驅動蛋白家族成員26B在膀胱癌中的表達及與臨床病理特征、預后的關系

盧保德 龍賢 黃勇平

基金項目：1.百色市科學研究與技術開發計劃（編號：百科20213719）；2.右江民族醫學院高層次人才科研項目（編號：R20196337）；3.右江民族醫學院校級課題（編號：yy2019ky010）

作者簡介：盧保德（1987.8-），男，廣西隆安縣人，碩士，主治醫師，主要從事泌尿系腫瘤基礎與臨床研究

通訊作者：黃勇平（1968.5-），男，廣西上林縣人，本科，主任醫師，碩士生導師，主要從事膀胱癌的研究

摘要：目的? 探討驅動蛋白家族成員26B（KIF26B）在膀胱癌中的表達與臨床病理特征及預后的關系。方法? 從TCGA數據庫下載膀胱癌RNA表達譜及臨床數據，用R語言相關數據包分析KIF26B在膀胱癌中的表達水平及與臨床病理、預后的關系。收集2019年5月-2021年6月在右江民族醫學院附屬醫院接受手術治療的60例膀胱癌及癌旁組織樣本，采用qRT-PCR檢測KIF26B在膀胱癌組織中的表達水平，分析KIF26B表達與臨床病理特征的關系。結果? TCGA數據庫中，膀胱癌組織KIF26B表達高于癌旁正常組織（P＜0.05），且KIF26B表達與膀胱癌的病理類型、腫瘤分級、T分期、AJCC分期有關（P＜0.05），與性別、年齡、腫瘤N分期、M分期無關（P＞0.05）；KIF26B高表達患者腫瘤特異性生存期和總生存期均低于KIF26B低表達者（P＜0.05）。60例膀胱癌組織中，膀胱癌組織KIF26B表達高于癌旁正常組織（P＜0.05），且KIF26B表達與膀胱癌腫瘤分級、T分期、N分期、和吸煙有關（P＜0.05），與性別、年齡、M分期無關（P＞0.05）。結論? KIF26B在膀胱癌中高表達，與膀胱癌的臨床病理特征及預后相關。

關鍵詞：膀胱癌；驅動蛋白家族成員26B；臨床病理特征

中圖分類號：R737.14? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標識碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2024.09.020

文章編號：1006-1959（2024）09-0107-05

Expression of Kinesin Family Member 26B in Bladder Cancer and its Relationship

with Clinicopathological Features and Prognosis

LU Bao-de，LONG Xian，HUANG Yong-ping

（Department of Urology，Affiliated Hospital of Youjiang University for Nationalities，Baise 533000，Guangxi，China）

Abstract：Objective? To investigate the expression of kinesin family member 26B （KIF26B） in bladder cancer and its relationship with clinicopathological features and prognosis.Methods? The RNA expression profile and clinical data of bladder cancer were downloaded from the TCGA database. The expression level of KIF26 B in bladder cancer and its relationship with clinicopathology and prognosis were analyzed by R language related data package. From May 2019 to June 2021， 60 cases of bladder cancer and adjacent tissue samples were collected from the Affiliated Hospital of Youjiang University for Nationalities. The expression level of KIF26B in bladder cancer tissues was detected by qRT-PCR， and the relationship between KIF26B expression and clinicopathological features was analyzed.Results? In TCGA database， the expression of KIF26B in bladder cancer tissues was higher than that in adjacent normal tissues（P<0.05）， and the expression of KIF26B was related to the pathological type， tumor grade， T stage and AJCC stage of bladder cancer （P<0.05）， but not to gender， age， tumor N stage and M stage（P>0.05）; the tumor-specific survival and overall survival of patients with high KIF26B expression were lower than those with low KIF26B expression （P<0.05）. In 60 cases of bladder cancer tissues， the expression of KIF26B in bladder cancer tissues was higher than that in adjacent normal tissues（P<0.05）， and the expression of KIF26B was related to tumor grade， T stage， N stage and smoking? （P<0.05）， but not to gender， age and M stage（P>0.05）.Conclusion? KIF26B is highly expressed in bladder cancer and is related to the clinicopathological features and prognosis of bladder cancer.

Key words：Bladder cancer;Kinesin family member 26B;Clinicopathological features

膀胱癌（bladder cancer）是泌尿外科常見的惡性腫瘤，具有發病率高、易復發的特點。世界范圍內，膀胱癌的發病率在男性惡性腫瘤中排第4位，而死亡率排第8位[1]。在我國，膀胱癌發病率在全身惡性腫瘤中排第8位[2]。膀胱癌的治療以手術為主，但復發率和進展率高，5年內復發患者比例占70%，而有10%～30%的患者進一步發展成為肌層浸潤性尿路上皮癌，嚴重威脅人們的健康[3]。驅動蛋白家族成員26B（kinesin family member 26B， KIF26B）是驅動蛋白家族中的一名成員，具有ATP酶活性，在細胞生長、有絲分裂過程中發揮重要功能[4]。研究發現，KIF26B基因參與腫瘤的發生發展，被認為是乳腺癌[5]、胃癌[6]和肝細胞癌[7]的致癌基因，但KIF26B在膀胱癌中的作用報道較少。基于此，本研究通過生物信息學分析結合臨床組織樣本實驗探討KIF26B在膀胱癌中的表達水平，進一步分析其與膀胱癌臨床病理特征及預后關系，以期為膀胱癌的診治提供依據。

1資料與方法

1.1一般資料? 從TCGA數據庫中下載膀胱癌mRNA表達譜及臨床數據，其中包含414例膀胱癌組織樣本和19例正常組織樣本，臨床數據包括患者性別、年齡、病理、分期、分級、隨訪資料等。收集2019年5月-2021年6月在右江民族醫學院附屬醫院接受手術治療的60例新鮮膀胱癌組織樣本，包括膀胱癌及癌旁組織，所有患者均經病理學確診，術前均未進行過放療或化療。本研究獲右江民族醫學院附屬醫院倫理委員會批準并獲得患者知情同意，且簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1主要試劑與儀器? ?Trizol（天根生化科技有限公司）；Green qPCR SuperMix 試劑盒（北京全式金生物有限公司）；引物設計合成（上海生工公司）；RNase inhibitor、dNTPs、氯仿、異丙醇、實時熒光定量PCR儀及冷凍離心機等。

1.2.2標本收集和RNA提取? 新鮮腫瘤組織取材后立即放入液氮中，-80 ℃冰箱保存備用。低溫保存的組織標本解凍后研磨成粉末，加入Trizol裂解組織，再加入氯仿后震蕩12 000g離心15 min，將無色上清液轉移至另一EP管，加入同體積異丙醇，混勻放置10 min后12 000 g離心15 min，去掉上清液，保留EP管底部白色沉淀，干燥4 min后加入DEPC H2O溶解沉淀，檢測RNA濃度合格后，保留在-80 ℃冰箱備用。

1.2.3 qRT-PCR? 先按照試劑盒說明書逆轉錄合成cDNA，-80 ℃保存。qPCR反應體系：SYBR Green I mix 5 μl，Primer-F 0.3 μl，Primer-R 0.3 μl，cDNA 0.2 μl，滅菌蒸餾水5 μl。KIF26B上游引物：5-GCTTCTCAGGCTGAAGTGTG-3，下游引物：5-GTAGGATTTTCCCAGTTTGGCGTGG-3；GAPDH上游引物：5-CCAGGTGGTCTCCTCTGA-3，下游引物：5-GCTGTAGCCAAATTCGTTGT-3。反應條件：94 ℃起始模板變性10 min，95 ℃變性5 s，60 ℃退火15 s，72 ℃延伸10 s，40個循環。用ImageJ軟件進行亮度分析，GAPDH為內參照基因觀察結果。

1.3統計學方法? 采用R3.6.3和SPSS 23.0進行分析，計量資料以（x±s）或[M（P25，P75）]表示，采用t檢驗或Mann-Whitney U檢驗；計數資料以[n（%）]表示，采用？字2檢驗。Kaplan-Meier法分析KIF26B表達與膀胱癌生存預后的關系，基于KIF26B表達的中位數為臨界值，低于中位數為低表達組，高于中位數為高表達組，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1生物信息學分析KIF26B在膀胱癌中的表達與臨床病理關系? 在TCGA數據中，KIF26BmRNA在膀胱癌原發組織中的相對表達量為2.193（1.279，2.953），高于癌旁正常組織的0.591（0.397，1.168），差異有統計學意義（P＜0.05），見圖1。KIF26B高表達組和低表達組病理類型、腫瘤分級、T分期、AJCC分期比較，差異有統計學意義（P＜0.05），而兩組性別、年齡、腫瘤N分期、M分期比較，差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。

2.2臨床組織樣本驗證KIF26B在膀胱癌中的表達與臨床病理關系? 膀胱癌組織中，KIF26B相對表達量為2.23（1.47，2.99），高于癌旁組織的1.56（1.35，1.77），差異有統計學意義（P＜0.05），見圖2。進一步分析KIF26B與膀胱癌病理特征的關系發現，KIF26B高表達組和低表達組腫瘤分級、T分期、N分期、吸煙史比較，差異有統計學意義（P＜0.05），而兩組性別、年齡、BMI、M分期比較，差異無統計學意義（P＞0.05），見表2。

2.3 KIF26B在膀胱癌臨床預后中的價值? 基于TCGA數據庫，Kaplan-Meier生存分析發現KIF26B高表達組腫瘤特異性生存期差于低表達組（HR=2.10，95%CI：1.30～3.40，P＝0.003），而KIF26B高表達組總生存期亦低于低表達組（HR=1.56，95%CI：1.08～2.25，P＝0.017），見圖3。

3討論

膀胱癌是我國泌尿外科最常見的惡性腫瘤，篩選膀胱癌早期診斷和預后的標志物對降低膀胱癌患者死亡率、改善預后具有重要意義。驅動蛋白家族是一類可與微管結合的分子馬達蛋白，主要功能是參與細胞有絲分裂過程中紡錘體形成和細胞內物質運輸，驅動蛋白家族許多成員與惡性腫瘤的發生發展有關，參與惡性腫瘤的增殖、侵襲、轉移[8-11]。

KIF26B屬于驅動蛋白家族成員之一，編碼的蛋白由2108個氨基酸組成[12]。在小鼠胚胎發生模型中，KIF26B基因在小鼠四肢、面部和腎臟的發育過程中發揮著非常關鍵的調節作用[13]。此外，KIF26B對間充質細胞的粘附和極化有重要作用，被認為是Wnt5a/ROR信號通路的下游靶分子，其作用是調節細胞骨架，影響細胞的遷移、極化和粘附[14，15]。既往研究表明[16]，高表達KIF26B是各種癌癥預后不良的一個指標，其與細胞增殖、遷移、侵襲甚至耐藥密切相關。Liu Y等[17]研究發現，KIF26B在髓母細胞瘤中高表達于癌旁正常組織，其表達水平與髓母細胞瘤臨床分期及預后不良有關，沉默KIF26B基因后，癌細胞增殖、遷移能力明顯下降，其機制為通過激活PI3K/AKT通路促進腫瘤的惡性進展。Wang S等[18]研究發現，KIF26B在乳腺癌組織中表達上調，其高表達患者淋巴結轉移、腫瘤分級等臨床病理變量有關，KIF26B沉默降低了Wnt、β-連環蛋白和細胞周期相關蛋白的表達水平，同時增加了p27的表達。Chen N等[19]通過沉默KIF26B使AKT/GSK-3β介導的Wnt/β-catenin通路失活，減弱了非小細胞肺癌的惡性表型。Zhang H等[6]在胃癌中研究發現，KIF26B表達在正常胃粘膜、無轉移的原發性胃癌組織、有轉移的原發性胃癌組織到繼發性淋巴結轉移病灶組織中呈逐步上調趨勢，KIF26B表達增加與腫瘤大小、淋巴結轉移以及預后不良有關，認為KIF26B為一種新型癌基因，通過激活胃癌中的VEGF通路促進細胞增殖和轉移。而目前關于KIF26B在膀胱癌中的作用未見相關報道。

本研究通過生物信息學分析KIF26B表達與膀胱癌的關系，結果發現KIF26B在膀胱癌中表達水平明顯高于癌旁正常組織；另通過單因素分析KIF26B表達與膀胱癌臨床病理的關系，結果發現KIF26B表達水平與病理類型、分級、T分期，AJCC分期有關，與患者性別、年齡、腫瘤N分期、M分期無關。膀胱癌病理類型主要包括尿路上皮癌、鱗癌和腺癌，鱗癌和腺癌等非尿路上皮癌比較少見，但惡性程度高于尿路上皮癌。本研究發現，KIF26B在非尿路上皮癌中的表達高于尿路上皮細胞癌，說明膀胱癌的病理類型惡性程度越高，KIF26B的表達越高，提示KIF26B高表達與預后不良有關。

為了對生物生物信息學結果進一步驗證，本研究通過收集60例膀胱癌及癌旁組織進行試驗驗證，結果發現KIF26B在膀胱癌組織中表達水平高于癌旁組織，與生物信息學結果一致。同時研究發現，KIF26B表達與患者T分期、腫瘤分級相關，即KIF26B表達越高，預示著患者病理T分期和分級越高，患者預后更差，結果與TCGA數據庫分析結果一致。此外，本研究還發現KIF26B表達與膀胱癌N分期、吸煙史呈正相關，而TCGA數據庫研究結果未發現KIF26B表達與膀胱癌N分期有關，原因可能是納入研究隊列的病例數、人種、組織類型與TCGA數據庫不同有關。進一步行生存分析發現，KIF26B高表達組腫瘤特異性生存期和總生存期差于低表達組，表明KIF26B高表達與較差的病理特征密切相關，容易導致預后不良。

綜上所述，KIF26B在膀胱癌中表達升高，與患者臨床病理T分期、分級密切相關，可作為膀胱癌預后不良的潛在標志物。本研究不足之處在于樣本量偏小，可能存在結果偏倚，且僅進行臨床樣本驗證，因此KIF26B在膀胱癌中的具體作用及機制仍有待下一步研究。

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收稿日期：2023-07-31；修回日期：2023-08-22

編輯/杜帆