新疆部分地區(qū)種鴿場沙門菌血清學調(diào)查

摘要：為探究新疆部分地區(qū)鴿雞白痢、雞傷寒抗體與攜帶沙門菌情況之間的關(guān)系，試驗以新疆地區(qū)的三個規(guī)模化養(yǎng)鴿場（A、B、C場）為實驗對象，采用平板凝集法對鴿場表觀健康的鴿進行雞白痢、雞傷寒抗體檢測，并無菌采集抗體結(jié)果為陽性的肛拭子進行沙門菌的分離鑒定。旨在了解雞白痢抗體與攜帶沙門菌情況之間的相關(guān)性。為新疆部分地區(qū)種鴿場開展凈化工作提供參考。

關(guān)鍵詞：血清學調(diào)查；沙門菌；種鴿場

沙門菌是一種具有廣泛宿主范圍和傳播途徑的食源性細菌病原體，對包括人類、畜禽和野生動物在內(nèi)的多類生物均構(gòu)成嚴重威脅[1]。家禽感染沙門菌主要呈現(xiàn)為兩種形式，一種是雞白痢和雞傷寒，另一種是禽副傷寒，且這兩種血清型在家禽中感染率較高[2]。新疆地區(qū)作為種鴿的高產(chǎn)地，其產(chǎn)量尤為顯著。然而，沙門菌通過蛋進行垂直傳播，導致胚胎或雛鴿迅速死亡，從而給鴿養(yǎng)殖業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失[3]。鑒于沙門菌帶來的嚴重影響，世界動物衛(wèi)生組織已將該疫病列為法定報告動物疫病，我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部亦將其明確劃分為二類動物疫病。多年來，各國針對不同畜禽的沙門菌病，積極采取了檢疫淘汰、種群凈化、免疫預(yù)防、藥物防治等防控策略和措施，使得疫情得到了有效控制[3]。在我國，隨著養(yǎng)殖業(yè)的不斷發(fā)展，多個種禽場已經(jīng)開始實施雞白痢、雞傷寒沙門菌的凈化工作。目前禽沙門菌病主要關(guān)注雞白痢沙門菌的凈化[4]。其中全血或血清的平板凝集試驗方法被廣泛應(yīng)用。而就種鴿場雞白痢和雞傷寒抗體與沙門菌病原之間的相關(guān)性則鮮有報道。該研究提醒種鴿場在進行疫病凈化工作時，務(wù)必全面考慮血清學和病原學兩方面的檢測結(jié)果，以確保防疫措施的科學性與有效性。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

2023年2月—2023年11月，分別在和田和喀什地區(qū)的種鴿場采樣，無菌采集外表健康的28日齡種鴿翼根靜脈全血樣品共14 018份（A場9 282份、B場3 726份、C場1 010份）。并無菌采集陽性鴿肛拭子共1 189份（A場313份、B場337份、C場539份），裝入提前備好的BPW肉湯培養(yǎng)基中，低溫送至實驗室檢測。

1.2 主要試劑及儀器

雞白痢雞傷寒多價染色平板凝集試驗抗原（配套平板凝集試驗卡），購自中海生物科技有限公司。BPW、RVS肉湯、HE瓊脂、SS瓊脂均購自青島海博生物科技有限公司。革蘭氏染色劑，購自珠海貝索生物技術(shù)有限公司；PCR反應(yīng)相關(guān)試劑（2×Taq PCR Green Mix、ddH2O），購自北京全金生物技術(shù)有限公司。

1.3 方法

第一，雞白痢雞傷寒抗體檢測。按照試劑說明書進行具體操作。

第二，沙門菌的分離鑒定。采集的樣本接種至SS瓊脂平板上，并在37℃下恒溫培養(yǎng)18 h。隨后將所有疑似菌落轉(zhuǎn)移至HE瓊脂平板上，繼續(xù)以相同的條件進行培養(yǎng)。待培養(yǎng)時間達到后，將選擇疑似為沙門菌的菌落進行革蘭氏染色，并在顯微鏡下觀察其菌落形態(tài)和顏色。

第三，PCR鑒定。根據(jù)參考文獻[5]設(shè)計沙門菌屬invA基因特異性引物序列進行PCR擴增，將PCR擴增產(chǎn)物在1.0 %瓊脂糖凝膠中電泳，通過凝膠成像分析系統(tǒng)觀察并記錄結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 鴿源沙門菌抗體陽性率檢測結(jié)果

A場：抗體陽性率為3.37 %（313/9 282）；B場：抗體陽性率為9.04 %（337/3 726）；C場：抗體陽性率為53.4 %（539/1 010）（圖1、表1）。

2.2 沙門菌分離鑒定結(jié)果

1 189份抗體呈陽性的鴿肛拭子未能成功分離出沙門菌。

3 討論

經(jīng)過對新疆地區(qū)三個規(guī)模化養(yǎng)鴿場所采集的14 018份血清樣品進行平板凝集試驗抗體檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)新疆不同地區(qū)的鴿群普遍存在沙門菌感染情況，且平均陽性率達到了6.20 %。

其中和田地區(qū)的陽性率高于喀什地區(qū)。不同地域和品種的地方鴿沙門菌個體陽性率存在顯著差異，這可能與養(yǎng)殖環(huán)境、種鴿品種及飼養(yǎng)模式等因素密切相關(guān)。同時，對比其他地區(qū)雞白痢抗體陽性率，江蘇（25.50 %）、貴州（83.87 %）、泰州（17.30 %）、河南（25.54 %）等地的陽性率均高于新疆地區(qū)[6-9]，這進一步證實了新疆地區(qū)沙門菌感染率相對較低。這種差異可能與養(yǎng)殖場種鴿來源、養(yǎng)殖環(huán)境及氣候等因素相關(guān)。根據(jù)國家的相關(guān)規(guī)定，原種雞場必須確保全部檢測結(jié)果為陰性。對于祖代種雞場，其陽性率必須嚴格控制在0.2 %以下；而對于父母代種雞場，其陽性率需維持在0.5 %以下。此外，這些種雞場必須連續(xù)兩年以上無臨床病例出現(xiàn)，才能滿足凈化評估的標準要求[10]。鑒于本研究的陽性率偏高，提示我們新疆地區(qū)的種鴿沙門菌凈化工作應(yīng)從種源抓起。本研究發(fā)現(xiàn)種鴿的抗體檢測結(jié)果呈陽性，而病原檢測結(jié)果則為陰性。這一現(xiàn)象表明種鴿可能曾感染過沙門菌。考慮到所有檢測樣品均來源于外觀健康的種鴿，推測個體在感染并康復后，體內(nèi)可能產(chǎn)生了相應(yīng)的抗體。另外，也有可能是沙門菌在種鴿泄殖腔中的數(shù)量較少，因此在采集拭子樣品時未能成功獲取到足夠的病原。此外，未能成功從肛拭子樣本中分離出沙門菌菌株，這一結(jié)果與目前已有的文獻報道一致[11]。健康帶菌鴿的血液中是否存在抗體并非絕對，這取決于多種因素。同時，抗體檢測呈陽性也并不能完全確定從這些鴿子體內(nèi)分離出沙門菌，健康帶菌鴿的血液中是否存在抗體，受到多種因素的影響。首先，鴿子的免疫系統(tǒng)對沙門菌的應(yīng)答程度會有所不同，這取決于個體的遺傳背景、年齡、營養(yǎng)狀況以及之前的感染歷史。一些鴿子可能具有強大的免疫系統(tǒng)，能夠有效地抑制沙門菌的繁殖，同時產(chǎn)生足夠的抗體來中和細菌，這些鴿子可能表現(xiàn)出明顯的抗體反應(yīng)。然而，也有一些鴿子可能由于免疫系統(tǒng)較弱或其他原因，即使它們攜帶沙門菌，也無法產(chǎn)生足夠的抗體。在某些情況下，鴿子可能已經(jīng)感染了沙門菌，但由于免疫系統(tǒng)的作用，細菌的數(shù)量可能非常低，無法通過常規(guī)的分離方法檢測到。此外，抗體檢測的方法和靈敏度也會對結(jié)果產(chǎn)生影響。不同的檢測方法可能對抗體的檢測閾值有所不同，因此，同樣的樣本在不同的檢測方法下可能會得到不同的結(jié)果。所以，在解釋抗體檢測結(jié)果時，需要考慮使用的檢測方法、實驗條件以及可能的誤差范圍。在評估鴿子的健康狀況和沙門菌感染情況時，需要綜合考慮多種因素，包括鴿子的臨床癥狀、飼養(yǎng)環(huán)境、飼料和水源的質(zhì)量以及定期的監(jiān)測和檢測。同時，對于攜帶沙門菌的鴿子，需要采取適當?shù)念A(yù)防和控制措施，以減少疾病傳播的風險。

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