2023年浙江部分地區豬場CSFV、PRRSV、PRV的抗體檢測與分析

摘要：為了調查我國浙江地區中小型規模豬場豬瘟（CSF）、豬繁殖與呼吸障礙綜合征（PRRS）和豬偽狂犬病（PR）的疫苗免疫情況，2023年下半年對浙江不同地區中小型規模豬場的121份血清樣品采用了酶聯免疫吸附試驗（ELISA）進行抗體檢測及分析。結果顯示，豬場CSF、PR的免疫情況較好，PRRS的抗體水平整齊度不高；豬瘟病毒（CSFV）平均抗體陽性率為90.9%；豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒（PRRSV）平均抗體陽性率為65.3%；豬偽狂犬病毒（PRV）gB的抗體陽性率為86.8%、gE的抗體陽性率為18.2%，存在野毒感染的情況。本調查結果為完善浙江地區豬場防疫工作，科學評價豬場免疫情況，切實提升豬場疫病防控質量和水平提供一定依據。

關鍵詞：抗體檢測；豬瘟；豬繁殖與呼吸障礙綜合征；豬偽狂犬病

豬瘟，曾稱“豬霍亂、爛腸瘟”，是由豬瘟病毒（Classical swine fever Virus， CSFV）引起的豬（包括野豬）一種高度接觸性傳染病。一旦發生豬瘟疫情，將會造成養豬業巨大的經濟損失 [1-2]。PRRS又稱豬藍耳病，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus， PRRSV）引起豬的一種急性、高度傳染的病毒性傳染病，嚴重威脅生豬養殖業[3-5]。臨床上主要表現為繁殖障礙和呼吸困難，由于發病后，病豬的耳部皮膚會出現發紺的現象，故又稱該病為 “藍耳病”[6]。豬偽狂犬病是由豬偽狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）引起的豬的急性傳染病。該病在豬群呈暴發性流行，可引起妊娠母豬流產，不發情等繁殖功能障礙；公豬不育；新生仔豬大量死亡；育肥豬呼吸困難等，是危害全球養豬業的重大傳染病之

一[7]。目前這幾種病毒性傳染病嚴重影響豬場的生物安全，造成很大的經濟損失，而疫苗免疫接種是目前最好的預防措施。為了更好地了解浙江不同地區中小規模豬場免疫水平， 2023年下半年對浙江不同地區中小型規模豬場的121份血清樣品采用了酶聯免疫吸附測定（ELISA）進行抗體檢測及分析，為完善浙江地區豬場防疫工作，科學評價豬場免疫情況，切實提升豬場疫病防控質量和水平提供一定依據。

1 材料與方法

1.1 材料

（1）樣品來源。2023年下半年分別對浙江4個地區（湖州、慈溪、金華、衢州）中小型豬場隨機采取121份血液樣品，樣品主要以懷孕中期母豬為主。待血液樣品凝固后吸取血清5 000 r/min離心2 min進一步分離血清，-20 ℃保存備用。

（2）主要試劑。CSFV、PRRSV、PRV-gB、PRV-gE抗體檢測試劑盒，均為北京金諾診斷（金諾百泰生物科技有限公司）。

（3）主要儀器。酶標儀，型號Infinite?200 PRO，瑞士帝肯集團公司；高速離心機，型號5424，德國Eppendoft；移液器，德國Eppendoft；微孔板恒溫振蕩器，型號Leopard70-2A，普萊特科學儀器（北京）有限公司；電熱恒溫培養箱，型號SPX-250BIII，天津泰斯特。

1.2 實驗方法

目前血清學診斷技術在生產實際中一般使用具有較低的成本，可被大范圍地使用的幾種技術，如酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、間接血凝試驗、中和實驗、瓊脂擴散實驗、補體結合實驗。其中ELISA 的最大優勢是高靈敏性和高特異性、成本低、操作簡單、效率高、穩定性強等各項優點，是目前實驗室檢測各類動物疫病抗體的常用方法。本試驗通過ELISA方法對血清樣本中CSFV、PRRSV、PRV-gE 和 PRV-gB 抗體進行檢測。

1.3 操作步驟及判定標準

（1）操作步驟。按照CSFV、PRRSV、PRV-gE 和 PRV-gB 病毒抗體檢測試劑盒說明書進行操作。基本操作過程如下：加入稀釋血清、陰性血清和陽性血清孵育→洗滌→加入酶標抗體孵育→洗滌→加入底物孵育→加入終止液→ OD 值測定與分析

（2）判定標準。3種病毒抗體檢測結果按說明書標準判定（表 1）。注意所有檢測試劑盒組分在使用前需恢復至 18～25 ℃條件下操作。

2 結果

2.1 總體檢測情況

在采集的浙江省四個地區共121份樣品中，CSFV抗體陽性率為90.9 %，變異系數為0.28，免疫水平較高且抗體水平整齊度高，達到國家規定的免疫標準免疫（抗體合格率保持在70 %以上）；PRRSV抗體陽性率為65.3 %，變異系數為0.86，免疫水平不達標且抗體水平整齊度不高，未達到國家規定的免疫標準；PRV-gB的陽性率為86.8 %，變異系數1.18，免疫效果較好但整齊度不高；PRV-gE抗體陽性率為18.2 %，其結果表明該地區存在野毒感染的情況。具體結果見表2。

2.2 不同病原抗體檢測情況

（1）CSFV抗體檢測結果。CSFV不同地區統計結果（表3）表明：湖州、慈溪、金華、衢州在四個地區中免疫水平最好的為湖州100 %，最低為慈溪有79.1 %，其結果表明，浙江部分地區CSF抗體陽性率均保持在較高水準，且變異系數較低，總體免疫狀態良好。

（2）PRRSV抗體檢測結果。PRRSV不同地區統計結果（表3）表明：浙江四個地區的PRRSV抗體水平差異較大其中慈溪抗體水平最高，其抗體陽性率為95.8 %，其余三個地區免疫效果均未達到國家免疫標準，抗體水平較低，其中衢州地區抗體陽性率不到50 %。

（3）PRV抗體檢測結果。PRV不同地區統計結果（表3）表明：金華地區PRV-gB抗體陽性率最高，為92.7 %；其次是湖州、衢州和慈溪。湖州地區存在一定比例的PRV-gE抗體陽性，其抗體陽性率為88 %，提示當地野毒感染比較嚴重。

3 討論

據農業農村部統計，近期豬新發傳染病多達20種，其中豬瘟、豬藍耳病、豬偽狂犬病是目前危害中國養豬業最為嚴重的3種主要傳染病[8]。疫苗接種是目前規模化豬場預防重要傳染病的基本措施，但由于不同豬場使用的疫苗種類、生產廠家以及免疫程序都有不同，導致免疫后豬群血清抗體水平參差不齊。對豬瘟、豬藍耳病、偽狂犬抗體水平進行免疫檢測，既可以及時了解疫苗免疫效果，又可有效地評估疫病的感染壓力和風險 [9]。

根據本次調查的CSFV抗體結果表明浙江各地區CSFV抗體陽性率均在90 %以上，均超過農業農村部70 %的標準，整體免疫效果好。近年來，我國市場上已有60余家企業獲得豬瘟疫苗的政府生產批文[10]，疫苗的種類是影響免疫效果的主要因素，選擇優質的疫苗加上合理的免疫程序對于豬場起到關鍵性作用[11]。疫苗具有更高的安全性和穩定性，這可能是大部分豬場CSFV免疫抗體相比于其他疫病抗體合格率逐年升高的原因，也表明浙江省各地區都比較重視豬瘟的免疫預防工作，與劉錦韋[12]調查了蒼南縣地區CSFV抗體陽性率的結果相似，由此也說明該地區對豬瘟免疫工作比較到位，豬瘟疫苗的免疫效果較好，從而對豬瘟防控工作取得顯著的成效。

本次調查經ELISA檢測PRRSV血清樣本共121份，總體抗體陽性率僅為65.3 %，從不同區域對比來看，其中慈溪地區抗體陽性率為95.8 %，達到了我國農業農村部要求的PRRS 疫苗抗體陽性率 70 % 的標準；金華、湖州、衢州地區抗體陽性率分別為65.4 %、52 %、41.2 %，并沒有達到70 %的標準，導致這種情況分析原因有以下幾點：一是2017年我國取消PRRS強制性免疫政策影響[13]，豬場依據自身豬場情況和經驗制定適合自身豬場的免疫防護策略；二是2018年以來，非洲豬瘟傳入我國，很多生豬規模廠由于人力和資源有限等原因， 防控重心轉移到非洲豬瘟上，導致 PRRS免疫無法做到全覆蓋；三是地方州市可能財政緊缺， PRRS疫苗無法根據實際情況納入財政采購預算有關[14]。

本次調查PRV-gB血清樣本陽性率為86.8 %，其中抗體陽性率最高的地區為金華，其次為湖州、衢州、慈溪，抗體陽性率分別為92.7 %、88 %、82.4 %和79.2 %。龐超等[15]、呂素芳等[16]研究發現豬偽狂犬的毒力因子是gE基因，我國實際生豬養殖過程中多采用PRVgE基因缺失疫苗預防豬偽狂犬病，有檢測到gE抗體陽性，則可辨別豬存在野毒感染[17]，湖州地區檢測到PRV-gE抗體陽性率為88 %，說明該地區野毒感染情況較為嚴重，需要調整免疫程序，完善生物安全防控體系。

參考文獻：

[1] ZIMMERMANJJ，KARRIKERL A，RAMIREZA，等.豬病學[M].10版.趙德明，張仲秋，周向梅，等譯.北京：中國農業大學出版社，2014.

[2] MOENNIG V.Introduction to classical swine fever：virus，disease and control policy[J].Veterinary Microbiology，2000，73（2）：93-102.

[3] CHAUDHARI J，LEME RA，DURAZO-MARTINEZ K，et al，A single amino acid substitution in porcine reproductive and respiratory syndrome virus glycoprotein 2 significantly impairs its infectivity in macrophages[J].Viruses，2022，14（12）：2822.

[4] 王夢杰，張文立，王欣榮，等.豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬圓環病毒三型、豬流感病毒三重RT-PCR檢測方法建立及初步應用[J].微生物學通報，2022，49（12）：5092-5099.

[5] 劉鈴，王丹丹，崔凱，等.豬繁殖與呼吸綜合征抗病育種研究進展[J].畜牧獸醫學報，2023，54（2）：434-442.

[6] Molitor T W，Bautista E M，Choi C S.Immunity to PRRSV：Double-edged sword[J].Veterinary Microbiology，1997，55（1）：265.

[7] 馬增軍，袁萬哲.豬用疫苗生產與應用關鍵技術[M].北京：中國農業大學出版社，2021.

[8] 焦陽陽.2016年陜北部分豬場四種病毒病抗體檢測及有效微生物對母豬生產性能的影響[D].西北農林科技大學，2017.

[9] 程素平，董飛，王秋生，等.江蘇省海安市2019年一季度豬瘟抗體檢測結果分析[J].湖北畜牧獸醫，2019，40（10）：10-12.

[10]李利山，劉玉香，韓斌.豬瘟疫苗的研究進展[J].中國動物保健，2023，25（3）：116-8.

[11]張寧，佘桐，李旭，等.兩種不同豬瘟疫苗對育肥豬的免疫效果比較[J].畜牧獸醫雜志，2023，42（5）：16-19.

[12]劉錦偉，章國永，肖云和，等.蒼南縣某豬場主要疫病的免疫抗體檢測與分析[J].浙江畜牧獸醫，2023，48（2）：8-10.

[13]謝嘉賓，李淳，陳斌，等.2020年四川省高致病性豬藍耳病流行情況調查[J].畜禽業，2021，32（12）：78-79.

[14]陳小萍.影響豬藍耳病疫苗免疫效果的因素與對策[J].畜牧獸醫科技信息，2022（4）：158-160.

[15]龐超，司之春，李修松，等.后非洲豬瘟時代樓房模式豬舍生物安全探討[J].中國豬業，2021，16（2）：80-83.

[16]呂素芳，郭廣君，魏鳳，等.豬偽狂犬病病毒gE-/gl-/TK-多基因缺失活疫苗對豬的安全性與免疫效力研究[J].動物醫學進展，2014，35（4）：1-5.

[17]劉世榜，朱曉瓊，謝燕紅.尤溪縣2020-2022年種畜場豬偽狂犬病抗體監測與分析[J].福建畜牧獸醫，2023，45（6）：40-42.