乙酸脫氧酶2基因G487A位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性與腦梗死的風(fēng)險(xiǎn)分析

【摘要】目的 探討乙酸脫氧酶2（ALDH2）基因G487A位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性與腦梗死的相關(guān)性，為臨床提供參考。方法 選取2021年10月至2023年5月于海口市人民醫(yī)院確診的150例腦梗死患者作為腦梗死組，選取同期在海口市人民醫(yī)院進(jìn)行體檢的150例健康者作為非腦梗死組進(jìn)行回顧性分析。比較兩組研究對(duì)象的臨床資料、基因型和等位基因型頻率。結(jié)果 腦梗死組研究對(duì)象有吸煙史、飲酒史、糖尿病史、高血壓史占比，收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP）、三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和葡萄糖（GLU）水平均高于非腦梗死組，高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、載脂蛋白Ⅰ（ApoAⅠ）水平均低非腦梗死組（均Plt;0.05）。腦梗死組研究對(duì)象A等位基因攜帶者（GA+AA基因型）占比、A等位基因頻率均高于非腦梗死組（均Plt;0.05）。多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，ALDH2基因編碼區(qū)G487A的A等位基因攜帶是腦梗死發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（Plt;0.05）。結(jié)論 ALDH2基因G487A位點(diǎn)的多態(tài)性可能是影響腦梗死的危險(xiǎn)因素，臨床應(yīng)注意篩查。

【關(guān)鍵詞】乙酸脫氧酶2；G487A；單核苷酸多態(tài)性；腦梗死

【中圖分類(lèi)號(hào)】R743.9 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2096-2665.2024.06.0010.03

DOI：10.3969/j.issn.2096-2665.2024.06.004

腦梗死是由于腦部血液無(wú)法及時(shí)供應(yīng)導(dǎo)致腦部發(fā)生不可逆性的損傷，進(jìn)而引發(fā)腦部組織缺血缺氧性壞死，嚴(yán)重?fù)p害患者的腦功能[1-2]。乙酸脫氧酶2（ALDH2）普遍存在于腦、心臟和肝臟等部位。ALDH2基因變異與腦梗死的風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)，ALDH2基因包括12個(gè)內(nèi)含子與13個(gè)外顯子。機(jī)體ALDH2基因中第12個(gè)外顯子1 510位具有堿基鳥(niǎo)嘌呤（G）代替腺嘌呤（A）的多態(tài)性，進(jìn)而賴(lài)氨酸可代替氨基酸序列第487位上的谷氨酸，從而降低ALDH2酶的活性，甚至使其喪失酶活性；同時(shí)，減少了乙醛的代謝和清除，可能引發(fā)氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，與腦梗死的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)[3]。故本研究探討ALDH2基因G487A位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性與腦梗死的相關(guān)性研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2021年10月至2023年5月于海口市人民醫(yī)院確診的150例腦梗死患者作為腦梗死組，選取同期在海口市人民醫(yī)院進(jìn)行體檢的150例健康者作為非腦梗死組進(jìn)行回顧性分析。本研究經(jīng)海口市人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。腦梗死組患者納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴符合《中國(guó)各類(lèi)主要腦血管病診斷要點(diǎn)2019》[4]中腦梗死的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)頭顱MRI確診；⑵存在局灶性神經(jīng)功能缺損；⑶年齡54～76歲。非腦梗死組研究對(duì)象納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴經(jīng)體檢明確無(wú)動(dòng)脈狹窄；⑵年齡54～72歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴合并精神異常者；⑵合并惡性腫瘤者。

1.2 研究方法 ⑴采用動(dòng)態(tài)血壓測(cè)量?jī)x（深圳樂(lè)普智能醫(yī)療器械有限公司，粵械注準(zhǔn)20202071530，型號(hào)：LABP100U）測(cè)量研究對(duì)象清晨收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP），測(cè)量3次，最后取平均值。采集研究對(duì)象清晨空腹外周靜脈血4 mL，分裝于2 mL離心管中，冷藏于-80 ℃的冰箱中。采用離心機(jī)以3 000 r/min轉(zhuǎn)速離心15 min（離心半徑為10 cm）。采用全自動(dòng)生化分析儀（深圳海路生物技術(shù)有限公司，粵械注準(zhǔn)20192220978，型號(hào)：FB-460）測(cè)定三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、載脂蛋白（Apo）A Ⅰ、ApoB100和葡萄糖（GLU）水平。⑵ ALDH2基因型測(cè)定。采集患者的靜脈血3 mL，采用枸椽酸鈉進(jìn)行抗凝，白細(xì)胞由Ficoll淋巴細(xì)胞分離，DNA由基因組DNA提取試劑盒[天根生化科技（北京）有限公司，規(guī)格：50次/盒]進(jìn)行提取。目的DNA片斷擴(kuò)增引物：上游引物5′-GTCAACTGCTATGATGTGTTTGG-3′，下游引5′-CCACCAGCAGACCCTCAAG-3′。雙蒸水補(bǔ)充至50 μL，引物各2 μL，2×Master Mix 25 μL，模板DNA 2 μg，反應(yīng)體系50 μL。反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性3 min之后開(kāi)始循環(huán)：94 ℃變性45 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸45 s，共35個(gè)循環(huán)，最后72 ℃延伸5 min，4 ℃保存。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物是200 bp。擴(kuò)增產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠內(nèi)電泳，用溴乙啶染色，凝膠成像系統(tǒng)下由紫外線觀察、分析電泳結(jié)果。切下目標(biāo)條帶，PCR產(chǎn)物由瓊脂糖凝膠回收試劑盒（北京索萊寶科技有限公司）純化，濟(jì)南博亞生物技術(shù)有限公司提供目的基因片段測(cè)序。

1.3 觀察指標(biāo) ⑴比較兩組研究對(duì)象的臨床資料。資料包括年齡、性別、血壓、吸煙史、飲酒史、糖尿病史、高血壓史、血脂指標(biāo)等。⑵比較兩組研究對(duì)象基因型/等位基因頻數(shù)。等位基因頻率=（2×純合子+雜合子）/（2×受檢人數(shù)）。⑶分析影響腦梗死發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。組間基因型頻率與等位基因由χ2進(jìn)行檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以[例（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以（x）表示，采用t檢驗(yàn)；多因素分析采用Logistic回歸分析。以Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對(duì)象臨床資料比較 兩組研究對(duì)象年齡、性別構(gòu)成比和ApoB100水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均Pgt;0.05）；腦梗死組研究對(duì)象有吸煙史、飲酒史、糖尿病史、高血壓史占比，SBP、DBP、TG、TC、LDL-C和GLU水平均高于非腦梗死組，HDL-C、ApoAⅠ水平均低非腦梗死組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均Plt;0.05），見(jiàn)表1。

2.2 兩組研究對(duì)象基因型/等位基因頻數(shù)比較 ALDH2基因型G487A位點(diǎn)有GG、GA和AA 3種基因型，G、A兩種等位基因。腦梗死組研究對(duì)象A等位基因攜帶者（GA+AA基因型）、A等位基因頻率均高于非腦梗死組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均Plt;0.05），見(jiàn)表2。

2.3 影響腦梗死發(fā)生的多因素Logistic分析 以是否發(fā)生腦梗死為因變量，可能影響腦梗死發(fā)生的因素為自變量進(jìn)行賦值后納入多因素Logistic回歸分析。結(jié)果顯示，ALDH2基因編碼區(qū)G487A的A等位基因攜帶者是腦梗死發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，見(jiàn)表3、表4。

3 討論

腦梗死多發(fā)于中老年群體，起病往往較為急驟，且患者常伴有高血脂、糖尿病和高血壓等基礎(chǔ)疾病，若未得到及時(shí)、有效的治療，易損傷患者的腦功能[5]。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展與完善，有研究發(fā)現(xiàn)生化指標(biāo)、血液流變學(xué)和酶活性與腦梗死的發(fā)生、發(fā)展息息相關(guān)[6]。ALDH2酶作為醛氧化的主要酶之一，其基因的多態(tài)性會(huì)影響組織的結(jié)構(gòu)與表達(dá)水平。G487A位點(diǎn)的多態(tài)性會(huì)導(dǎo)致ALDH2酶的活性降低或喪失。有研究顯示，攜帶G487A位點(diǎn)特定變異的人群在飲酒后更容易出現(xiàn)乙醛積累，而乙醛是一種具有血管毒性的物質(zhì)，長(zhǎng)期積累可能增加動(dòng)脈粥樣硬化的風(fēng)險(xiǎn)，進(jìn)而增加腦梗死的發(fā)病率[7-8]。

本研究結(jié)果顯示，腦梗死組研究對(duì)象有吸煙史、飲酒史、糖尿病史、高血壓史占比，SBP、DBP、TG、TC、LDL-C和GLU水平均高于非腦梗死組，HDL-C、ApoAⅠ水平均低非腦梗死組。腦梗死組研究對(duì)象A等位基因攜帶者（GA+AA基因型）、A等位基因頻率高于非腦梗死組。多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，ALDH2基因編碼區(qū)G487A的A等位基因攜帶是腦梗死發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示ALDH2基因G487A位點(diǎn)的多態(tài)性是影響腦梗死的危險(xiǎn)因素。分析原因，ALDH2基因的第12個(gè)外顯子1 510位存在著堿基A被G替換的多態(tài)性，導(dǎo)致氨基酸序列第487位上的谷氨酸被賴(lài)氨酸所替換，這一突變使得ALDH2酶的活性下降甚至完全喪失，其活性的高低是由ALDH2基因多態(tài)性決定的。ALDH2基因突變型腔隙性腦梗死患者的腦損傷程度可能更為嚴(yán)重，其機(jī)制可能是突變型腦梗死發(fā)病過(guò)程中一氧化氮產(chǎn)生不足，從而導(dǎo)致了嚴(yán)重的腦血管損傷癥狀[9-10]。ALDH2基因中攜帶GG基因型、G等位基因會(huì)降低腦梗死的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，而攜帶GA基因型、A等位基因會(huì)增加腦梗死的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)[11-12]。

綜上所述，ALDH2基因G487A位點(diǎn)的多態(tài)性可能是影響腦梗死的危險(xiǎn)因素，臨床應(yīng)加以重視。

參考文獻(xiàn)

路俊芳.阿替普酶靜脈溶栓治療對(duì)急性腦梗死患者神經(jīng)功能及生活質(zhì)量的影響[J].中國(guó)藥物與臨床， 2020， 20（18）： 3114-3115.

楊天坤. 腦梗死患者發(fā)病后發(fā)生血轉(zhuǎn)化的危險(xiǎn)因素分析及患者臨床特征研究[J]. 航空航天醫(yī)學(xué)雜志， 2023， 34（10）： 1189-1191.

王少津，許麗娃，吉家釵. ALDH2基因G487A位點(diǎn)多態(tài)性與2型糖尿病患者腦梗死風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志， 2021， 31（16）： 36-40.

中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)病學(xué)分會(huì)，中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)病學(xué)分會(huì)腦血管病學(xué)組.中國(guó)各類(lèi)主要腦血管病診斷要點(diǎn)2019[J].中華神經(jīng)科雜志， 2019， 52（9）： 710-715.

歐翠玲，吳嬋嬋，敖友愛(ài)，等.高血壓性腦梗死患者合并糖尿病和高脂血癥及其疾病知曉率和控制率的現(xiàn)狀[J].現(xiàn)代臨床護(hù)理， 2017， 16（10）： 25-30.

張三妮，韓淑輝.血清TRAF6、sTLT-1和血管生成素樣蛋白8對(duì)急性腦梗死出血性轉(zhuǎn)化的預(yù)測(cè)效能分析[J].中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)， 2023， 52（11）： 1009-1014.

費(fèi)娟娟，張英梅，任駿.乙醛脫氫酶2與心血管疾病研究進(jìn)展[J].生命科學(xué)， 2022， 34（2）： 128-136.

劉春苗，楊國(guó)帥，鐘偉，等. H型高血壓合并腦梗死患者ALDH2基因多態(tài)性與Hcy代謝、炎性反應(yīng)及氧化應(yīng)激狀態(tài)的相關(guān)性[J]. 疑難病雜志， 2019， 18（6）： 554-558.

司英麗，張冬青. 乙醛脫氫酶2基因多態(tài)性與急性腦梗死的相關(guān)性研究[J]. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床， 2023， 20（22）： 3332-3335.

徐筱婧. ALDH2基因單核苷酸多態(tài)性與腦梗死的關(guān)聯(lián)分析[D].遵義： 遵義醫(yī)學(xué)院， 2012.

劉春苗，楊國(guó)帥，劉炫君，等. H型高血壓患者的腦梗死風(fēng)險(xiǎn)與乙醛脫氫酶2基因多態(tài)性的相關(guān)性[J]. 中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)， 2018， 18（12）： 1251-1254， 1268.

吳和弟，許麗娃，吉家釵，等.乙醛脫氫酶2基因G487A位點(diǎn)多態(tài)性與老年2型糖尿病患者冠狀動(dòng)脈狹窄及其嚴(yán)重程度的關(guān)系研究[J].實(shí)用心腦肺血管病雜志， 2019， 27（1）： 53-57.