奶山羊布魯氏菌病血清學檢測方法概述

摘要：布魯氏菌病（以下簡稱布病）屬于二類傳染病，是由布魯氏菌侵入機體，引起的傳染－變態反應性的人畜共患傳染病，牛、羊、豬是主要的傳染源。目前，虎紅平板凝集實驗、快速檢測試紙與酶聯免疫吸附試驗等是規模養殖場最常用的奶山羊布病自檢方法。本文主要通過對比多種布病檢測方法的優缺點，選擇兩種以上更為有效、簡便、快捷的檢測方法相互搭配使用，為布病的有效防控提供參考。

關鍵詞：布魯氏菌病；血清學檢測方法；奶山羊

布魯氏菌病的特征主要是家畜出現流產、屢配不孕等，人體出現波浪熱、生殖器官和胎膜發炎等癥狀。近年來，隨著陜西省“培育千億級奶山羊全產業鏈”高水平高質量發展，奶山羊產業得到了快速發展，全省奶山羊養殖規模及存欄量大幅增加，動物及動物產品流通頻率加大，奶山羊疫病呈持續上升勢頭，防控形勢嚴峻，其中布病對奶山羊產業發展較為嚴重，危害社會公共安全。因此，多樣性的布病檢測方法是確保奶山羊產業健康持續發展及公眾身心健康與生命安全的重要保障。

1 虎紅平板凝集實驗（RBT）

RBT是實驗室檢測奶山羊布病最常用的方法之一，能夠及時快速診斷奶山羊布病。RBT檢測以凝集現象為判定結果，易于判斷，操作步驟簡便，使用工具簡易，實驗過程簡單，檢測時間短，試驗成本低，靈敏度高，檢出率高。因此，RBT經常用于現場及基層實驗室檢測，特別是被用于大批量奶山羊樣品的布病初篩。但RBT的判定結果影響因素較多，需要采樣人員和實驗人員提前規避。一方面，易受到非特異性抗體的影響，表現為假陽性[1]。另一方面，實驗環境和現場操作的不穩定性極易造成實驗結果的偏差。采集的奶山羊血液樣品渾濁或者出現溶血現象，以及出現反復冷凍溶解等情況，都會影響實驗結果的判定。因此，血液樣品析出高質量的血清，對奶山羊布病檢測結果的判定至關重要。

2 試管凝集試驗（SAT）

SAT是一種檢測奶山羊血清中布魯氏菌抗體的方法，常用一定量的布魯氏菌抗原與一系列受稀釋的奶山羊血清混合，在恒溫箱放置后出現肉眼可見的凝集現象，以判定受檢的奶山羊血清有無相應抗體及效價。SAT是在玻板凝集試驗的基礎上進行調整，由最初的細菌鑒定和抗體的定性檢測升級為抗血清效價的測定，現多用于實驗室少量樣品的半定量和定量試驗。SAT特異性較強，受其他干擾因子影響較小，準確率較高。但SAT也存在較多不足，實驗操作步驟較多且繁雜，實驗時間較長[2]，特別是在做大批量奶山羊樣品時，試管需求量較大，耗材需求較多，人為主觀因素的影響較大，因此，需要做對比實驗進行綜合判定。

3 全乳環狀試驗（MRT）

MRT主要是通過檢測羊奶、牛奶樣品中的抗體來判定布病檢測結果，目前實驗中用于檢測羊奶、牛奶的布病檢測較多，而其他品種的家畜尚未發現。MRT實驗結果呈現出紫紅色的乳脂環，肉眼可見，容易觀察判定[3]。MRT除了檢測單一樣品外，還可以對多個羊奶、牛奶混合樣品進行布病檢測，實驗結果不受影響。相比于血清學檢測，無需采集血液樣品，避免牛羊等產生應激反應，影響羊奶、牛奶產量。MRT能夠滿足大中型牧場自查篩選檢測布病，成本較低，操作簡便，反應快捷，特異性強，敏感性高，結果準確，是一種用于乳品布病檢測的可靠方法。然而造成假陽性的因素較多，如環境溫度高、乳品長時間存放、乳品中混入大量初乳、乳房炎樣品以及乳品腐敗變質等。因此，新鮮的、無初乳、無乳房炎及其他雜質的乳品，是MRT成敗的首要保障。

4 酶聯免疫吸附試驗（ELISA）

ELISA是以物理方法將抗體（或抗原）包被在固相載體上，通過與免疫酶作用來完成各種免疫學和生物化學反應，主要用于檢測器官、組織培養物或血液中布病抗原或監測奶山羊群中布病抗體水平及潛伏感染情況的一種良好技術。ELISA具有操作簡便、安全快捷、反應快速、靈敏度高、特異性強、穩定性好和重復性強的特點，適用于實驗室檢測診斷、及時批量檢測及大規模的疫病普查[4]。實驗室檢測布病樣品的ELISA主要有間接ELISA和競爭ELISA，它們均是用于檢測牛、羊血清中的布病抗體的常用方法，間接ELISA靈敏度較高，價格便宜，但試驗周期較長，假陽性檢出率相對較高；而競爭ELISA對血清的純凈度要求不高，但檢測結果的重現性較高。ELISA檢測奶山羊布病的靈敏度高，判定結果以臨界值為參考數值，避免了因肉眼觀察而帶來誤差。相比較其他布病檢測方法，ELISA對儀器設備要求較高，檢測試劑盒價格昂貴，成本較高[5]。自ELISA技術使用以來，其已在臨床醫學、生命科學、生物化學等領域得到了廣泛實踐及大力推廣。

5 熒光偏振測定法（FPA）

FPA是一種定量分析檢測方法，其原理是通過檢測熒光素標記的小分子與其他分子作用前后分子量的對比差，計算水平方向和垂直方向的熒光值進行相關分析。FPA具有靈敏度高，精密度高，操作簡單，樣品用量少，實驗時間短，儀器維護方法簡易，無放射性污染，檢測結果可塑性強，可大批量進行檢測。近年來，FPA備受生物學、化學、醫學等領域專家的青睞，有關FPA的學術論文或者報道越來越多，相信其也會成為奶山羊布病研究的常用方法。但儀器設備昂貴，藥品試劑專屬性強，基本均屬于進口試劑。另外，熒光標記物與樣品發生特異性反應，對熒光值產生一定的干擾。目前已有成熟的配套試劑盒，這對我國奶山羊布病防控具有重要意義[6]。

6 補體結合試驗（CFT）

CFT是利用抗原抗體復合物同補體結合，消耗掉一定濃度液體中的補體降低液體濃度，從而檢測出抗原或抗體的試驗。CFT敏感性強，特異性高，主要應用于傳染病診斷、奶山羊布病等抗原及抗體的檢測，但CFT參加反應的成分較多，影響因子復雜多變，試驗的操作步驟繁瑣，試驗時間較長，對操作人員的技術及穩定性要求嚴格，極易出錯，試驗的可重復性較差，難以廣泛推廣使用[7]。因此，在眾多檢測試驗中，CFT逐漸被其他更易被接受且重復性強的方法所替代。

7 瓊脂擴散試驗（NH-GD）

NH-GD是可溶性抗原與相應抗體在含有電解質的半固體凝膠中進行的一種沉淀試驗，其可區分鑒定布病疫苗免疫與野毒感染[8]，而其他檢測方法不能夠區分開來。NH-GD具有特異性強，重復度高，操作簡單，儀器要求難度低，是實驗室檢測奶山羊布病常用方法。目前，奶山羊布病抗原只有在腎臟等組織中可以高比例提取，但純化系數較低，而其在奶山羊全血液中很難獲得。另外，布病屬于高風險傳染病，解剖帶毒動物極易感染。因此，為了研制出更加有效且長效的布病疫苗，如何區分鑒定布病疫苗免疫與野毒感染相關的課題還有待進一步深化研究。

8 快速檢測試紙（RTP）

奶山羊布病抗體快速檢測試紙操作簡便、使用方便、反應快速、靈敏度高等特點，缺點是價格高，增加成本，適用于大規模大批量樣品的快速檢測。當前，規模化養殖場購入羊只、調運奶山羊以及乳品布病抽檢等都在大量使用快速檢測試紙，但快速檢測試紙種類、廠家較多，檢測結果參差不齊，選擇大廠家或進口檢測試紙以保證布病檢測結果的準確性[9]。布病快速檢測試紙是實驗室中診斷布病較準確的方法之一，為凈化布病提供了有力手段。

9 展望

以上幾種血清學檢測方法，均可用于篩選奶山羊布病，為后續相關試驗提供了基礎和保障。多樣性的檢測方法具有不同的優勢，但實際試驗中均存在一定的不足之處。相比較而言，RBT、MRT、NH-GD和RTP均適用于奶山羊布病大量樣品初篩選，而SAT、ELISA、FPA和CFT更適于布病陽性樣品復查；NH-GD是實驗室區分鑒定布病疫苗免疫與野毒感染的常用方法；RTP可用于檢測奶山羊全血液、血清和新鮮羊奶。目前，暫時還未找到一種具備費用低、操作簡單、使用簡便、反應靈敏、特異性高等特點的檢測方法。因此，在實驗室診斷中，必須使用兩種或兩種以上的檢測方法進行比對，來綜合分析判定試驗樣品的結果。隨著高科技水平發展，提高臨床實踐與先進儀器的協同合作，創新操作技術，簡化實驗操作步驟，提高實驗檢出效率，促進奶山羊產業的穩步發展。

參考文獻：

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