用屠宰生豬血清監測口蹄疫病毒O型抗體方法探索

摘要：生豬口蹄疫傳染性極強、對養豬業危害大，目前仍是生豬的強制免疫病種，是動物疫控部門最重點監測對象，每年春秋兩季集中免疫后，動物疫控部門都要隨機抽取部分豬場、采集血樣，評估免疫效果；“先打后補”政策推行以后，口蹄疫是唯一針對豬場的補貼病種，要求對25%以上申報豬場進行抽樣評估，這就意味著有大量的豬場進行抽樣監測，在非洲豬瘟常態化防控以來，所有豬場都強化了生物安全措施，動物疫控部門進入豬場采集血樣非常困難，為解決上述難題，前期，筆者以豬瘟為例，探索采用屠宰生豬血清監測轄區內生豬免疫抗體水平的方法，獲得了成功^[1]。本次沿用前期所得血樣，用固相阻斷ELISA方法檢測口蹄疫O型抗體，獲12個豬場口蹄疫免疫抗體數據，并進行了分析評估。

關鍵詞：屠宰；血清；監測；口蹄疫；免疫抗體；方法；

1 前言

生豬口蹄疫傳染性極強、對養豬業危害大，目前仍是生豬的強制免疫病種，是動物疫控部門最重點監測對象，每年春秋兩季集中免疫后，動物疫控部門都要隨機抽取部分豬場、采集血樣，評估免疫效果；“先打后補”政策推行以后，口蹄疫是唯一針對豬場的補貼病種，并要求對25 %以上申報豬場進行抽樣評估，按政策要求，存欄500頭以上就要申報，在當前生豬規模化養殖程度已顯著提高，這就意味著有大量的豬場進行抽樣監測，在非洲豬瘟常態化防控形勢下，所有豬場都強化了生物安全措施，動物疫控部門進入豬場采集血樣進行生豬免疫抗體監測，要遵守嚴格的生物安全規定，所有進入豬場的工作人員必須經過隔離、淋浴、更衣、消毒等程序，走完這一流程需要3～5 d時間，否則，確實存在生物安全風險。就算是按洗消程序進入了豬場，采集血樣也不輕松，保定生豬是高強度的體力活，耳靜脈采血速度慢，前腔靜脈采血技術要求高。所以，豬場的采血工作，動物疫控部門覺得工作量巨大，豬場也不大配合，已成為推進“先打后補”工作的主要障礙。更為甚者，個別豬場以生物安全為借口，逃避主管部門的檢查、監管。事實上，近5年來，筆者沒有進入豬場采樣，免疫抗體等監測工作只能針對具有較強技術能力、能自主采樣的較大規模豬場，而不具備采樣能力的大多數豬場成為了監測的盲區，國內其它地區的情況也大致如此，上級動物疫控部門在開展疫病凈化、無疫小區評估時，也只是采用視頻監督方法，由豬場技術人員采樣。為解決上述難題，前期，筆者以豬瘟為例，探索采用屠宰生豬血清監測轄區內生豬免疫抗體水平的方法，獲得了成功，本次沿用前期所得血樣，進行口蹄疫免疫抗體檢測，既輕松完成免疫效果評估任務，又可為部分申報“先打年補”提供依據。

2 材料與方法

2.1 屠宰生豬血清采集

在某生豬定點屠宰場進行，先調取當天入廠生豬的產地檢疫證明，隨機選取2～3個豬場的生豬，與屠宰生產同步，安排3名采樣人員，位于放血槽前端，待工作人員刺殺生豬后，立即從放血孔用一次性水杯接血液適量，迅速倒入50或20 mL塑料離心管，每個豬場采10份左右，編號標記，用A-L依次代表12個豬場，1-12為各豬場血樣序號，室溫豎立靜置過夜，離心，取血清。共12個豬場，120份血樣。

2.2 主要儀器、試劑

離心機，酶標儀等；口蹄疫病毒O型抗體ELISA檢測試劑盒，北京金諾百泰生物技術有限公司生產，市購。

2.3 口蹄疫抗體檢測

用固相阻斷ELISA方法對血清樣品進行口蹄疫O型抗體檢測，具體按檢測試劑盒說明書進行操作，讀取并記錄OD值。測得樣品A1-F10的陰性對照OD平均值為1.877，G1-L9的陰性對照OD平均值為1.832，符合試驗成立條件＞0.7；測得樣品A1-F10的陽性對照S/N平均值為0.055，G1-L9的陽性對照S/N平均值為0.058，符合試驗成立條件＜0.3。各血清樣品的OD值如表1所示。

3 結果與分析

3.1 S/N值及各豬場抗體陽性率情況

按照檢測試劑盒說明書，用S/N值作為判定標準，S/N＝血清樣品OD值/陰性對照OD均值，S/N≤0.5判定為陽性，S/N＞0.5判為陰性。S/N值越低，說明血清中抗體含量越高。各血清樣品的S/N值及各豬場抗體陽性率如表2所示。

3.2 離散程度分析

離散程（CV）是一種用來衡量同一組數據變異程度，是評價免疫效果的一個重要指標，CV值越低，離散程度越低，表明抗體的整齊度越高，理想的情況是S/N均值低、陽性率高、CV值都低，表明該批次生豬的抗體水平整體都高，免疫效果理想，相反，抗體水平低，離散程分析意義不大。各批次生豬S/N均值及CV值情況見圖1。

各豬場按陽性率從高到底排序，S/N均值從低到高排序，作為肥豬cv值0.4以下較為理想^[2-3]，其中，A、L豬場S/N均值太高，cv值分析免疫效果沒有意義，E、D、A、K豬場均較好。

4 結論

（1）檢測結果表明，5個豬場陽性率70 %以上，為免疫合格，合格率41.7 %，陽性率30-60 %5個，占41.7 %，10 %以下2個，占16.7 %。

（2）通過本次口蹄疫免疫抗體檢測，表明用屠宰生豬血樣開展重大動物疫病監測工作是可行的，在非洲豬常態化防控情況下，具有重要的推廣應用價值。

5 討論

（1）多年來，動物疫控部門進行抗體水平監測，通常是入場采樣，工作強度大，成本高，還存在生物安全風險。其中禽、羊的保定、采樣相對簡單，牛的保定勞動強度最大，生豬的保定（用鎖口器）可能對采樣動物傷害最大，整個保定采樣過程，生豬都會持續、大聲嚎叫，會導致整棟、甚至整場生豬躁動不安，產生不良應急，會影響生長速度，可盡量采用屠宰生豬血樣。

（2）口蹄疫目前在豬群中流行不高，在非洲豬瘟常態化防控情況下，部分豬場認為，由于生物安全水平大幅提高，免疫的病種可以減少，其中就包括口蹄疫，但作為強制免疫病種，各養殖單位必須100 %免疫到位。口蹄疫通常采用春、秋兩次集中免疫，秋季免疫一般10～11月份進行，本次采樣時間為1月8～10日，即免疫后2～3個月，如果進行了免疫，抗體水平處于高位維持期^[4-5]，本次檢測的情況表明，B、L豬場存在未免疫的可能，動物衛生監督部門有必要加大執法、檢查力度，確保強制免疫到位。

（3）屠宰生豬的血清可作為監測樣品，不僅容易獲得，而且量不受限制，可輕松開展多病種監測。養殖單位可以開展多病種免疫抗體的監測，全面掌握免疫情況，也可進行部分病原學監測；動物疫控部門可廣泛開展重大動物疫病監測，有利于推進“先打后補”、疫病凈化等工作；動物衛生監督部門也可開展重大動物疫病強制免疫方面的執法檢查。

（4）用屠宰動物血清作為監測樣品，不對養殖環節構成生物安全風險，有條件的地區可探索牛、羊、禽等動物的屠宰血樣監測。

致謝：

本試驗由匯宏實業有限公司提供試驗生豬，并全力支持采樣，特此致謝。

參考文獻：

[1] 成瓊，王劍，賀聰，等.用屠宰生豬血清監測豬免疫抗體方法探索（擬在《中國動物保健》2025 年第1期發表）

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