桿菌（Riemerella" anatipestifer，RA）引起鴨、鵝的接觸性傳染性疾病，多發生于1～8周齡雛鴨，發病率和死亡率極高[1]。肉鴨感染RA后表現眼鼻有分泌物、頭頸歪斜、腿翅癱軟、走路搖擺、仰翻臥地、兩腿呈劃水狀、共濟失調和抽搐、腹瀉、肛門周圍羽毛粘有糞便等癥狀，剖檢可見典型的心包炎、肝周炎和氣囊炎的病變[2]。RA血清型眾多，全球已發現至少21種，國內流行至少13種[3]，因不同血清型間缺少交叉免疫保護，疫苗保護效力有限，抗生素仍為治療RA感染的常用手段。但由于抗菌藥物的過度使用，導致RA對其它病原菌的耐藥性增加，并且RA在臨床上經常與其它病原菌發生混合感染，已成為影響養鴨業的一種重要細菌性疾病。

2023年4月，田東縣平馬鎮某養鴨場飼喂的2 500只25日齡肉鴨突然發病，發病后每天死亡約65只，病死率高達53%。病鴨臨床上表現精神抑郁、走路不穩、搖頭等癥狀，剖檢可見心包膜增厚、混濁，表面有灰黃色纖維素性滲出物，心包液增多。肝臟腫大，表面覆蓋略帶黃色纖維素性薄膜。氣囊混濁增厚，氣囊壁上附有纖維素性滲出物。根據以上臨床癥狀、病理變化，初步診斷為鴨疫里默氏桿菌病。為進一步確診，無菌采集發病鴨的腦、心臟及肝臟等組織樣本，開展RA的分離鑒定工作，并對RA的耐藥性及致病性進行評估，以期為田東縣鴨疫里默氏桿菌病的治療和防控提供科學依據。

１" 材料與方法

1.1" 材料

1.1.1" 試驗動物" 5只發病鴨來自廣西田東縣平馬鎮某養鴨場，25日齡；12只14日齡健康雛鴨，購于田東縣家禽交易市場。

1.1.2" 主要試劑" 巧克力培養基、普通營養瓊脂培養基、麥康凱培養基、鮮血瓊脂培養基、胰蛋白酶大豆肉湯（TSB）、革蘭氏染色試劑盒、瑞士染色試劑盒、抗菌藥敏紙片、生理生化鑒定試劑，均購自杭州微生物試劑有限公司。

1.2" 方法

1.2.1" 病理剖檢" 解剖發病鴨，觀察腹腔內器官的病理變化，同時填寫解剖記錄單。

1.2.2" 細菌分離純化及形態觀察" 剖檢發病鴨，無菌采集腦、肝臟、心臟組織各20 g，分別存放到無菌EP管中，冷藏保存備用。鮮血瓊脂培養基、普通瓊脂培養基、麥康凱瓊脂培養基分別劃線接種腦、心、肝組織，鮮血瓊脂培養基置CO2培養箱培養12 h，普通營養瓊脂培養基、麥康凱瓊脂培養基置37 ℃恒溫培養箱培養12 h。挑取單個典型菌落，接種到巧克力瓊脂培養基中純化培養，隨后將純化后的單菌落接種到TSB進行增菌培養，并保存菌種。

1.2.3" 分離菌的生化試驗" 挑取分離菌的純化單菌落接種于乳糖、枸櫞酸鹽、七葉苷、蔗糖、甘露醇、麥芽糖、吲哚、葡萄糖、尿素、賴氨酸、硫化氫、氧化酶、M-R、V-P、觸酶15種生化鑒定管中，接種后的生化管置于37 ℃、5%CO2恒溫培養箱中培養24～48 h，按照生化鑒定試劑說明書對各種生化鑒定管的試驗結果進行判定。

1.2.4" 藥敏試驗" 按《獸醫微生物學實驗指導》紙片擴散法進行藥敏試驗[4]，取分離菌純化后的菌液150 L，均勻涂抹在鮮血瓊脂培養基上，待菌液吸收后，無菌操作將氟苯尼考、慶大霉素、新霉素、卡那霉素、阿米卡星、頭孢噻肟、阿莫西林、紅霉素、復方新諾明、多西環素、恩諾沙星、環丙沙星、多黏菌素13種抗菌藥物的藥敏紙片貼在鮮血瓊脂培養基表面上，置37 ℃培養24 h。最后測量抑菌圈并記錄結果，按說明書判定藥物敏感性。

1.2.5" 動物回歸試驗" 將分離菌接種于巧克力培養基上，37 ℃恒溫條件下培養36 h。然后刮取菌落，加入生理鹽水，制成細菌混懸液，調整菌濃度至10 CFU/mL。12只14日齡麻鴨分為2組，即試驗組、對照組，每組6只。試驗組鴨腹腔注射分離菌混懸液0.5 mL/只；對照組鴨腹腔注射生理鹽水0.5 mL/只。各組鴨分別飼養，密切觀察其發病及死亡狀況。剖檢死亡的雛鴨，無菌采集腦、肝臟、心臟組織，細菌分離培養與鑒定。

2" 結果

2.1" 病理剖檢

心外膜覆蓋一層黃白色的纖維素性包膜，見圖1A；肝臟體積明顯增大，表面有黃白色纖維素性滲出物，見圖1B；氣囊渾濁且增厚，氣囊壁上可見針尖大小類似蛋黃的物質。除此之外，還有個別病例脾臟呈現斑點樣腫脹，腎臟間質明顯可見，小腸壁較薄，腸腔內有黃色液體聚集。

2.2" 細菌分離純化及形態觀察

在麥康凱平板和普通平板未見菌落生長，在鮮血瓊脂平板上生長表面平滑、略微凸起、邊緣規則整齊、具有光澤且呈現半透明的奶油狀菌落。挑取單菌落進行染色、鏡檢，可見革蘭氏陰性的單個存在或呈鏈狀排列的無芽胞短小桿菌；瑞士染色兩極濃染，符合RA形態特征。將成功分離出的菌株命名為TDRA-01。

2.3" 生化試驗

生化試驗結果顯示，分離菌對尿素、氧化酶和觸酶反應陽性，不分解任何糖類，見表1。分離菌的生化反應結果均與RA的生化特征一致。結合培養特性、菌體形態和生化反應結果，初步判定該株分離菌為RA。

2.4" 藥敏試驗結果

藥敏試驗結果見表2。13種抗生素中，分離菌株對氟苯尼考、紅霉素、多西環素3種藥物高度敏感（3/13），對慶大霉素、新霉素、卡那霉素、頭孢噻肟、環丙沙星5種藥物中度敏感（5/13），對阿米卡星、阿莫西林、復方新諾明、恩諾沙星、多黏菌素5種藥物耐藥（5/13）。

2.5" 分離菌的動物回歸試驗

接種后1～3 d，試驗組的雛鴨表現出與發病鴨相似的臨床癥狀，精神沉郁、食欲減退或廢食，眼、鼻有漿液性的分泌物、呼吸困難、斜頸、轉圈、倒退、扎堆聚集，排黃色或黃綠色糞便等，一般2～3 d內就會死亡，而對照組雛鴨未發現異常。解剖病死鴨，可見心臟有石灰樣的纖維素性滲出物包裹；肝臟腫大且質地脆弱，表面有纖維素性滲出物；氣囊渾濁，脾臟略腫大，呈紅灰色斑駁狀，表面有灰白色壞死點；腦膜及腦實質血管擴張、淤血。這與發病鴨的剖檢變化極為相似。病死雛鴨的腦、肝、脾組織無菌接種于巧克力瓊脂培養基上，培養24 h后，經染色鏡檢和生化試驗，所得結果均與接種菌株一致。

3" 防治措施

根據診斷及藥敏試驗結果，采取以下防治措施：（1）按照發病前每天350 kg飼料量計算用藥劑量，10%多西環素700 g與10%氟苯尼考700 g聯合拌入飼料中飼喂，持續5 d；（2）瀕死鴨、病死鴨作深埋無害化處理，防止感染假定健康鴨群；（3）加強飼養管理，認真做好衛生清潔和消毒，確保通風良好，防止扎堆，降低鴨群應激反應。用藥第5天，鴨群再無發病，病情得以有效控制。

4" 討論

養鴨業在田東縣發展庭院經濟模式中占據著重要地位，為群眾帶來了明顯的增收效果。但隨著鴨養殖密度不斷增大，養殖環境差等問題日益凸顯，鴨疫里默氏桿菌病等細菌性疾病頻繁發生。鴨疫里默氏桿菌（RA）屬于革蘭氏陰性菌，有莢膜，不形成芽孢，無內孔且不能運動，歸屬于黃桿菌科里默氏桿菌屬，它能通過呼吸道和皮膚傷口水平傳播，也可垂直傳播[5]。當前，多種病原微生物混合感染的情況極為常見，且臨床癥狀和病理變化極為相似甚至相同，臨床上區分RA與大腸桿菌、沙門氏菌和多殺性巴氏桿菌感染十分困難[5]，因此對病原微生物進行實驗室檢測很有必要?，F階段，細菌分離純化、形態觀察、生化試驗是基層獸醫工作者對臨床分離菌株初步鑒定的常用實驗室診斷方法。本試驗通過對發病鴨剖檢、細菌分離鑒定與生化試驗，初步判斷分離菌株TDRA-01為鴨疫里默式桿菌。需要注意的是，已有研究表明不同來源的RA在生化特性上存在部分差異，大部分RA不發酵碳水化合物，只有少數菌株能夠發酵葡萄糖、果糖和麥芽糖等[6]，單靠生化試驗結果診斷會出現偏差。這提示基層獸醫工作者面臨實驗室條件限制時，對病例的診斷除結合臨床癥狀、細菌分離鑒定、生化實驗等常用方法外，還可以利用動物回歸試驗、商品化的PCR診斷試劑盒等方法確診。

RA血清型較多，國際已報道有21種，且各種血清型之間不產生交叉保護，投喂抗菌藥物是當前普遍采用的防治手段[7]。使用抗生素防治RA感染的同時，也增加了耐藥菌株的出現和傳播，這給鴨疫里默氏桿菌病的防治帶來很大困難。從RA耐藥性來看，不同地方不同時間分離的RA耐藥性差異較大[8]。本次藥敏試驗結果顯示，分離菌對5種抗生素產生了耐藥性，高度敏感藥物僅有氟苯尼考、紅霉素、多西環素3種。由此可見，分離菌TDRA-01耐藥性較強、耐藥范圍比較廣泛。目前臨床上用于治療RA的常規藥物種類相對有限；一些藥物在較低濃度時，其療效作用已經微乎其微，這也使得臨床藥物防治該病的難度進一步增加。穿梭用藥、聯合用藥和高價藥品的使用，不僅導致畜禽養殖成本的上升，也將進一步加劇RA對個別藥品產生耐藥性。因此，建議將敏感藥物選為該病例的臨床治療藥物，避免因耐藥性帶來經濟損失。

鴨傳染性漿膜炎是鴨的一種接觸性、急性或慢性、敗血性傳染病，其主要對1～8周齡雛鴨影響較大，以2～3周齡的雛鴨最易感。本病的發生、流行與環境因素有著極為緊密的關聯。衛生條件較差、飼養密度過高、飼料營養不均衡或缺乏維生素、微量元素等，都易造成本病的繼發或并發病毒性肝炎、大腸桿菌等混合感染。養殖過程中，應認真做好飼養管理工作，這是預防鴨疫里默氏桿菌病的重要關鍵環節[9]。

參考文獻：

[1]" 刁有祥.禽病學[M].北京：中國農業科學技術出版社，2010.

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[3]" 劉闖，陳鋒，廖理克，等.鴨疫里默氏桿菌血清型的研究進展[J].湖北農業科學，2008（3）：355-357．

[4]" 姚火春.獸醫微生物實驗指導（第2版）[M].北京：中國農業出版社，2002：43-44.

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[6]" 胡洋，黃書倫，程方俊，等.鵝源鴨疫里默氏桿菌的分離鑒定及藥敏試驗 [J]. 黑龍江畜牧獸醫，2018（2）：112-115.

[7]" 劉傳輝，韓楠.鴨疫里默氏桿菌商丘流行株的分離鑒定及耐藥性分析[J].中國獸醫雜志，2022，58（8）：

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[8]" 關椿久，朱寅初，鄭雪，等.鴨疫里默氏桿菌耐藥現狀及耐藥機制研究進展[J].中國家禽，2022，44（2）：

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[9]" 陳翠騰，程龍飛，傅光華，等.一例鴨１型甲肝病毒和11型鴨疫里默氏桿菌混合感染的診斷及其病原的分離鑒定[J].中國畜牧獸醫，2016，4（11）：3053-3058.

收稿日期：2024-05-09

第一作者：陸璐（1970—），男，本科，獸醫師，從事動物疫病防控和畜牧獸醫技術推廣工作，E-mail：LZF18977635113@163.com

通信作者：班雪花（1975—），女，本科，高級獸醫師，從事動物疫病防控工作，E-mail： 1071511569@qq.com