徐州地區(qū)養(yǎng)殖場(chǎng)中羊細(xì)菌性呼吸道病原菌的分離鑒定與耐藥性檢測(cè)

摘要：為了分析徐州地區(qū)養(yǎng)殖場(chǎng)中羊細(xì)菌性呼吸道病原菌的流行分布情況及耐藥性情況。本試驗(yàn)對(duì)2022—2023年采集的來(lái)自徐州地區(qū)養(yǎng)殖場(chǎng)中羊患呼吸道癥狀的咽拭子、鼻拭子、肺臟、肝臟及腎臟等病料組織229份，采用細(xì)菌分離鑒定法對(duì)多殺性巴氏桿菌、溶血性曼氏桿菌、肺炎克雷伯氏菌及傳染性胸膜放線桿菌等病原菌進(jìn)行分離鑒定，采用K-B藥敏紙片法檢測(cè)臨床分離菌株對(duì)臨床中常用的藥物耐藥情況。結(jié)果顯示：從229份病料樣品中分離到多殺性巴氏桿菌、溶血性曼氏桿菌、肺炎克雷伯氏菌及傳染性胸膜放線桿菌4種病原菌，其檢出率分別為16.6 %（38/229）、14.8 %（34/229）、10.0 %（23/229）、4.8 %（11/229）;分離的多殺性巴氏桿菌、溶血性曼氏桿菌、肺炎克雷伯氏菌及傳染性胸膜放線桿菌4種病原菌均對(duì)頭孢噻呋、頭孢曲松、恩諾沙星、替米考星、多西環(huán)素5種藥物敏感，對(duì)其他藥物耐藥。為該地區(qū)規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)中羊細(xì)菌性呼吸道病的防控及合理指導(dǎo)臨床用藥提供參考。

關(guān)鍵詞：羊;呼吸道病;病原菌;分離鑒定;藥敏試驗(yàn)

相關(guān)研究表明，隨著我國(guó)養(yǎng)羊業(yè)的發(fā)展，肉羊、奶山羊的養(yǎng)殖數(shù)量呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)，其中肉羊、奶山羊的養(yǎng)殖區(qū)主要分布在我國(guó)內(nèi)蒙古、新疆、河北、山東、陜西、甘肅及河南等多個(gè)地區(qū)，我國(guó)的肉羊、奶山羊的飼養(yǎng)模式主要包括放牧、舍飼、半放牧半舍飼等3種飼養(yǎng)方式，在我國(guó)大部分地區(qū)的肉羊、奶山羊的養(yǎng)殖已經(jīng)成為規(guī)模化和集約化的養(yǎng)殖模式，通過相關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)我國(guó)的肉羊、奶山羊存欄數(shù)量、出欄數(shù)量以及羊肉的產(chǎn)量均位居世界第一 [1-2]。在肉羊、奶山羊的養(yǎng)殖的過程中，羊的呼吸道疾病成為危害養(yǎng)羊業(yè)的主要疾病之一，引起羊呼吸道疾病的病因（環(huán)境因素、病原微生物因素及應(yīng)激因素等）很多，近幾年羊的呼吸道疾病的發(fā)病率和死亡率居高不下，嚴(yán)重危害養(yǎng)羊業(yè)的健康發(fā)展[3-4]。引起羊呼吸道疾病的因素很多，但是在養(yǎng)殖過程中以細(xì)菌性呼吸性疾病最常見，引起羊細(xì)菌性呼吸道疾病的病原菌主要有傳染性胸膜放線桿菌（infectious pleural actinomycetes）、腸外大腸桿菌（extracellular escherichia coli）多殺性巴氏桿菌（pasteurella multocida，Pm）、溶血性曼氏桿菌（mannheimia haemolytica，Mh）、化膿隱秘桿菌（arcanobacterium pyogenes，Ap）、肺炎克雷伯氏菌（klebsiella pneumoniae，Kp）等[5]。許多相關(guān)研究表明，在養(yǎng)羊過程中，隨著抗菌藥物及含有抗菌藥物的添加劑的使用，在臨床中分離的多殺性巴氏桿菌、溶血性曼氏桿菌、肺炎克雷伯氏菌及傳染性胸膜放線桿菌4種病原菌對(duì)臨床中常用的抗菌藥物產(chǎn)生嚴(yán)重的耐藥性，給羊細(xì)菌性呼吸道疾病的治療帶來(lái)一定困難，同時(shí)還威脅著人們健康[6]。本試驗(yàn)2022—2023年采集徐州地區(qū)養(yǎng)殖場(chǎng)中羊患呼吸道癥狀的咽拭子、鼻拭子、肺臟、肝臟及腎臟等病料組織229份，進(jìn)行主要呼吸道病原菌的分離鑒定，并對(duì)分離的呼吸道病原菌進(jìn)行耐藥性情況監(jiān)測(cè)，為指導(dǎo)臨床合理用藥提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病理來(lái)源

2022—2023年采集的徐州地區(qū)養(yǎng)殖場(chǎng)中羊患呼吸道癥狀的咽拭子、鼻拭子、肺臟、肝臟及腎臟等病料組織229份。

1.2 細(xì)菌分離與培養(yǎng)

對(duì)采集的徐州地區(qū)養(yǎng)殖場(chǎng)中羊患呼吸道癥狀的咽拭子、鼻拭子、肺臟、肝臟及腎臟等病料組織樣品229份，對(duì)采集的病料組織樣品進(jìn)行編號(hào)1～229號(hào)，對(duì)編完號(hào)的樣品組織進(jìn)行PBS洗滌處理后，在無(wú)菌的條件下將采集的229份病料組織分區(qū)劃線接種于7 %綿羊脫纖血培養(yǎng)基上，在37 ℃培養(yǎng)18～24 h后，挑取7 %綿羊脫纖血培養(yǎng)基上的典型的菌落分別接種于多殺性巴氏桿菌培養(yǎng)基、LB培養(yǎng)基、麥康凱肌醇阿東醇羧芐青霉素瓊脂及淀粉硝酸鹽培養(yǎng)基，分別在37 ℃培養(yǎng)條件下鑒別培養(yǎng)12～18 h后，對(duì)4種不同培養(yǎng)基上（多殺性巴氏桿菌培養(yǎng)基、LB培養(yǎng)基、麥康凱肌醇阿東醇羧芐青霉素瓊脂及淀粉硝酸鹽培養(yǎng)基）的菌落按照說明書進(jìn)行革蘭氏染色，并在顯微鏡下觀察其不同培養(yǎng)基菌落的形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)。

1.3 生化試驗(yàn)鑒定

將臨床中分離的不同的4種病原菌，在無(wú)菌的條件下分別接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯中，37 ℃振蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期，參照革蘭氏陰性菌生化鑒定試劑盒，取營(yíng)養(yǎng)肉湯中純化培養(yǎng)的分離菌株用營(yíng)養(yǎng)肉湯調(diào)整菌液濃度為0.5～1個(gè)麥?zhǔn)蠞岫龋瑢⑴R床中分離的4種不同的病原菌分別接種于革蘭氏陰性菌生化鑒定試劑盒，37 ℃培養(yǎng)12～18 h后，進(jìn)行生化特性鑒定。

1.4 藥敏試驗(yàn)

將分離的多殺性巴氏桿菌、溶血性曼氏桿菌、肺炎克雷伯氏菌及傳染性胸膜放線桿菌采用K-B藥敏紙片法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，其操作流程及判定結(jié)果參照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）2013年推薦的標(biāo)準(zhǔn)K-B紙片法，每1種藥物做3個(gè)重復(fù)，取其平均值，記錄每一株分離菌株的藥敏試驗(yàn)結(jié)果，統(tǒng)計(jì)其對(duì)臨床中不同抗菌藥物的耐藥性。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)

從徐州地區(qū)養(yǎng)殖場(chǎng)中采集的羊患呼吸道癥狀的咽拭子、鼻拭子、肺臟、肝臟及腎臟等病料組織樣品229份樣品中分離的4種不同的菌株的培養(yǎng)特性、形態(tài)學(xué)與《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)》報(bào)道的多殺性巴氏桿菌、溶血性曼氏桿菌、肺炎克雷伯氏菌及傳染性胸膜放線桿菌4種病原菌培養(yǎng)特性和形態(tài)學(xué)基本上一致。

2.2 細(xì)菌生化試驗(yàn)

從徐州地區(qū)養(yǎng)殖場(chǎng)中采集的羊患呼吸道癥狀的咽拭子、鼻拭子、肺臟、肝臟及腎臟等病料組織樣品229份樣品中分離的4種不同的菌株通過革蘭氏陰性菌試劑盒進(jìn)行生化試驗(yàn)鑒定。結(jié)果如表1可知，多殺性巴氏桿菌、溶血性曼氏桿菌、肺炎克雷伯氏菌及傳染性胸膜放線桿菌4種病原菌，其檢出率分別為16.6 %（38/229）、14.8 %（34/229）、10.0 %（23/229）、4.8 %（11/229），其中多殺性巴氏桿菌、溶血性曼氏桿菌檢出率較高。

2.3 藥敏試驗(yàn)

對(duì)臨床中采集的229份病料組織分離得到的多殺性巴氏桿菌、溶血性曼氏桿菌、肺炎克雷伯氏菌及傳染性胸膜放線桿菌4種病原菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)并分析其耐藥性，結(jié)果如表2可知：分離的多殺性巴氏桿菌、溶血性曼氏桿菌、肺炎克雷伯氏菌及傳染性胸膜放線桿菌4種病原菌均對(duì)頭孢噻呋、頭孢曲松、恩諾沙星、替米考星、多西環(huán)素等5種藥物敏感，對(duì)氟苯尼考、環(huán)丙沙星、阿莫西林、氨芐西林、慶大霉素、林可霉素、多黏菌素 7種藥物耐藥。說明臨床分離的4種呼吸道病原菌對(duì)臨床中常用的藥物產(chǎn)生不同的耐藥性。

3 討論

國(guó)內(nèi)外研究表明，在養(yǎng)羊過程中細(xì)菌性呼吸道疾病是臨床中主要的細(xì)菌性呼吸道傳染病，對(duì)羊的危害較大，經(jīng)過統(tǒng)計(jì)羊細(xì)菌性呼吸道疾病的發(fā)病率80%以上，其死亡率在50 %以上，臨床中以多種病原菌混合感染，導(dǎo)致較高的死亡率，給我國(guó)不同地區(qū)的養(yǎng)羊業(yè)造成較大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重影響我國(guó)養(yǎng)羊業(yè)的發(fā)展[7]。臨床中許多相關(guān)的病原菌廣泛存在養(yǎng)殖環(huán)境中，定期對(duì)環(huán)境進(jìn)行衛(wèi)生清理及環(huán)境消毒具有重要的意義。本試驗(yàn)研究表明，從229份病料樣品中分離到多殺性巴氏桿菌（16.6 %）、溶血性曼氏桿菌（14.8 %）、肺炎克雷伯氏菌（10.0 %）及傳染性胸膜放線桿菌（4.8 %）4種病原菌。因此，對(duì)臨床分離的病原菌進(jìn)行耐藥性試驗(yàn)檢測(cè)，結(jié)果表明，分離的多殺性巴氏桿菌、溶血性曼氏桿菌、肺炎克雷伯氏菌及傳染性胸膜放線桿菌4種病原菌均對(duì)頭孢噻呋、頭孢曲松、恩諾沙星、替米考星、多西環(huán)素5種藥物敏感，對(duì)其他藥物耐藥。因此，在臨床治療羊細(xì)菌性呼吸道疾病時(shí)應(yīng)該根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行合理用藥，同時(shí)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，注意環(huán)境的消毒，有效對(duì)羊細(xì)菌性呼吸道疾病進(jìn)行防控。

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