HPLC法測(cè)定注射用頭孢米諾鈉有關(guān)物質(zhì)

黃國(guó)雁 陳珊珊 黃澤瑪 王金鑾

（樂信樂美（海南）生物科技有限公司，海南 海口 570311）

頭孢米諾鈉屬于第三代頭霉素類抗生素，1987年由日本明治制果株式會(huì)社研發(fā)，具有雙重殺菌能力；對(duì)革蘭氏陰性菌和厭氧菌有活性。建立了高效液相色譜法測(cè)定本品的有關(guān)物質(zhì)。

一、儀器和試藥

1.儀器。高效液相色譜儀：LC-2030C（島津公司）。2.試劑。甲醇（色譜純）、四氫呋喃（色譜純）、冰醋酸（分析純）。（3）試藥。頭孢米諾 批號(hào)：130508-201604 含量：78.0% 規(guī)格：100mg 來源：中國(guó)食品藥品檢定研究院。頭孢米諾系統(tǒng)適用性對(duì)照品 批號(hào)：130667-201501 規(guī)格：30mg 來源：中國(guó)食品藥品檢定研究院。雜質(zhì)Ⅰ對(duì)照品、雜質(zhì)Ⅱ?qū)φ掌贰㈦s質(zhì)Ⅲ對(duì)照品、雜質(zhì)Ⅳ對(duì)照品、雜質(zhì)Ⅴ對(duì)照品。

二、方法

（一）色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Kromasil 100-5-C18

以冰醋酸溶液（1→100）-甲醇-四氫呋喃（992：4：4）為流動(dòng)相；柱溫：30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，進(jìn)樣量：10μl。

（二）系統(tǒng)適用性溶液的制備

取頭孢米諾系統(tǒng)適用性對(duì)照品約10mg，精密稱定，置10ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

（三）供試品溶液的制備

取本品適量，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1ml中約含頭孢米諾1.0mg的溶液。

（四）對(duì)照品溶液的制備

取頭孢米諾對(duì)照品適量，精密稱定，加水溶解并稀釋制成每1ml中約含頭孢米諾1.0mg的溶液，搖勻，即得。

（五）測(cè)定法

精密量取供試品溶液與對(duì)照溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的3.5倍。

三、方法學(xué)考察

（一）檢測(cè)限與定量限試驗(yàn)

試驗(yàn)過程：對(duì)照品貯備液：精密稱取頭孢米諾對(duì)照品12.95mg，置10ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。取貯備液逐級(jí)稀釋至信噪比為10：1，3：1。根據(jù)信噪比，經(jīng)測(cè)定，頭孢米諾，雜質(zhì)Ⅰ、雜質(zhì)Ⅱ、雜質(zhì)Ⅲ、雜質(zhì)Ⅳ、雜質(zhì)Ⅴ定量限依次為2.498 ng、0.685 ng、1.046ng、2.420ng、2.088 ng、3.661ng；檢測(cè)限依次為 0.600 ng、0.171ng、0.261 ng、0.726 ng、0.626 ng、1.098ng。定量限＜報(bào)告限。

（二）線性關(guān)系和校正因子試驗(yàn)

稱取頭孢米諾對(duì)照品、雜質(zhì)Ⅰ、雜質(zhì)Ⅱ、雜質(zhì)Ⅲ、雜質(zhì)Ⅳ、雜質(zhì)Ⅴ對(duì)照品適量，精密稱定，分別加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1ml中約含頭孢米諾0.1mg/ml、雜質(zhì)Ⅰ0.1mg/ml、雜質(zhì)Ⅱ0.1mg/ml、雜質(zhì)Ⅲ0.1mg/ml、雜質(zhì)Ⅳ0.1mg/ml、雜質(zhì)Ⅴ0.1mg/ml的對(duì)照品母液。精密量取上述對(duì)照品母液分別用流動(dòng)相稀釋成系列濃度，精密量取上述溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

經(jīng)線性回歸分析，頭孢米諾的線性范圍為0.4996μg/ml～ 9.9918μg/ml（r=1.00000），雜質(zhì)Ⅰ的線性范圍為 0.3426μg/ml～ 1.9183μg/ml（r=0.9998），雜質(zhì)Ⅱ的線性范圍為 0.5307μg/ml～ 2.9718μg/ml（r=0.9995），雜質(zhì)Ⅲ的線性范圍為 0.5041μg/ml～ 2.8229μg/ml（r=0.9997），雜質(zhì)Ⅳ的線性范圍為 0.5219μg/ml～ 2.9227μg/ml（r=0.9998），雜質(zhì)Ⅴ的線性范圍為 0.5230μg/ml ～ 2.9290μg/ml（r=0.9998）。

（三）進(jìn)樣精密度試驗(yàn)

取1%對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，試驗(yàn)結(jié)果表明，6針1%對(duì)照品溶液的主峰面積RSD%為0.22%（≤2.0%），保留時(shí)間RSD%為0.01%（≤1.0%）。

（四）重復(fù)性試驗(yàn)

取API溶液，6份，分別量取上述溶液各10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。雜質(zhì)Ⅲ%的RSD%2.70%，雜質(zhì)Ⅴ%的RSD%為1.22%，其他雜質(zhì)均未檢出。

（五）耐用性試驗(yàn)

耐用性研究項(xiàng)目：色譜柱、柱溫；試驗(yàn)方法條件：資生堂、30℃；確認(rèn)的耐用性范圍：不同批次色譜柱、25℃～35℃。耐用性試驗(yàn)結(jié)果，條件微改變后結(jié)果均符合要求。

四、樣品測(cè)定

表-4有關(guān)物質(zhì)Ⅰ測(cè)定檢查結(jié)果