紅雀嘴茶不同藥用部位浸出率比較及安全性研究

*基金項目：國家中醫藥管理局全國名老中醫藥專家帥燾傳承工作室項目（國中醫藥人教函〔2022〕75號）

第一作者簡介：夏海梅（1990-），女，碩士，主管中藥師，研究方向：中藥藥理研究及中醫藥防治艾滋病研究。

△通信作者：瞿廣城，E-mail：277960224@qq.com

摘要：目的" 測定紅雀嘴茶4個不同部位的浸出率及其嫩葉芽的安全性研究。方法" 分別以70%乙醇和水為溶劑，加熱回流提取，測定嫩葉、老葉、嫩芽、果實的浸出率，比較2種不同溶劑提取后不同部位的浸出率；取各提取液進行鹽酸-鎂粉、三氯化鋁實驗鑒別其是否含黃酮類成分；不同溶劑提取嫩葉芽測定浸出率，急性毒性試驗評價其安全性。結果" 同一溶劑提取，浸出率：嫩葉gt;嫩芽gt;果實gt;老葉；同一部位不同溶劑提取，浸出率：70%乙醇gt;水提取；紅雀嘴茶嫩葉、嫩芽、老葉、果實均含有黃酮類化學成分；不同溶劑提取測定嫩葉芽浸出率：70%乙醇（49.93%）gt;50%乙醇（46.17%）gt;水（45.40%）；急毒實驗研究，觀察14d內小鼠死亡率，水提組小鼠總死亡率15%，醇提組小鼠總死亡率50%。結論" 紅雀嘴茶嫩葉、老葉、嫩芽、果實均含黃酮類化合物，浸出率高，乙醇提取浸膏得率大于水提取，其中直接陰干嫩葉芽對機體有一定程度的損害，應謹慎使用。其果實浸出率高，可進一步開發研究應用。

關鍵詞：紅雀嘴茶；浸出率；鑒別；安全性

中圖分類號：R285.5""" 文獻標志碼：A""" 文章編號：1007-2349（2024）04-0092-04

雀嘴茶，杜鵑花科越橘屬樟葉越橘（vaccinium dunalianum Wight）植物的幼嫩葉芽［1］，因形似雀嘴呈鉤狀，在云南彝族民間稱為“雀嘴茶”，色紅者稱為紅雀嘴，色白者稱為白雀嘴。彝醫稱“那景弄”、“羅嘎丕”，用其干燥枝、葉，謂明目茶［2］，具有清熱養陰，祛風明目，潤腸通便，舒經活絡的功效。雀嘴茶是云南滇中特有野生茶代用品，最早在明朝作為貢品使用，又稱“始祖茶”，多生于海拔1500～3600 m的灌木叢，主產于云南、貴州、四川、西藏等地［3］，紅雀嘴茶主要分布在云南省楚雄州武定縣，目前尚不可大量栽培，僅有移栽品，多野生。民間記載，常飲雀嘴茶可提神醒腦、健脾益氣、軟化血管、降血壓、降血脂等。研究發現，來源于杜鵑花科南燭屬植物的葉（Lyonia ovalifolia（W.）Drude）經70%乙醇提取，LD50為39.9g/kg，對小鼠多個器官有不同程度的損傷［4］。木藜蘆烷型二萜是杜鵑花科植物特征成分，為天然非生物堿毒素，主要來源于杜鵑花屬、南燭屬、木藜蘆屬、馬醉木屬、山月桂屬［5］。紅雀嘴茶雖屬越橘屬但也來源于杜鵑花科，目前尚且缺乏實驗對其進行安全性評價，本研究對紅雀嘴茶四個不同部位的浸出率及嫩葉芽進行安全性研究，為雀嘴茶的開發研究提供依據。

1" 材料與儀器

1.1" 實驗動物" 昆明種健康小鼠80只，SPF級，體質量（20±2）g，雌雄各半，購自昆明醫科大學實驗動物學部，許可證號：SCXK（滇）K2020-0004，飼養于云南省中醫中藥研究院動物實驗室，配置IVC獨立送風系統，照明晝夜各半，溫度20℃～26℃，濕度40%～60%。實驗操作經過云南省中醫中藥研究院動物倫理審批。

1.2nbsp; 藥物與試劑" 陰干紅雀嘴茶，采自云南省武定縣大麥地村；75%乙醇，購自天津市風船化學試劑科技有限公司。

1.3 "主要儀器" 分析天平，北京賽多利斯科學儀器（北京）有限公司；ZF-1紫外分析儀，漢諾。

2" 實驗方法

2.1" 測定4個部位浸出率" 取自然陰干的紅雀嘴茶嫩芽、嫩葉、老葉及果實粉碎，過二號篩，分別精密稱取供試品2.00g，置于100mL錐形瓶中，按照《中華人民共和國藥典》（2020）的方法，分別以純凈水、70%乙醇為溶劑，測定4個供試品的浸出率。

浸出率%=V總×（M2-M1）25×M0

M2：坩堝+浸膏恒重，M1：坩堝恒重，M0：供試品重量

2.2" 黃酮類成分鑒定" 鹽酸-鎂粉、三氯化鋁實驗鑒定紅雀嘴茶嫩芽、嫩葉、老葉及果實中是否含黃酮類成分。

2.3" 熱浸法測定紅雀嘴茶嫩葉芽浸出率" 取自然陰干的紅色雀嘴茶嫩葉芽（1～2葉），不同溶劑（純凈水、50%乙醇、70%乙醇）提取，按照2020版藥典方法測定浸出率。

2.4" 急性毒性試驗" 制備實驗用藥：取自然陰干紅雀嘴茶幼嫩葉芽（1～2葉）300 g，加入3000mL純凈水（70%乙醇）加熱回流提取2 h，濾過藥液，加純凈水至原刻度，繼續提取1 h，過濾，合并濾液，濃縮干燥備用。水提：3.82g生藥/g干粉，70%醇提：3.04g生藥/g干粉。

選SPF級健康昆明種小鼠80只，適應性飼養3 d，雌雄各半，隨機分為對照組、水提組（50g生藥/kg）、70%醇提組（64.8g生藥/kg），禁食不禁水""" 12，24 h內灌胃給藥3次，給藥劑量40mL/kg，隔天稱量體重，持續14d，實驗過程中觀察動物飲食、外觀、行為、分泌物、排泄物、死亡情況及中毒反應（中毒反應的癥狀、嚴重程度、起始時間、持續時間、是否可逆等）。試驗結束，處死小鼠，觀察內臟變化。明目茶成人（70kg）用藥劑量10～20g/d，按成人用量均值15g/d換算合成人用藥倍數。

3" 實驗結果

3.1" 測定紅雀嘴茶4個部位的浸出率" 見表1。同一溶劑提取，浸出率：嫩葉gt;嫩芽gt;果實gt;老葉；同一部位不同溶劑提取，浸出率：70%乙醇gt;水提取。對比同一部位兩個不同溶劑的浸出率，雖然70%乙醇浸膏得率大于水提取，但差距較小，提示紅雀嘴茶中水溶性成分較多，可溶于熱水。同一溶劑不同部位的浸膏得率均在32%以上，提示4個部位活性成分含量均很高。

3.2" 對紅雀嘴茶嫩葉、老葉、嫩芽、果實4個部位的水提液及70%乙醇提取液進行鹽酸-鎂粉和三氯化鋁實驗鑒別是否含黃酮類成分" 見表2。四個部位均含有黃酮類化合物。黃酮類成分難溶于水，天然黃酮多以苷類形式存在，黃酮苷易溶于極性較大的溶劑，如水、乙醇等，提示紅雀嘴茶中天然黃酮成分較多，水溶性較好，開水泡日常茶飲可溶出較多的化學成分。

3.3" 不同溶劑提取幼嫩葉測浸出率" 見表3。發現70%乙醇gt;50%乙醇gt;水。提取率均gt;45%，得率較高。

3.4" 急性毒性實驗，見表4。觀察小鼠14d，灌胃

給藥12h后，水提給藥組雌鼠死亡2只，70%醇提給藥組雌鼠死亡6只，雄鼠死亡2只；給藥24h后，水提給藥組雄鼠死亡1只，70%醇提給藥組雌、雄鼠各死亡1只，之后實驗期間無小鼠死亡，水提組小鼠總死亡率15%，70%醇提組小鼠總死亡率50%。觀察小鼠排泄物有腹瀉現象，精神狀態、行為尚可，飲食無變化，解剖死亡小鼠，肉眼未觀察到臟器明顯異常。結合水提浸出率及日常茶飲的使用方式，提示陰干雀嘴茶嫩葉芽對機體有毒性，應選擇經炮制后的雀嘴茶食用。

4" 討論

目前，紅雀嘴茶的藥用部位主要是干燥枝、葉（明目茶）及幼嫩葉芽。走訪茶農發現，紅雀嘴茶主要采集芽苞使用，舍棄嫩葉，存在過早采摘、資源浪費現象，而據實驗結果提示，嫩葉的藥用價值可能大于芽苞，筆者認為可適當推遲采收時間，擴大采集部位，提高雀嘴茶的資源利用率。據報道，稀乙醇或水提取條件下，紅色雀嘴茶浸出率均高于白色雀嘴茶，稀乙醇提取浸膏得率高于水提取［6］，該實驗結果與本次研究結果大體一致。雀嘴茶主要含6′-O-咖啡酰熊果苷（6-O-Caffeoylarbutin，CA）、熊果苷（arbutin）、綠原酸（Chlorogenic acid）等，三者均屬天然植物多酚，在熱水中溶解度大，易溶于乙醇。研究發現，乙醇提取后不同溶劑萃取，乙酸乙酯部位總酚和總黃酮含量最高［7］，雀舌茶花芽、葉、莖、根打粉，超純水超聲處理，HPLC法測定含量，不同部位均顯示6′-O-咖啡酰熊果苷含量最高，不同部位主要活性成分含量：花芽gt;葉gt;莖gt;根［8］。而自然風干比熱風干燥可顯著保存雀嘴茶中主要有效成分熊果苷、綠原酸及6′-O-咖啡酰熊果苷的含量［9］。本研究選用自然陰干紅色雀嘴茶的幼嫩葉芽為研究對象，水、50%乙醇、70%乙醇3種溶劑提取測定浸出率，所得結果與文獻報道50%乙醇浸出率48%、乙醇提取得率大于水提取一致。

文獻報道雀嘴茶可提高小鼠免疫功能［10］，其化學成分烏金苷和熊果苷可降低血清尿酸，保護腎臟，改善高尿酸所致的糖脂代謝及炎性病變［11］，6′-O-咖啡酰熊果苷可有效改善四氧嘧啶誘導的Ⅰ型糖尿病小鼠血糖及血脂水平，降低腎臟、肝臟、胰腺的病理損傷［12］。6-O-咖啡酰熊果苷、β-熊果苷和綠原酸具有良好的抗氧化活性，6′-O-咖啡酰熊果苷可同時抑制單酚酶和二酚酶活性，β-熊果苷可抑制單酚酶活性［13］，酪氨酸酶是一種多酚氧化酶，具有單酚酶和二酚酶活性，是調控黑色素生成的限速酶，抑制酪氨酸酶活性是抑制黑素生成最主要的手段，而抑制黑色素生成是當下美白祛斑劑最主要的作用機理。熊果苷是一種糖苷，是國際公認的21世紀理想的植物皮膚美白祛斑活性劑［14］，可抑制酪氨酸酶，阻止黑色素生成，增白祛斑活性顯著。XU-Min等［15］利用斑馬魚模型，發現雀嘴茶中6-O-咖啡酰熊果苷可顯著抑制黑色素生成，其抑制活性約是熊果苷的2倍，而毒性比熊果苷低2倍，停止使用后黑色素合成可逆。提示6-O-咖啡酰熊果苷較傳統美白劑具有更顯著的美白活性且安全性更高，是美白產品理想的天然綠色添加劑。

綜合文獻報道，目前對雀嘴茶的研究報道相對較少，主要集中在化學成分、資源栽培、糖脂代謝性疾病研究等方面，研究單位相對集中，西南林業大學及昆明理工大學的報道較多，但未見對紅雀嘴茶安全性研究的報道。筆者認為目前研究較為局限與紅雀嘴茶資源分布較為集中有關，紅雀嘴茶屬云南民域特色資源，其資源優勢及市場優勢尚未凸顯。幼嫩葉芽是雀嘴茶目前普遍使用的部位，毒性實驗研究評價其安全性發現，小鼠在給藥后48h出現大量死亡，且醇提組小鼠死亡率gt;水提組，提示食用直接陰干雀嘴茶嫩葉芽具有一定的毒性，乙醇提取毒性大于水提取。但因70%醇提組給藥劑量大于水提組，不能因此準確評價兩種溶劑下雀嘴茶的毒性。本研究雖未能全面研究報道紅雀嘴茶的LD0、LD50、LD100，但也一定程度說明紅雀嘴茶對機體具有一定的毒性損害，應謹慎使用。研究結果顯示，70%醇組小鼠死亡率更高，筆者分析可能是因為其用藥量更大，也可能是醇提后溶出了更多的化學成分加大毒性，提示食用雀嘴茶的同時應避免飲酒。結合市售紅雀嘴茶“三蒸三露”或是“拌蜂蜜后文火炒干”的炮制工藝，此炮制工藝可能具有減毒效果。結合實驗結果，筆者認為，企業、科研學者等應該根據不同需求選擇不同炮制工藝的雀嘴茶使用，不宜混淆。

本次研究有不足之處，（1）未對不同炮制工藝的紅雀嘴茶進行全面研究，所得結果較為局限，不能全方位評價不同炮制工藝下紅雀嘴茶不同藥用部位的浸出率和安全性。（2）實驗未能全面研究報道紅雀嘴茶的LD0、LD50、LD100，深入病理、毒理研究進一步揭示紅雀嘴茶的毒性成分及損傷靶器官或組織等。紅雀嘴茶為民域特產，資源寶貴，現為特產飲品銷售，所以對其進行安全性評價非常有必要，下一步筆者將進一步明確其毒性靶標。另外，樟葉越橘陰干果實富含粗纖維（36.3%），氨基酸配比合理，必需氨基酸、鮮味氨基酸分別占總氨基酸的38.9%、26.2%，有典型的高鉀低鈉特征：鉀＞鈣＞鎂＞磷＞鈉，有極高的營養劑保健價值［16］，但目前對雀嘴茶果實的研究及應用較少，結合樟葉越橘果實較高的浸出率，提示其重要的開發應用價值。

越橘被FAO列為人類五大健康食品之一，且樟葉越橘富含6-0-咖啡酰熊果苷（20%～25%）、熊果苷（12%～18%）是天然的美白原料，紅雀嘴茶資源寶貴，應盡可能擴大藥用部位深入研究。

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（收稿日期：2023-10-19）