一種簡(jiǎn)單易操作的草履蟲純化方法的探究*

張 平 魏京廣

（1 中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 廣東廣州 510275 2 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)海洋學(xué)院 廣東廣州 510642）

草履蟲是生物學(xué)研究中一種重要的實(shí)驗(yàn)材料，因其結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、單細(xì)胞、自由生活、繁殖周期短，常被選作細(xì)胞生物學(xué)、分子遺傳學(xué)、生物信息學(xué)等的科研材料［1］；草履蟲還是生物學(xué)專業(yè)本科生動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)重要的實(shí)驗(yàn)材料；又因其營養(yǎng)豐富、易成活、易取材等優(yōu)勢(shì)，也成為一些觀賞魚種苗飼育的良好餌料［2］。

教學(xué)上傳統(tǒng)的草履蟲多來源于野外采集，但存在許多問題，例如樣品不純、易受天氣和環(huán)境影響等。草履蟲培養(yǎng)方法多樣、簡(jiǎn)便，但培養(yǎng)獲得的蟲液常混有四膜蟲，且四膜蟲往往比草履蟲的生命力更強(qiáng)、繁殖速度更快。筆者在多年的教學(xué)中發(fā)現(xiàn)，即便使用滅菌的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)，幾天之后也難免有四膜蟲侵入，再加上草履蟲個(gè)體較小且運(yùn)動(dòng)快，所以為了得到純化的草履蟲，常需要花費(fèi)較多的時(shí)間和精力。實(shí)驗(yàn)室通常采用毛細(xì)管虹吸的方法，得到單個(gè)草履蟲后，先將其置于凹玻片或小培養(yǎng)皿培養(yǎng)，再擴(kuò)大培養(yǎng)［3］，這樣的純化方法費(fèi)時(shí)、費(fèi)力。本教研室從調(diào)節(jié)培養(yǎng)溫度入手，力求找到一種草履蟲純化的簡(jiǎn)便方法，供實(shí)驗(yàn)教學(xué)參考。

1 材料與方法

1.1 培養(yǎng)液的制備 本實(shí)驗(yàn)制備了3 種培養(yǎng)液，即酵母培養(yǎng)液、稻草培養(yǎng)液和小麥粉培養(yǎng)液。每種培養(yǎng)液250 mL，制備3 瓶備用。

1）酵母培養(yǎng)液的制備：將藥店購買的小包裝酵母片1 片（約1 g）溶解于250 mL 經(jīng)陽光照射2 h 以上的自來水中，攪拌均勻，備用。

2）稻草培養(yǎng)液的制備：稱取2 g 稻草，剪成2 cm 長(zhǎng)的小段，置于經(jīng)陽光照射水中24 h，備用。

3）小麥粉培養(yǎng)液的制備：稱取2 g 小麥粉，溶解于250 mL 自來水中，煮沸，攪拌均勻，制成懸濁液，備用。

1.2 接種與培養(yǎng) 將含有四膜蟲的草履蟲原液搖勻，取5 mL 接種于培養(yǎng)液中，每種培養(yǎng)液接種3 瓶，用錫箔紙封口后，置于25℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。5 d后，取樣鏡檢。每瓶培養(yǎng)液隨機(jī)抽取0.1 mL，重復(fù)3 次，加入盧戈氏碘液［4］，殺死并染色草履蟲，置于顯微鏡下計(jì)數(shù)，取9 個(gè)重復(fù)樣品的平均值。

1.3 溫度篩選 將草履蟲密度最高的3 瓶酵母培養(yǎng)液分別轉(zhuǎn)移至冰箱中培養(yǎng)，設(shè)置冰箱的溫度分別為0℃、4℃、8℃，在培養(yǎng)時(shí)間為1 d、2 d、3 d后，分別取樣鏡檢。每瓶培養(yǎng)液隨機(jī)取樣3 次，每次取樣0.1 mL，加入盧戈氏碘液，殺死并染色草履蟲，于顯微鏡下計(jì)數(shù)，取3 個(gè)重復(fù)樣品的平均值。

2 結(jié)果與分析

研究結(jié)果表明，與其他2 種培養(yǎng)液相比，酵母培養(yǎng)液中的草履蟲密度高、活力強(qiáng)，更適合生產(chǎn)和實(shí)驗(yàn)的需要；但培養(yǎng)液中仍有大量的四膜蟲（表1）。因此教學(xué)中大量使用草履蟲時(shí)，宜采用酵母片培養(yǎng)法，該方法可在短時(shí)間內(nèi)培養(yǎng)出高密度的草履蟲。

表1 不同培養(yǎng)液中草履蟲和四膜蟲數(shù)量的比較（n=3；單位：只）

表2 不同溫度下草履蟲和四膜蟲的鏡檢結(jié)果（n=3；單位：只）

比較不同溫度下草履蟲和四膜蟲的培養(yǎng)情況，由表2可知，在4℃和8℃時(shí)草履蟲密度較高，但8℃時(shí)仍有四膜蟲存在。從培養(yǎng)時(shí)間來看，隨著天數(shù)的增加，4℃和8℃時(shí)草履蟲的數(shù)量變化不大，而四膜蟲對(duì)溫度的敏感性明顯高于草履蟲；在0℃和4℃冰箱中放置2 d 后已鏡檢不到四膜蟲，但0℃時(shí)溶液易結(jié)冰，不易操作，而且此時(shí)草履蟲的密度也大大降低。由上述結(jié)果可知，在純化草履蟲時(shí)，選擇4℃冰箱放置2 d 可達(dá)到理想的效果。