中藥復雜樣品高效液相色譜和超高效液相色譜分析條件轉換方法

張傳燕

（宜賓市第三人民醫院藥劑科 四川 宜賓 644000）

高效液相色譜法，簡稱HPLC，是一種對中藥復雜樣品進行分析的方法，在中藥復雜樣品的分離過程中發揮著至關重要的作用。而隨著時代的發展，在材料分離方面，人們對其提出了新的更高的要求。而在固定相發展中，小顆粒的填料則成為了一個重要的發展方向。其中，超高效液相色譜法，簡稱（UPLC），就一種以1.7納米的填料作為固定相的分析方法，在小顆粒的填料過程中，不僅具有高效的柱效，而且幫助了中藥復雜樣品的分離，進而促使分析更加的快速便捷。

1.資料和方法

1.1 一般資料

1.1.1儀器和試劑

高效液相色譜儀。在該儀器中，主要可包括四元梯度泵、真空脫氣機、自動進樣器、柱溫箱以及DAD檢測器等[1]。

超高效液相色譜儀。在該儀器中，主要可包括二元梯度泵、自動進氧器、注溫箱、PDA檢測器等。

而與之相關的試劑可包括乙腈、甲酸、Milli-Q水[2]。

1.1.2實施高效液相色譜法的基本條件

色譜柱。選用Hypersil ODS2 C18以及ACQUITY UPLCTMBEH SHIELD RP18 column；流動相。將水標為A，乙腈標位B，兩者相加為0.01%（v/v）甲酸，且高效液相色譜的流速應該保持在1.0毫升/分鐘，而超高效液相色譜的流速則應該保持在0.25毫升/分鐘。同時，注溫應該保持在30℃，檢測波長為280nm，在進樣的過程中，采用高效液相色譜時，進樣量為5μL,而采用超高效液相色譜時，進樣量為3μL.而與之相關的兩組12色譜峰保留參數的五次線性梯度見表1[3]。

表1 用以兩組12色譜峰保留參數計算的五次線性梯度

1.2 方法

在對丹參水提組和川芎水提組進行分析時，其即使中科院的重要方向，同時，也在項目開展過程中建立起了標準組分。就組分的具體提取方法而言，首先，在100千克的藥材中加入1000升的水進行分兩次的提取，提取的時間一般為2小時和1.5小時，合并兩次進行提取液。其次，以噴霧干燥的方式將其制造成干粉，為標準組分提供分析和制備的基礎。在該實驗過程中，分別稱去誕生和川芎干粉各0.5克，分別加入20毫升75%的乙醇，并采用超聲進行過濾，過濾的時間為10分鐘，將其過濾定容到25毫升作為備用。同時，在進樣開始前，還應該采用0.45μL的有機過濾膜進行過濾[4]。

2.結果

高效液相色譜和超高效液相色譜兩者的12色譜峰保留參數具有較好的線性關系，兩組12色譜峰保留參數的線性關聯R2值分別為0.9914和0.9936.而在兩組12色譜峰保留參數的基礎之上，將川芎水體組分鐘各色譜峰在效液相色譜上的12色譜峰保留參數轉化為超高效液相色譜的12色譜峰保留參數，并運用計算12色譜峰保留參數對超高效液相色譜進行分離預測，通過實驗驗證，模擬圖和實驗譜圖相匹配。

3.討論

通過實驗發現，高效液相色譜和超高效液相色譜之間存在不同的死時間和系統延遲，在對12色譜峰保留參數進行計算時，死時間和系統延遲都有參與在這個過程中，所以兩者之間的系統差異得以被關聯校準，并且運用該關聯線性方程也可達到高效液相色譜和超高效液相色譜條件相互轉化的目的。

在通常情況下，為驗證上述轉化方法的準確性，一般會采用關聯線性方程對川芎水提組中的各色譜峰在高效液相色譜的12色譜峰保留參數將其轉化為超高效液相色譜的12色譜峰保留參數，并利用計算出了12色譜峰保留參數對條件進行預測和優化。

綜上所述，在中藥復雜體系分析中，高效液相色譜和超高效液相色譜是其重要的方法。而在本文中，通過建立12色譜峰保留參數在兩種方法中的線性關系，不僅實現了兩種分析方法的轉換，而且在該過程中實現了數據在兩個分析方法中的運用，進而實現了中藥復雜體系在效液相色譜和超高效液相色譜分析條件的轉化。

[1]金郁,薛興亞,肖遠勝,章飛芳,石慧,梁鑫淼.中藥復雜樣品高效液相色譜和超高效液相色譜分析條件轉換方法[J].世界科學技術-中醫藥現代化,2008,(01):80-84.[2017-08-04].

[2]劉磊.生物樣品自動化在線固相萃取—高效液相色譜分析方法學研究[D].南開大學,2013（11）.

[3]高青,劉穎,宋彬彬,付龍,郭偉,錢忠直.超高效液相色譜與高效液相色譜方法轉換及驗證[J].藥物分析雜志,2016,36(07):1279-1286.[2017-08-04]. DOI：10.16155/j.0254-1793.2016.07.21

[4]陳重均.超高效液相色譜串聯質譜定量分析中藥材及其制劑中真菌毒素方法的研究[D].浙江大學,2015（19）.