2023年江西部分地區豬場CSFV、PRRSV、PRV的抗體檢測與分析

摘要：為了解我國江西不同地區的中小型豬場豬瘟（CSF）、豬繁殖與呼吸障礙綜合征（PRRS）和豬偽狂犬病（PR）的疫苗免疫水平和病毒感染狀況，2023年上半年通過酶聯免疫吸附（ELISA）對采自江西四個地區的中小型豬場的234份血清樣品進行抗體檢測。結果表明，CSF、PR的免疫情況較好，PRRS的免疫情況較差；豬瘟病毒（CSFV）平均抗體陽性率為96.2%；豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒（PRRSV）平均抗體陽性率為51.3%；豬偽狂犬病毒（PRV）gB的抗體陽性率為90.2%、gE的抗體陽性率為0.4%，存在野毒感染的情況，本研究旨在為江西部分地區豬CSFV、PRRSV、PRV的科學防控提供一定參考。

關鍵詞：抗體檢測；豬瘟；豬繁殖與呼吸障礙綜合征；豬偽狂犬病

豬瘟（CSF）是由豬瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）感染導致豬的一種以高熱和出血為主要癥狀的重要傳染病，舊稱豬霍亂，嚴重危害了全球養豬業的發展[1]，已被世界動物衛生組織（WOAH）歸入為必須報告的動物疫病[2]，截至目前應對該病最好的手段是疫苗免疫。豬繁殖與呼吸障礙綜合征（PRRS）又稱豬藍耳病，是由豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起的一種高度傳染性疾病，已被WOAH列入疫病目錄，同時國內也將高致病性藍耳病列為一類動物疫病，近年也有研究結果表明，目前國內主要流行毒株為NADC30毒株[3]，同時毒株的基因重組也進一步加劇了PRRSV的防控難度[4-5]。豬偽狂犬病（PR）是由偽狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）引起的一種高度接觸性傳染病，豬是該病的唯一宿主，其臨床癥狀常表現為腦脊髓炎、流產、生殖衰竭、嚴重的神經癥狀[6-7]。近幾年新出現的流行毒株相比于經典毒株其毒力更強，給我國養豬業帶來了巨大的經濟損失及新的挑戰[8]。本次實驗通過ELISA對江西部分地區中小豬場進行抗體水平檢測，并對結果進行分析，為上述三種疫病的防控提供一定的理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1）樣品來源。2023年分別對江西4個地區（贛州、萍鄉、宜春、高安）中小型豬場隨機采集234份血液樣品，樣品主要以懷孕中期母豬為主。待血液樣品凝固后吸取血清5 000 r/min離心2 min進一步分離血清，-20 ℃保存備用。

2 ）主要試劑。CSFV、PRRSV、PRV-gB、PRV-gE抗體檢測試劑盒，均為北京金諾診斷（金諾百泰生物科技有限公司）。

3）主要儀器。酶標儀，型號Infinite200 PRO，瑞士帝肯集團公司；高速離心機，型號5424，德國Eppendoft；移液器，德國Eppendoft；微孔板恒溫振蕩器，型號Leopard70-2A，普萊特科學儀器（北京）有限公司；電熱恒溫培養箱，型號SPX-250BIII，天津泰斯特。

1.2 方法

1）三種病毒ELISA抗體檢測及結果判定。按照CSFV、PRRSV、PRV-gE 和 PRV-gB 病毒抗體檢測試劑盒說明書進行操作。基本操作過程如下：加入稀釋血清、陰性血清和陽性血清孵育→洗滌→加入酶標抗體孵育→洗滌→加入底物孵育→加入終止液→ OD 值測定與分析。3種病毒抗體檢測結果按說明書標準判定（表 1）。注意所有檢測試劑盒組分在使用前需恢復至 18 ～ 25 ℃條件下操作。

2 結果

2.1 總體檢測情況

在采集的江西省四個地區共234份樣品中，CSFV抗體陽性率為96.2%，變異系數為0.31，免疫水平較高且抗體水平整齊度高，達到國家規定的免疫標準免疫（抗體合格率保持在70%以上）；PRRSV抗體陽性率為51.3%，變異系數為1.59%，免疫水平不達標且抗體水平整齊度不高，未達到國家規定的免疫標準；PRV-gB的陽性率為90.2%，變異系數為1.34%，免疫效果較好但抗體水平參差不齊；PRV-gE抗體陽性率為0.4%，其結果表明該地區有野毒感染但不嚴重。具體結果見表2。

2.2 不同病原抗體檢測情況

1）CSFV抗體檢測結果。CSFV不同地區統計結果（表3）表明：贛州、萍鄉、宜春、高安在四個地區中免疫水平最好的為高安100%，最低為贛州90%，其結果表明，江西部分地區CSF抗體陽性率均保持在較高水準，且變異系數較低，總體免疫狀態良好。

2）PRRSV抗體檢測結果。PRRSV不同地區統計結果（表4）表明：江西四個地區的PRRSV免疫水平差異較大其中贛州免疫情況良好高安次之，其余兩個地區免疫效果均未達到免疫標準，免疫水平較低，其中萍鄉地區抗體陽性率僅為11.1%。

3）PRV抗體檢測結果。PRV不同地區統計結果（表5、表6）表明：萍鄉市PRV-gB抗體陽性率最高，為100%；其次是萍鄉、贛州和宜春。萍鄉地區存在一定比例的PRV-gE抗體陽性，提示存在一定程度的野毒感染。

3 討論

CSF、PRRS、PR作為豬場基礎免疫指標，其免疫效果關乎整個豬群的健康狀況和生產效益，目前由于該三類疫病的商品化疫苗眾多，進而導致不同地區不同豬場的免疫效果存在較大差異，因此通過血清學方法第一時間掌握豬群抗體水平并制定相應措施，對這三類疫病的防控甚至凈化具有重要的生產意義。

在本次調查的CSFV抗體結果表明江西各地區CSFV抗體陽性率均在90%以上，均超過農業農村部70%的標準，其中高安地區陽性率更是達到100%，各地區免疫效果較好且群體抗體水平整齊度高。近年來，我國市場上已有60余家企業獲得豬瘟疫苗的政府生產批文[9]，新型豬瘟基因工程亞單位疫苗相繼研究成功并開始推廣使用[10]，疫苗具有更高的安全性和穩定性，這可能是大部分豬場CSFV免疫抗體相比于其他疫病抗體合格率逐年升高的原因，也表明江西省各地區都比較重視豬瘟的免疫工作，這也與高映雪[11]調查了江西地區2016—2018年CSFV抗體陽性率的結果相似， 也間接說明了豬瘟的抗體合格率與高品質的豬瘟疫苗和科學的免疫程序存在相關性[12]。

本次調查經ELISA檢測PRRSV血清樣本共234份，總體抗體陽性率僅51.3%，且變異系數高，群體免疫效果差，從不同區域對比來看，其中只有贛州地區抗體合格率達標陽性率為90%，宜春地區抗體合格率為47.7%，萍鄉地區陽性率最低僅有11.1%，導致這種現象的原因一方面可能是該地區豬場并不重視藍耳疫苗免疫，另一方面原因可能是該地區沒有制定科學合理的免疫程序，杜喜忠等[13]的研究表明藍耳的減毒活疫苗和豬瘟活疫苗同時使用存在明顯的干擾作用，根據以上結果，建議這兩個地區豬場應該重視藍耳病的生物安全防控，制定合理的疫苗免疫方案，并通過抗體檢測結果采取相應的應對措施降低損失、提高生產效益[14-16]。

本次調查PRV-gB血清樣本陽性率為90.2%，其中陽性率最高的地區為高安，其次為萍鄉、贛州、宜春，陽性率分別為100%、96.1%、85%和84.4%，同時萍鄉地區檢測到不同例的PRV-gE抗體，提示該場存在一定程度野毒感染，這也說明即使存在高滴度的疫苗抗體也不能完全抵擋野毒感染，這也與段群鵬[17]和李海琴[18]調查的結果類似，因此對PRV的防控甚至凈化，還需要完善生物防控體系，同時使用對豬群使用保健產品以提高豬群非特異性免疫，配合gE基因缺失苗及時淘汰感染豬以達到凈化PRV的目的。

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