環(huán)己基氨基磺酸鈉的測定能力驗證結果分析

摘 要：目的：組織實驗室參加CFAPA-2473果汁中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測定能力驗證來考察實驗室的檢驗能力。方法：根據(jù)參試指導書的要求對試樣進行前處理，采用液相色譜-質譜/質譜法和氣相色譜法進行測定，設計平行樣、加標回收、人員比對、儀器比對、方法比對、質控樣等多種質控方式來評價測定結果。結果：CFAPA-2473 A組150#樣品的測定結果為0.099 6 g·kg-1，Z值為0.10；B組180#樣品的測定結果為0.322 g·kg-1，Z值為0.46。結論：A組、B組結果的|Z|值均≤2，實驗室測定結果評價為滿意，說明實驗室具備環(huán)己基氨基磺酸鈉的測定能力，實驗室的質量控制能有效運行。

關鍵詞：環(huán)己基氨基磺酸鈉；能力驗證；質量控制

Analysis of Capability Verification Results of Determination of Sodium Cyclohexylamine Sulfonate

ZHENG Lisi， YAN Liyi， CHEN Zhuohao， RONG Jinqing， DONG Qiuxia

（Jiangmen Food Inspection Institute， Jiangmen 529000， China）

Abstract： Objective： To organize the laboratory to participate in the CFAPA-2473 verification plan for the determination ability of sodium cyclohexylamine sulfonate in fruit juice to evaluate the laboratory’s testing ability. Method： The samples were pre-treated according to the requirements of the test instructions， and the samples were determined by LC-MS/MS and gas chromatography. A variety of quality control methods were designed to evaluate the test results， such as parallel samples， standard addition and recovery， personnel comparison， instrument comparison， method comparison， and quality control samples. Result： The measurement result of CFAPA-2473 group A 150# sample is 0.099 6 g·kg-1， with a Z-value of 0.10; the measurement result of group B 180# sample is"0.322 g·kg-1， with a Z-value of 0.46. Conclusion： The absolute value of Z-value in both group A and group B is≤2， the laboratory test results were evaluated as satisfactory， indicating that the laboratory has the ability to determine sodium cyclohexylamine sulfonate. The quality control of the laboratory can operate effectively.

Keywords： sodium cyclohexylamine sulfonate; capability verification; quality control

環(huán)己基氨基磺酸鈉（C6H12NNaO3S）是一種無營養(yǎng)的甜味增強劑，別名甜蜜素，其甜度是蔗糖的30倍。環(huán)己基氨基磺酸鈉作為食品添加劑主要應用在冷凍食品、水果罐頭、蜜餞涼果、糕點、飲料、果凍等食品中[1]。環(huán)己基氨基磺酸鈉在國際癌癥研究機構（International Agency for Research on Cancer，IARC）公布的致癌物清單（Ⅲ類）內。長期過量攝入環(huán)己基氨基磺酸鈉會導致肝臟出現(xiàn)損傷，尤其是肝臟功能比較弱以及免疫力低下的幼兒和老年人。

能力驗證是通過實驗室間比對確定檢驗室檢驗能力的活動。它由認可機構或其授權/認可的機構組織和運作，旨在監(jiān)督和考核檢驗室的檢驗水平。參加能力驗證可以評價檢驗室數(shù)據(jù)的有效性和可靠性[2]。

為了提高實驗室對環(huán)己基氨基磺酸鈉的檢驗能力，組織實驗室參加CFAPA-2473果汁中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測定能力驗證來考察實驗室的檢驗能力。從實際情況出發(fā)，設計檢驗方案，采用多種質量控制方式，包括平行樣、加標回收、比對（人員、儀器、方法）、質控樣等方式來評價檢驗結果，總結工作中遇到的問題，從實踐中提升實驗室的檢驗技術水平[3]。本次能力驗證采用氣相色譜法和液相色譜-質譜/質譜法進行檢測。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

環(huán)己基氨基磺酸鈉標準品（純度99.9%），天津阿爾塔；環(huán)己基氨基磺酸鈉-D4標準溶液（100 μg·mL-1），天津阿爾塔；蘋果汁中環(huán)己基氨基磺酸鈉質控樣（CFAPA-QC1685A-1），大連中食國實；CFAPA-2473能力驗證樣品A組150#樣品、B組180#樣品，大連中食國實。

1.2 儀器與設備

氣相色譜儀（SP00221、SP00246），TRACE1300賽默飛公司；液相色譜串聯(lián)質譜儀（SP00154），TQ-S micro沃特世公司；分析天平（LE204E/02），梅特勒托利多公司。

1.3 儀器工作條件

1.3.1 氣相色譜儀的工作參數(shù)

色譜柱：DB-17毛細管柱（30 m×0.250 mm，0.25 μm，安捷倫公司）；載氣：高純氮氣；進樣口溫度：250 ℃；進樣方式：分流進樣，分流比為5∶1；柱箱升溫程序：初始溫度50 ℃，維持3 min，以10 ℃·min-1升溫到70 ℃，保持0.5 min，再以30 ℃·min-1升溫到220 ℃，保持6 min；檢測器：火焰離子化檢測器；檢測器溫度：250 ℃。

1.3.2 液相色譜串聯(lián)質譜儀的工作參數(shù)

（1）色譜條件。色譜柱：C18毛細管柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm，沃特世公司）；進樣體積：5 μL；流動相：A相為乙腈，B相為10 mmol·L-1乙酸銨溶液；流速：0.25 mL·min-1；柱溫：40 ℃；梯度淋洗程序見表1。

（2）質譜條件。離子源：電噴霧離子源；掃描形式：負離子；毛細管電壓：0.5 kV；錐孔電壓：30 V；脫溶劑溫度：500 ℃；特征選擇離子詳見表2。

1.4 實驗步驟

1.4.1 樣品預處理

根據(jù)參試指導書的要求對能力驗證樣品進行前處理。樣品前處理（氣相色譜法）：稱取2 g樣品，渦旋超聲提取，于冰浴中衍生化，取上清液過濾膜，上機測定；樣品前處理（液相色譜-質譜/質譜法）：稱取2 g樣品，準確加入環(huán)己基氨基磺酸同位素內標液（5 μg·mL-1）200 μL，用乙腈溶液（含0.1%甲酸）定容到20 mL，混勻，渦旋超聲提取，取上清液過濾膜，上機測定；同時做空白試驗[4]。

1.4.2 標準溶液的配制

（1）氣相色譜法標準溶液的配制。定量吸取標準儲備液（環(huán)己基氨基磺酸鈉），于冰浴衍生化后，配制標準工作曲線6 μg·mL-1、12 μg·mL-1、30 μg·mL-1、60 μg·mL-1、120 μg·mL-1、300 μg·mL-1和600 μg·mL-1。環(huán)己基氨基磺酸鈉通過水提取，酸性條件下與亞硝酸鈉反應，產生環(huán)己醇和環(huán)己醇亞硝酸酯，經正庚烷提取，火焰離子化檢測器檢驗，外標法定量。

（2）液相色譜-質譜/質譜法標準溶液的配制。吸取定量標準儲備液（環(huán)己基氨基磺酸鈉），精確加入環(huán)己基氨基磺酸鈉-D4標準儲備液；配制標準工作曲線10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1、200 ng·mL-1、500 ng·mL-1和1 000 ng·mL-1（內標液濃度為50 ng·mL-1）。環(huán)己基氨基磺酸鹽經提取后，液相色譜串聯(lián)質譜儀測定，相對離子豐度和保留時間定性，同位素稀釋內標法定量。

1.4.3 質量控制方法

為了驗證數(shù)據(jù)的準確性，設計多種質控方式來評價能力驗證的檢驗結果。

（1）平行樣實驗。稱取3份樣品同時進行實驗，通過計算樣品的相對標準偏差（Relative Standard Deviation，RSD）來分析檢驗結果的精密度。

（2）加標回收實驗。先對樣品進行初測，再做加標回收實驗，加標濃度控制為樣品目標物濃度的0.5～1.5倍，且不超出標準曲線的上限。本次實驗加標量為600 μg，測定加標樣的目標物含量，通過加標回收率確認數(shù)據(jù)的準確性。

（3）人員比對。通過選取檢驗員1和檢驗員2用同一儀器（氣相色譜儀SP00221）對目標化合物進行測定，比較檢驗結果差異，評估數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性。

（4）儀器比對。利用氣相色譜儀SP00221和SP00246進行檢驗測定，比較兩臺儀器檢驗結果的數(shù)據(jù)差異，驗證儀器的穩(wěn)定性。

（5）方法比對。使用氣相色譜法和液相色譜-質譜/質譜法測定樣品，比較方法間的數(shù)據(jù)差異，評價方法的穩(wěn)定性。

（6）質控樣。本次實驗選用與能力驗證相同基質（蘋果汁）的質控樣品來測定，評價實驗室的檢驗能力。實驗組別詳見表3。

2 結果與分析

2.1 回歸方程、相關系數(shù)、平行樣精密度

分別用氣相色譜法和液相色譜-質譜/質譜法對系列標準工作溶液進行測定，繪制標準曲線，得出線性回歸方程和相關系數(shù)R詳見表4。實驗相關系數(shù)R均＞0.999，滿足《實驗室質量控制規(guī)范 食品理化檢測》（GB/T 27404—2008）的要求（校準曲線的相關系數(shù)R≥0.99）[5]。

A組、B組分別稱取3份能力驗證樣品進行測定并計算精密度RSD，結果詳見表5。可以看出各組別的精密度RSD均小于5%，精密度滿足GB/T 27404—2008的要求（實驗室內變異系數(shù)為15%）。

2.2 人員比對、儀器比對、方法比對

從表5的組別1、組別2可以看出，兩名不同的檢驗員的檢測結果平均值的相對相差為0.62%～3.06%。從組別1、組別3可以看出，使用兩臺不同氣相色譜儀檢測結果平均值的相對相差為0.92%～4.98%。從組別1、組別4可以看出，使用兩種不同方法檢測結果平均值的相對相差為0.31%～1.10%。數(shù)據(jù)表明環(huán)己基氨基磺酸鈉的測定受人員、儀器和方法的影響較小，數(shù)據(jù)的重現(xiàn)性較好，符合檢驗標準的要求（絕對差值≤算術平均值的15%）。

2.3 加標回收

稱取A組150#果汁樣品，測定本底值，加入0.50 mL標準中間液（1 200 μg·mL-1），前處理后上機檢測，得到回收率數(shù)據(jù)詳見表6。可以看出各組別加標回收率在97.0%～100.3%，滿足GB/T 27404—2008的要求（回收率在95%～105%）。

2.4 質控樣

稱取蘋果汁中環(huán)己基氨基磺酸鈉質控樣（CFAPA-QC1685A-1）前處理后上機測定，結果詳見表7。，其中x表示質控樣測定值，X表示質控樣指定值，σ表示質控樣標準差。如果|Z|≤2，為滿意結果；如果2＜|Z|＜3，為可疑結果；如果|Z|≥3時，為不滿意結果。結果顯示，各實驗組別的|Z|均≤2，質控結果為滿意，表明實驗室檢測數(shù)據(jù)準確可靠。

2.5 樣品評價

根據(jù)測定結果和參試指導書的要求，本實驗室選擇以組別1報出結果（折算回收率）。能力驗證A組150#樣品報出結果為0.099 6g·kg-1，B組180#樣品為0.322 g·kg-1。能力驗證的結果詳見表8，|Z|均≤2，能力驗證結果評價為滿意。

3 結論

實驗室參加CFAPA-2473果汁中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測定能力驗證獲得滿意的結果，表明實驗室具備環(huán)己基氨基磺酸鈉的測定能力。結合多種質控措施來評價實驗室測定結果的可靠性，實驗數(shù)據(jù)表明檢測數(shù)據(jù)準確、可靠，多種比對方式的評價結果一致。本次能力驗證從實踐中提升了檢驗室的檢驗水平，增強了自身的綜合競爭力。

參考文獻

[1]國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.食品安全國家標準 食品添加劑使用標準：GB 2760—2014[S].北京：中國標準出版社，2014.

[2]陳科，章錦涵，周憶蓮，等.控制圖等多種質量控制方法在大豆粉檢測能力驗證中的應用[J].食品安全質量檢測學報，2020，11（16）：5512-5519.

[3]蔡展帆，陳曉敏，熊含鴻，等.巧克力中鎘的定量測定能力驗證結果與分析[J].食品安全質量檢測學報，2018，9（12）：2941-2946.

[4]國家衛(wèi)生健康委員會，國家市場監(jiān)督管理總局.食品安全國家標準 食品中環(huán)己基氨基磺酸鹽的測定：GB 5009.97—2023[S].北京：中國標準出版社，2023.

[5]國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局，中國國家標準化管理委員會.實驗室質量控制規(guī)范 食品理化檢測：GB/T 27404—2008[S].北京：中國標準出版社，2008.