高效液相色譜法測定蜂蜜中的果糖和葡萄糖

摘 要：目的：建立高效液相色譜法測定蜂蜜中的果糖和葡萄糖的分析方法。方法：試樣用超純水經渦旋提取，離心沉淀除去雜質，過水性濾膜后供高效液相色譜儀檢測。結果：果糖與葡萄糖色譜分離效果較好，在0.2～10.0 mg·mL-1線性關系良好，相關系數R均大于0.999，方法檢出限均為0.2 g/100 g、定量限均為0.5 g/100 g，加標回收率為90.0%～104.8%，相對標準偏差為0.06%～0.57%。結論：建立的方法適用于蜂蜜中的果糖和葡萄糖的檢測。

關鍵詞：高效液相色譜法；蜂蜜；果糖；葡萄糖

Determination of Fructose and Glucose in Honey by High Performance Liquid Chromatography

Abstract： Objective： Establish an analytical method for determining fructose and glucose in honey using high-performance liquid chromatography. Method： The sample is extracted with ultrapure water by vortex extraction， centrifuged to remove impurities， and then filtered through a water-based membrane for detection by high-performance liquid chromatography. Result： The chromatographic separation of fructose and glucose is effective， with a good linear relationship in the range of 0.2～10.0 mg·mL-1 and correlation coefficients R greater than 0.999. The detection limits of the method are 0.2 g/100 g and the quantification limits are 0.5 g/100 g， respectively. The recovery rate of spiked samples is in the range of 90.0%～104.8%， and the relative standard deviation is 0.06%～0.57%. Conclusion： The established method is applicable for the detection of fructose and glucose in honey.

Keywords： high-performance liquid chromatography; honey; fructose; glucose

蜂蜜是一種歷史悠久、甘甜美味的天然食品，深受廣大消費者喜愛。果糖和葡萄糖是天然蜂蜜中的主要成分，含量在60～80 g/100 g，然而由于野生蜂蜜與農家蜂蜜的價格相對昂貴，部分不法分子和小商販為謀求利潤，通常將價格低廉的蔗糖摻雜到天然蜂蜜中以次充好，因此，加強蜂蜜中主要糖分（果糖和葡萄糖）的檢測非常重要[1]。目前，國內檢測蜂蜜中果糖和葡萄糖含量的方法主要有高效液相色譜法、離子色譜法、旋光法和化學方法等[2]，其中高效液相色譜-示差折光檢測器法操作簡便、靈敏度高、準確度好，因此本文參照《食品安全國家標準 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖的測定》（GB 5009.8—2023）第一法[3]，建立了高效液相色譜法測定蜂蜜中果糖和葡萄糖的分析方法，以期為相關部門加強蜂蜜品質監管和打擊摻雜售假提供技術支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

某品牌蜂蜜，購自轄區超市；果糖標準物質CDAA-RM-D0171794-1g（濃度99.7%），上海安譜實驗科技股份有限公司；葡萄糖純度標準物質GBW10062（濃度99.6%），中國計量科學研究院。

1.2 儀器與設備

U3000型高效液相色譜儀（配示差折光檢測器），美國安捷倫公司；PTX-FA210S分析天平（精度0.1 mg），福州華志科學儀器有限公司；Multi Reax多管旋渦振蕩器，德國海道爾夫公司；JYEC-20實驗室超純水機，北京嘉遠環保科技有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 標準溶液配制

（1）混合標準儲備液配制。準確稱取1 g果糖標準物質、1 g葡萄糖標準物質于50 mL燒杯中，用適量超純水溶解后，全部轉移至50 mL容量瓶，準確吸取2.5 mL乙腈加入該容量瓶中，用超純水稀釋、定容至刻度，配制成果糖、葡萄糖濃度均為20.0 mg·mL-1的混合標準儲備液。

（2）混合標準工作系列配制。分別吸取0.1 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL和5.0 mL濃度為20.0 mg·mL-1的果糖、葡萄糖混合標準儲備液于10 mL容量瓶中，用超純水稀釋、定容至刻度，配制成果糖、葡萄糖濃度均為0.2 mg·mL-1、2.0 mg·mL-1、4.0 mg·mL-1、6.0 mg·mL-1和10.0 mg·mL-1的混合標準工作系列溶液。

1.3.2 試樣處理過程

稱取1 g（精確至0.000 1 g）蜂蜜試樣于50 mL比色管中，加入超純水稀釋、定容至刻度，置于多管旋渦振蕩器上渦旋混勻后，轉移至50 mL離心管中，置于4 000 r·min-1轉速的離心機中離心5 min，取上清液用0.45 μm水性針式過濾器過濾，上機分析，同時做試樣空白。

1.3.3 液相色譜條件

色譜柱：Polaris 5 NH2氨基色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈與水的體積比（70∶30）；洗脫程序：等度洗脫；流速：1.00 mL·min-1；柱溫：40 ℃；檢測器：示差折光檢測器，溫度40 ℃；進樣量：10 μL；根據保留時間定性，色譜峰面積比較定量。

2 結果與分析

2.1 色譜分離分析

將配制的果糖與葡萄糖的混合標準工作溶液上機分析，由圖1可知，果糖與葡萄糖的色譜峰可以較好地分離，色譜峰尖銳對稱，且流動相中的溶劑峰與試樣中的雜質峰并未對目標組分色譜峰產生干擾，可以進行定性、定量檢測。

2.2 線性關系與檢出限、定量限

以果糖、葡萄糖的質量濃度為橫軸，以果糖、葡萄糖的色譜峰面積為縱軸，繪制標準曲線。同時稱取2 g陰性樣品，添加0.2 mL濃度為20.0 mg·L-1的混合標準儲備液，按照1.3.2試樣處理過程、1.3.3液相色譜條件進行測試，以果糖、葡萄糖色譜峰的信噪比S/N≥3對應濃度為方法檢出限、信噪比S/N≥10對應濃度為方法定量限。由表1可知，果糖、葡萄糖在0.2～10.0 mg·mL-1時，線性關系良好，相關系數R均大于0.999，果糖、葡萄糖的檢出限均為0.2 g/100 g、定量限均為0.5 g/100 g。

2.3 加標回收率與精密度

稱取18份經檢測果糖本底值為34.03 g/100 g、葡萄糖本底值為33.59 g/100 g的蜂蜜試樣，分成3組，分別添加低（1倍定量限）、中（2倍定量限）、高（10倍定量限）3個濃度水平的標準溶液，按照本文建立的方法將每個含量水平平行測定6次，計算加標回收率與精密度。由表2可知，果糖與葡萄糖的加標回收率為90.0%～104.8%，相對標準偏差（Relative Standard Deviation，RSD）為0.06%～0.57%。

2.4 實際樣品檢測

在轄區內超市、農貿市場等采集了22種蜂蜜樣品，采用本研究中方法進行檢測，結果見表3。有1批次棗花蜜中果糖和葡萄糖含量為54.9 g/100 g，低于《食品安全國家標準 蜂蜜》（GB 14963—2011）[4]中果糖和葡萄糖含量≥60 g/100 g的規定，檢出率為4.55%。

3 結論

本研究建立了高效液相色譜法測定蜂蜜中的果糖和葡萄糖的分析方法，結果表明，果糖與葡萄糖在液相色譜儀Polaris 5 NH2色譜柱上的分離效果較好，果糖、葡萄糖在0.2～10.0 mg·mL-1時，線性關系良好，相關系數R均大于0.999，果糖、葡萄糖的檢出限均為0.2 g/100 g、定量限均為0.5 g/100 g。果糖與葡萄糖的加標回收率為90.0%～104.8%，RSD為0.06%～0.57%，均符合《食品安全國家標準 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖的測定》（GB 5009.8—2023）與《實驗室質量控制規范食品理化檢測》（GB/T 27404—2008）[5]中的規定，采用本研究方法對市場上采集的20批次蜂蜜樣品進行檢測，檢出率為4.55%，可見，相關部門還需加強對蜂蜜產品質量的監管檢測。

參考文獻

[1]黃良江.HPLC法同時測定蜂蜜中3種還原糖成分的含量[J].山東化工，2023，52（13）：143-147.

[2]陳海燕，程仕群，胡騰鑫，等.蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖的穩定性[J].食品工業，2021，42（11）：237-242.

[3]中華人民共和國國家衛生健康委員會，國家市場監督管理總局.食品安全國家標準 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖的測定：GB 5009.8—2023[S].北京：中國標準出版社，2023.

[4]中華人民共和國衛生部.食品安全國家標準 蜂蜜：GB 14963—2011[S].北京：中國標準出版社，2011.

[5]中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局，中國國家標準化管理委員會.實驗室質量控制規范食品理化檢測：GB/T 27404—2008[S].北京：中國標準出版社，2008.