用屠宰生豬血清監測豬免疫抗體方法探索

摘要：生豬的免疫抗體水平評估是動物疫控部門最重要的工作，在非洲豬瘟常態化防控形勢下，所有豬場都強化了生物安全措施，嚴禁外人進入，動物疫控部門進入豬場采集血樣進行生豬免疫抗體監測變得不太現實。近年來，筆者對生豬的免疫抗體監測只限于能自主采樣的較大規模豬場，其余豬場成了監測的盲區。為解決這一問題，筆者以豬瘟為例，探索采用屠宰生豬血清監測轄區內生豬免疫抗體水平的方法，獲得了成功，使得全面監測生豬的免疫抗體成為可能。

關鍵詞：屠宰；血清；監測；免疫抗體；方法

生豬的免疫抗體水平評估是動物疫控部門最重要的工作，每年春秋兩季集中免疫后，都要隨機抽取部分豬場采集血樣，評估重大動物疫病免疫效果，在非洲豬瘟常態化防控形勢下，所有豬場都強化了生物安全措施，動物疫控部門進入豬場采集血樣進行生豬免疫抗體監測，要遵守嚴格的生物安全規定，所有進入豬場的工作人員必須經過隔離、淋浴、更衣、消毒等程序，走完這一流程需要3～5 d時間，否則，確實存在生物安全風險[1]。近年來，推行重大動物疫病免疫“先打后補”政策，要求對所有申請豬場的25 %進行免疫效果評估，生豬的免疫效果評估工作量大幅增加。就算是按洗消程序進入了豬場，采集血樣也不輕松，保定生豬是高強度的體力活，耳靜脈采血速度慢，前腔靜脈采血技術要求高。更為甚者，個別豬場以生物安全為借口，逃避主管部門的檢查、監管。事實上，近5年來，筆者沒有進入過豬場采樣。免疫抗體監測只針對具有較強技術能力、能自主采樣的較大規模豬場，而不具備采樣能力的大多數豬場成為監測的盲區，國內其他地區的情況也大致如此。上級動物疫控部門在開展疫病凈化、無疫小區評估時，也只是采用視頻監督方法，由豬場技術人員采樣[2]。

1 材料與方法

1.1 屠宰生豬血清采集

在某生豬定點屠宰場每次隨機選取2～3個豬場的生豬，調取產地檢疫證明，與屠宰生產同步，安排3名采樣人員，位于放血槽前端，待工作人員刺殺生豬后，立即從放血孔用一次性水杯接血液適量，迅速倒入50 mL或20 mL塑料離心管，每個豬場采10份左右，編號標記，室溫靜置過夜，離心，每份取血清5 mL以上。共12個豬場，120份血樣。

1.2 主要儀器、試劑

離心機、酶標儀等，豬瘟抗體阻斷ELISA試劑盒，愛得士公司生產，市購。

1.3 豬瘟抗體檢測

用阻斷ELISA方法進行豬瘟抗體檢測，具體按說明書進行操作，讀取并記錄OD值，計算阻斷率。

2 結果與分析

2.1 阻斷率情況

用A—L依次代表12個豬場，1～12為各豬場血樣序號，阻斷率情況見表1。阻斷率是直接表明血清中的抗體含量，阻斷率越高，說明血清中抗體含量越高，阻斷率極低或為負數，表明血清中不含相應抗體。

2.2 陽性率分析

按說明書判定標準，阻斷率40 %以上為陽性，陽性血清共84份，占比70 %，阻斷率30 %以下為陰性，陰性血清共24份，占比20 %，12份血樣介于30 %～40 %之間，為可疑樣品。12個豬場中9個豬場陽性率70 %以上，占比75 %。各豬場情況見表2。

2.3 離散度分析

離散度也是評價免疫效果的另一個重要指標，離散度越低，表明抗體的整齊度越高，理想的情況是阻斷率高、離散度低，表明每頭豬的抗體水平都高，免疫效果理想，如L、I豬場的情況。在阻斷率高的情況下，種豬群的離散度最好在0.3以下，肥豬0.5以下[3]，本次檢測為肥豬血清，有10個豬場達到這一標準。如果阻斷率低，離散度分析就沒有意義，如B豬場情況。各豬場阻斷率離散度情況見圖1。

2.4 免疫時間調查

采樣后，利用檢疫信息平臺，找到相應豬場聯系方式，電話調查最后一次免疫豬瘟的大致時間，從采樣時間推算，免疫后到出欄采樣間隔4～7個月（表3）。根據觀察，本次試驗所涉及生豬普遍在150 kg以上，有的豬場出欄的生豬接近或超過200 kg，可能與當前生豬的價格低迷和波動導致不同程度的壓欄有關，所以，筆者認為所調查情況基本屬實。

3 結論

第一，所有12個豬場中，有9個豬場豬瘟抗體陽性率在70 %以上，能提供有效保護，2個能提供部分保護，1個免疫失敗（或沒有免疫），豬場陽性率達75 %；從離散度分析，除B場外，都接近或0.5以下；最后一次免疫4～7個月后，一直到生豬出欄均能提供有效保護。綜合以上情況表明，豬瘟的免疫密度高，達到100 %，免疫效果較好。但免疫失敗的情況還是存在，有必要做進一步調查研究，查找免疫失敗的原因，加以改進，否則，還是有疫情散發風險。

第二，通過本次豬瘟抗體檢測，表明用屠宰生豬血樣監測免疫抗體水平是可行的，在非洲豬常態化防控情況下，具有重要的推廣應用價值。

4 討論

第一，在屠宰生產線上采集生豬血樣，簡單易行，在生產流水線上采集10頭左右血樣不到5 min，只需3人可完成，所花時間不到活豬采血的1/10，可大幅節省人力、物力成本，避免生物安全風險。在實際工作中，動物疫控部門可先隨機選定要監測的豬場，在屠宰場采集其出欄肥豬的血樣，從而實現對轄區內所有豬場的各種疫病抗體水平監測。各豬場也可采用本方法，評估其免疫效果。

第二，前期，筆者就生豬的免疫情況做過調研，豬場不論規模大小，在所有病種中，豬瘟是免疫密度最高的[4]，所以本次試驗以豬瘟為例。我國的豬瘟疫苗質量可靠，試驗表明，免疫后4～7個月，均能提供有效保護，可能是所有病種中有效保護時間最長，在制定免疫程序時，可靠前安排豬瘟免疫。生豬的重大動物疫病免疫效果評估與“先打后補”主要針對口蹄疫，其監測方法有待進一步探索、驗證。

第三，當前，各級動物疫控部門正在大力推動疫病凈化和無疫小區建設工作，各豬場在自評期間，可多批次采集出欄生豬血樣進行檢測，提高成功率。因為采樣方便，動物部門也可進行較長時期、多批次監測，以提高評估的準確性。

第四，因本次是隨機采樣，涉及的豬場不在轄區內，也不熟悉，免疫劑量、疫苗品種、母源抗體情況等不方便做全面調查，各豬場有關免疫失敗的情況或多或少存在，不便于做進一步反饋、分析。

第五，在流水線上采樣，應采剛從放血孔冒出的新鮮血液，如果混入生豬體表污水、污物等會造成血樣很快腐??；混入唾液等會造成溶血，都不能得到合格的血清樣品。從放血孔接到的血液也會迅速凝固（如果凝成了血塊，不方便倒入，但只要能裝入離心管，不會影響血清析出和檢測結果），要盡快倒入離心管，須3人以上協作。離心管以50 mL較好，方便快速倒入血液，20 mL以下不宜采用。

第六，在屠宰生產線上接取血樣時，生豬處于放血掙扎期，生豬吊在高處，掙扎激烈，且有掉落風險，須注意人身安全，并要求線上工人配合。接取血液時，筆者采用1.5 m以上長桿，前端設一圓圈，剛好將一次性水杯固定，方便又安全。

致謝：本試驗由湖南匯宏實業有限公司提供試驗生豬并全力支持采樣，特此致謝。

參考文獻：

[1] 劉志偉，何斌，楊永平，等.豬場非洲豬瘟防控之人員管理[J].豬業科學，2022，39（4）：42-44.

[2] 楊耀，王子堅，崔王芳，等.高寒牧區蕨麻豬豬瘟、口蹄疫免疫抗體研究[J].中國動物保健，2022，24（12）：13-14.

[3] 林純潔，盧明文，張文通，等.規模豬場的豬瘟免疫抗體檢測及免疫預防效果[J].浙江畜牧獸醫，2017，42（6）：5-8.

[4] 汪金發，成瓊，王劍，等.非洲豬瘟常態化防控下中小規模豬場免疫情況調查與分析[J].中國動物保健，2024，26（9）.