“觀察線粒體的形態與分布”實驗的改進

王秀莉 孟安華

（1 東北師范大學生命科學學院 吉林長春 130024 2 東北師范大學附屬中學 吉林長春 130021）

“用高倍顯微鏡觀察葉綠體和線粒體”是高中生物學課程必修1 里的一個重要實驗［1］。但是中學開設這個實驗較少，成功率很低，而且筆者在做預實驗時發現按照教材給出的實驗步驟在實驗操作過程中存在一些問題：1）溶解的建那綠B 溶液在顯微鏡下原本就有顆粒；2）找到口腔上皮細胞比較困難；3）用洋蔥表皮作為實驗材料，比較容易觀察到細胞，但健那綠B 有顆粒，不能確定觀察現象的正確性；4）洋蔥表皮細胞和口腔上皮細胞哪個更適合作為實驗材料還不明確。針對以上問題筆者設計了一系列實驗，探索出最適合線粒體觀察的方案。

1 實驗儀器、材料與試劑

1.1 實驗儀器和材料 倒置光學顯微鏡（奧林巴斯，IX81），載玻片，蓋玻片，移液器（200 μL），吸頭（200 μL），濾紙，量筒，燒杯，漏斗，牙簽。人口腔上皮細胞，洋蔥表皮細胞。

1.2 實驗試劑 蒸餾水；生理鹽水：取0.9 gNaCl溶于100 mL 蒸餾水中；健那綠B：取0.3 g 健那綠B 粉末溶于30 mL 生理鹽水中，35℃水浴中溶解，并用濾紙過濾。

2 實驗方法與步驟

1）用鑷子夾住洋蔥的表皮并撕下，將其平鋪在載玻片上，在表皮上滴加適量健那綠B 染液，3 min 或10 min 后蓋上蓋玻片，用濾紙包好壓一壓，然后將臨時裝片放置于顯微鏡下觀察。

2）在載玻片上滴一滴健那綠B 染液，用滅菌牙簽較鈍的一端在口腔壁上刮幾下，然后在染液中涂一涂，3 min 或10 min 后蓋上蓋玻片，用濾紙包好壓一壓，然后將臨時裝片放置在顯微鏡下觀察。

3 實驗結果與分析

3.1 健那綠B 染液的過濾 由于在實驗中發現配置好的染液在標記線粒體時會在細胞外出現不明顆粒，筆者將染液進行了過濾，并將過濾和未過濾的染液在顯微鏡下進行觀察和對比，觀察結果如圖1所示，未過濾的染液有很多顆粒，而過濾后的染液則沒有顆粒出現，所以接下來的實驗均用過濾后的健那綠B 染液。

圖1 健那綠B 染液的觀察（20×）

3.2 洋蔥表皮細胞的線粒體觀察 實驗中采用了洋蔥表皮細胞為實驗材料，健那綠B 染色時間分別為3 min 和10 min，實驗結果如圖2所示，染色3 min 后在顯微鏡下觀察幾乎看不到線粒體被標記的小顆粒，而染色10 min 后的細胞中可觀察到被染色的呈圓球狀的線粒體顆粒，說明健那綠B 的染色時間為10 min 是適宜的。吳艷［2］提出由于植物細胞有中膠層和細胞壁的存在，所以植物細胞內的線粒體染色時間需稍長些。

圖2 洋蔥表皮細胞線粒體的觀察（20×）

3.2 口腔上皮細胞的線粒體觀察 采用口腔上皮細胞為實驗材料，健那綠B 染色時間也分別為3 min 和10 min，實驗結果如圖3所示。染色3 min后在顯微鏡下觀察到被標記的線粒體小顆粒不太明顯，而染色10 min 后的細胞中可清晰地觀察到被染色的呈現球狀或棒狀的線粒體顆粒，從實驗結果可知，對于口腔上皮細胞內的線粒體的觀察，染色時間稍長些效果更明顯。

圖3 口腔上皮細胞線粒體的觀察（60×）

4 結論與建議

4.1 結論 健那綠B 染液配制后需用濾紙過濾去除溶解不徹底的健那綠B 小顆粒，洋蔥表皮細胞和口腔上皮細胞均可作為實驗材料，但口腔上皮細胞優于洋蔥表皮細胞，這2 種細胞的染色時間均為10 min 時效果最好。

4.2 建議 為了避免口腔上皮細胞太少而不易觀察到，刮取口腔上皮細胞時可用牙簽多刮幾次，或者用2～3 根牙簽依次刮取盡可能多的細胞，并且牙簽要在染液中攪拌一下，使細胞盡量分散開，在觀察時要耐心地尋找分散比較好且鋪展開的細胞觀察。

由于洋蔥表皮細胞比較大，觀察時用20 倍或40 倍的物鏡比較合適，而口腔上皮細胞相對較小，可用高倍物鏡（60 倍或100 倍）進行觀察，這樣容易觀察到細胞內較小的線粒體。