杭州某醫院高脂血癥患者ApoE基因分析

[摘要] 目的 探究高脂血癥患者載脂蛋白E（apolipoprotein E，ApoE）基因的多態性及其分布情況。方法選取2023年10月至2024年6月于杭州市第九人民醫院確診的370例高脂血癥患者，采用熒光聚合酶鏈式反應對患者的血液預處理樣本進行基因多態性檢測，比較不同性別、不同年齡段高脂血癥患者基因多態性的分布。結果 ①本研究中2個基因位點（ApoE 388T>C、ApoE 526C>T）的多態性分布符合哈迪-溫伯格遺傳平衡定律，表明具有群體代表性；②本研究中370例高脂血癥患者的ApoE基因分布情況為E3/E3 66.49%、E3/E4 20.27%、E2/E3 8.65%、E2/E4 1.89%、E2/E2 1.35%和E4/E4 1.35%，攜帶E4基因的患者比例約是攜帶E2基因的1.88倍；③ApoE基因多態性的分布差異與患者的性別和年齡無關（>0.05）。結論杭州市某醫院高脂血癥患者ApoE的基因多態性分布不均勻且分布與性別及年齡無關，建議在使用他汀類藥物治療前重視對患者ApoE基因的檢測以評估治療效果。

[關鍵詞] ApoE；基因多態性；他汀類藥物；高脂血癥

[中圖分類號] R394 [文獻標識碼] A [DOI] 10.3969/j.issn.1673-9701.2024.27.007

Analysis of ApoE gene in patients withhyperlipidemia in a hospital in Hangzhou

Department of Clinical Laboratory， Hangzhou Ninth People’s Hospital， Hangzhou 311225， Zhejiang， China

[Abstract] Objective To explore the polymorphism and distribution of apolipoprotein E （ApoE） gene in patients with hyperlipidemia. MethodsA total of 370 hyperlipidemia patients diagnosed at Hangzhou Ninth People’s Hospital from October 2023 to June 2024 were selected. Gene polymorphism was detected in the blood samples of the patients using fluorescence polymerase chain reaction， and the distribution of gene polymorphism among different genders and age groups within this population was compared. Results①The polymorphism distribution of the two genetic loci （ApoE 388T>C and ApoE 526C>T） in the studied sample population conforms to Hardy-Weinberg equilibrium， indicating that it is representative of the population; ②Among the 370 patients， the distribution of the ApoE gene was as follows： E3/E3 （66.49%）， E3/E4 （20.27%）， E2/E3 （8.65%）， E2/E4 （1.89%）， E2/E2 （1.35%）， and E4/E4 （1.35%）. The proportion of the patient population carrying the E4 allele was about 1.88 times higher than that of those carrying the E2 allele; ③The distribution differences of ApoE gene polymorphism were not related to the patients' gender and age （>0.05）. ConclusionThe distribution of ApoE gene polymorphism among hyperlipidemia patients at a hospital in Hangzhou is uneven and is not related to gender or age groups. Therefore， it is recommended to prioritize the detection of ApoE gene in patients before using statin medications to assess treatment effectiveness.

[Key words]Apolipoprotein E; Gene polymorphism; Statins; Hyperlipidaemia

隨著生活水平的提升，中國人群血脂異常的患病率呈上升態勢，成年人中血脂異常總患病率為35.6%，其中高脂血癥已成為諸多心腦血管病的主要危險因素^[1-2]。他汀類藥物是目前主要的降脂藥物和心血管疾病預防藥物，盡管大多數患者服用他汀類藥物相對安全且耐受性好，但仍有部分患者出現不同程度的肝功能異常及他汀類藥物相關肌病等不良反應，如肌肉酸痛、認知障礙、胃腸道反應及血糖升高等^[3-4]。由于他汀類藥物的不良反應與療效存在個體差異，因此服用他汀類藥物的患者依從性不足50%，進而導致心血管事件及死亡率升高^[5]。

他汀類藥物不良反應的個體差異與遺傳因素有關，尤其與載脂蛋白E（apolipoprotein E，ApoE）基因的單核苷酸多態性（single nucleotide polymorphisms，SNP）存在密切關系。ApoE基因的2個位點（388T>C、526C>T）可形成3種異構體，分別為ApoE2（388T-526T）、ApoE3（388T-526C）、ApoE4（388C- 526C）；在人群中存在6種基因型：ApoEE2/E2、ApoEE3/E3、ApoEE4/E4、ApoEE2/E3、ApoEE2/E4、ApoEE3/E4。不同基因型編碼的各異構體與脂蛋白受體的親和力及其在體內的代謝水平不同，最終造成個體間他汀類藥物的療效及不良反應的差異，其中ApoE4攜帶者與ApoE2攜帶者相比療效減弱^[6]。此外，ApoE基因多態性還與疾病的發生風險相關，ApoE4攜帶者罹患心血管疾病、神經系統疾病和傳染病的風險較高^[7-8]。

鑒于ApoE基因多態性在指導他汀類藥物合理使用及評估疾病風險中的重要作用，本研究基于熒光聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）可直擴的SNP基因分型技術，對杭州市第九人民醫院確診的370例高脂血癥患者進行檢測與分析，明確該醫院高脂血癥患者ApoE基因多態性的分布及其特征，以期為高脂血癥的治療提供參考，進而優化他汀類藥物的臨床應用策略，提高療效，減少藥物不良反應的發生。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2023年10月至2024年6月于杭州市第九人民醫院確診的370例高脂血癥患者。其中女166例，男204例，年齡13～93歲，平均（54.13±13.69）歲。納入標準：①高脂血癥患者；②白細胞計數1×10⁹～20×10⁹/L。排除標準：①肝、腎功能異常的患者；②嚴重感染或患有惡性腫瘤、甲狀腺或其他血液系統病變的患者；③不愿意參加或無法配合本研究的患者。患者均知情同意并簽署知情同意書。本研究經杭州市第九人民醫院醫學倫理委員會審批通過（倫理審批號：研倫第2023-082）。

1.2 實驗方法

1.2.1 樣本采集與保存 采集患者2ml靜脈血[無具體時間與空腹要求；乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）抗凝]，置于2～8℃環境中保存（保存時間不超過2周）。

1.2.2 血液預處理物ApoE分型檢測及方法 吸取80μlEDTA抗凝血于1.5ml離心管中，按杭州百邁生物股份有限公司生產的人ApoE基因分型檢測試劑盒（熒光PCR法）說明書進行處理。加入1ml純化水后進行渦旋振蕩混勻，隨后12000離心1min。每次處理全血時需取80μl陰性對照品（室溫融化混勻，快速離心10s）平行參與處理。吸棄上清液（陰性對照品棄上半部液體1ml），加入50μl三羥甲基氨基甲烷（trihydroxymethyl aminomethane，Tris）-EDTA緩沖液，劇烈震蕩渦旋充分重懸沉淀，獲得血液預處理物。使用美國應用生物系統公司7500實時定量PCR儀，按說明書步驟檢測血液預處理物。

1.2.3 結果判定標準 結果分析時，增加背景信號矯正，將參比熒光染料（軟件操作界面顯示為passive reference）設置為羧基-X-羅丹明（5-carboxy-x-rhodamine，ROX）。熒光PCR反應檢測成功應同時滿足以下2個條件：①陰性對照。當無擴增信號時，ApoE（T388C），ApoE（C526T）Ct值顯示為無法確定（軟件操作界面顯示為undetermined）；當有擴增信號時，ApoE（T388C）Ct值>33，ApoE（C526T）Ct值>31。②陽性對照品。ApoE（T388C）Ct（FAM）≤31且Ct（VIC）≤31；ApoE（C526T）Ct（FAM）≤29且Ct（VIC）≤29。熒光PCR反應成功后對樣本結果進行判定。并統計患者ApoE基因分型結果與等位基因頻率的分布。

1.3 統計學方法

采用SPSS19.0統計學軟件對數據進行處理分析。計數資料以例數（百分率）[（%）]表示，比較采用²檢驗；采用檢驗分析各多態性位點是否符合哈迪-溫伯格遺傳平衡；以>0.05為樣本具有群體代表性的標準。＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 哈迪-溫伯格遺傳平衡檢驗

本研究中2個基因位點（ApoE 388T>C、ApoE 526C>T）的多態性分布符合哈迪-溫伯格遺傳平衡定律（²分別為0.288、4.514，>0.05），表明本研究納入者具有群體代表性，見表1。

2.2 高脂血癥患者ApoE基因多態性分布

6種不同基因型所占比例分別為E3/E366.49%、E3/E420.27%、E2/E38.65%、E2/E41.89%、E2/E21.35%、E4/E41.35%。本組患者中E3基因的比例最高，為80.95%，攜帶E4基因患者比例（12.43%）約是攜帶E2基因患者比例（6.62%）的1.88倍。

2.3不同性別患者的ApoE基因多態性分布比較

將患者按性別分組，結果顯示ApoE基因多態性在不同性別患者中的差異無統計學意義（>0.05），見表2。

2.4 不同年齡患者的ApoE基因多態性分布比較

將患者按年齡分為五組，結果顯示各年齡組高脂血癥患者數呈倒“U”型變化趨勢，不同年齡組患者的各基因型分布差異無統計學意義（=1.601，>0.05），見表3。

3 討論

中國腦卒中篩查與預防項目數據顯示，40歲以上居民血脂異常患病率高達43%，但僅18.9%的血脂異常患者接受降脂治療，7.2%得到充分控制^[9-10]。他汀類藥物作為目前臨床應用最為廣泛的降脂藥，是血脂異常藥物治療的基石，但其臨床療效具有明顯的個體差異^[11]。

研究顯示使用同等劑量他汀類藥物，中國心血管病患者肝臟不良反應發生率明顯高于歐洲患者，肝臟轉氨酶升高（>正常值上限3倍）率及肌病發生率約為歐洲患者的10倍^[12]。這種差異主要由個體存在他汀類藥物代謝酶、轉運蛋白及藥物靶受體等基因的多態性差異所致，因而中國人群應用他汀類藥物的依從性較低。ApoE基因是其中一個重要基因。ApoE基因位于人類第19條染色體上，編碼一種膽固醇運載蛋白，對脂質代謝和細胞信號轉導等生理過程具有重要影響。攜帶ApoE2基因的患者服用他汀類藥物后降脂效果最佳；攜帶ApoE3基因的患者則顯示正常降脂效果；攜帶ApoE4基因的患者降脂效果最不明顯，藥物敏感度最差^[13-14]。

本研究結果顯示本組患者中最常見的基因型為E3/E3，占比高達66.49%，和張強^[15]、張延紅等^[16]研究報道E3/E3基因型在實驗人群中比例最高的結果一致，表明大多數患者在使用常規劑量他汀類藥物治療時即可產生較好的效果，可有效、安全降低血脂。值得關注的是E3/E4、E4/E4基因型的患者比例高達21.62%，該類患者攜帶風險基因，對他汀類藥物治療的效果不敏感。本研究還分析ApoE基因多態性在不同性別和年齡患者中的分布情況，結果顯示不同性別和年齡的患者ApoE基因多態性分布比較，差異無統計學意義，這與以往的文獻報道結論一致，表明ApoE基因的多態性與性別和年齡無關^[17-19]。

綜上所述，本研究在一定程度上可反映杭州市第九人民醫院高脂血癥患者ApoE基因多態性的分布特征，可為該院及其他醫院的臨床用藥提供參考。通過對患者進行ApoE基因分型檢測可預先判斷他汀類藥物的療效，輔助臨床制定他汀類藥物個體化用藥方案，降低藥物不良反應風險。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

[參考文獻]

[1] 北京高血壓防治協會， 北京糖尿病防治協會， 北京慢性病防治與健康教育研究會， 等. 基層心血管病綜合管理實踐指南2020[J]. 中國醫學前沿雜志（電子版）， 2020， 12（8）： 1–73.

[2] 國家衛生健康委員會疾病預防控制局. 中國居民營養與慢性病狀況報告2020[M]. 北京： 人民衛生出版社， 2020.

[3] ZHONG Z X， WU H M， LI B， et al. Analysis of SLCO1B1 and APOE genetic polymorphisms in a large ethnic Hakka population in Southern China[J]. J Clin Lab Anal， 2018， 32（6）： e22408.

[4] 陳新華， 羅時梅. 不同劑量他汀類藥物短期治療后降脂效果及不良反應分析[J]. 中國衛生標準管理， 2020， 11（24）： 120–123.

[5] HIRSH B J， SMILOWITZ N R， ROSENSON R S， et al. Utilization of and adherence to guideline-recommended lipid-lowering therapy after acute coronary syndrome： Opportunities for improvement[J]. J Am Coll Cardiol， 2015， 66（2）： 92–184.

[6] 王鳳玲， 孟祥云， 陳正徐， 等. 安徽地區漢族心血管疾病患者SLCO1B1與ApoE基因多態性分布及其在他汀類藥物臨床個體化用藥的意義[J]. 中國臨床藥理學與治療學 2021， 26（1）： 40–48.

[7] BEGCEVIC B I， ZOHRER B， SCHOLZ M， et al. Simultaneous mass spectrometry-based apolipoprotein profiling and apolipoprotein E phenotyping in patients with ASCVD and mild cognitive impairment[J]. Nutrients， 2022， 14（12）： 2474.

[8] 中國中西醫結合學會檢驗醫學專業委員會， 浙江省免疫學會臨床免疫診斷專業委員會， 浙江省藥理學會治療藥物監測研究專業委員會. SLCO1B1和ApoE基因多態性檢測與他汀類藥物臨床應用專家共識[J]. 中華檢驗醫學雜志， 2023， 46（7）： 672–680.

[9] OPOKU S， GAN Y， YOBO E A， et al. Awareness treatment control and determinants of dyslipidemia among adults in China[J]. Sci Rep， 2021， 11（1）： 10056.

[10] OPOKU S， GAN Y， FU W， et al. Prevalence and risk factors for dyslipidemia among adults in rural and urban China： Findings from the China national stroke screening and prevention project （CNSSPP）[J]. BMC Public Health， 2019， 19（1）： 1500.

[11] 中國血脂管理指南修訂聯合專家委員會. 中國血脂管理指南（2023年）[J]. 中華心血管病雜志， 2023， 51（3）： 221–255.

[12] HPS2-THRIVECollaborativeGroup. HPS2-THRIVE randomized placebo-controlled trial in 25 673 high-risk patients of ER niacin/laropiprant： trial design， pre-specified muscle and liver outcomes， and reasons for stopping study treatment[J]. Eur Heart J，2013， 34（17）： 1279–1291.

[13] RAULIN A C， KRAFT T L， AL-HILALY Y K， et al. The molecular basis for apolipoprotein E4 as the major risk factorfor late-onset Alzheimer’s disease[J]. J Mol Biol， 2019， 431（12）： 2248–2265.

[14] ZHONG Z， WU H， YE M， et al. Association of APOE gene polymorphisms with cerebral infarction in the Chinese population[J]. Med Sci Monit， 2018， 24： 1171–1177.

[15] 張強. ApoE基因多態性與兩種他汀類藥物降脂療效的關系[J]. 檢驗醫學與臨床， 2022， 19（7）： 953–956.

[16] 張延紅， 竇相峰， 尚蔚， 等. 家族性混合型高脂血癥與載脂蛋白E基因多態性的研究[J]. 高血壓雜志， 2004（2）： 29–32.

[17] 張琳， 楊爽， 張素雅， 等. 西北地區冠心病患者ApoE基因多態性分布研究以及對他汀類藥物使用的指導意義[J]. 中國實驗診斷學， 2024， 28（6）： 669–673.

[18] 何莎， 茍東蕓， 王文遠， 等. 河北地區漢族心腦血管病患者ApoE和SLCO1B1基因多態性分析[J]. 中國現代神經疾病雜志， 2021， 21（5）： 400–405.

[19] 陳娟娟， 張平安. 武漢地區SLCO1B1與ApoE基因多態性分布及其對他汀類藥物個體化使用的風險評估[J].職業與健康， 2019， 35（3）： 317–320， 327.

（收稿日期：2024–07–02）

（修回日期：2024–09–12）