腦震寧顆粒調節三重腦震蕩大鼠線粒體能量代謝的機制研究Δ

高麗，趙樂，魏楠楠，武立雅，王恬恬，張唯依，王永輝 （山西中醫藥大學基礎醫學院，山西 晉中 030619）

創傷性顱腦損傷是由于機械外力作用于顱腦內容物導致腦組織結構損傷或功能中斷，從而引起一系列分子損傷的連鎖反應[1―2]。腦震蕩屬于輕型創傷性顱腦損傷，主要表現為記憶下降、情志異常、認知障礙等癥狀，多呈現出腦組織挫傷、神經性血管損傷、顱內壓升高、血腦屏障破壞等原發或繼發性病理特點[3]。目前腦震蕩的發病率在逐年增高[4]，嚴重影響患者的日常生活，并給社會帶來巨大的經濟損失，已經成為一個亟待解決的公共衛生問題。

腦震寧顆粒由生地黃、當歸、丹參、丹皮、川芎、地龍、炒酸棗仁、柏子仁、茯苓、陳皮、竹茹11味藥組成，共奏活血通絡、寧心安神、除煩止嘔之功效。有研究表明，腦震寧顆粒對于腦震蕩、創傷性綜合征、神經血管性疾病等所致的頭痛頭暈相關癥狀有很好的療效[5]。本課題組前期研究發現，腦震寧顆?？梢栽黾泳€粒體三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）和呼吸鏈復合物Ⅰ的含量，改善線粒體結構和功能，從而促進神經元的修復再生[6―7]，但其具體的作用機制尚未完全明確。Wnt信號通路可以促進腦組織的神經發生和保護，并與線粒體分布、代謝及相關動力學改變密切相關[8]。因此，本實驗以Wnt信號通路為出發點，探究腦震寧顆粒調節三重腦震蕩（multiple cerebral concussion，MCC）模型大鼠海馬組織線粒體能量代謝的作用機制，以期為腦震寧顆粒的臨床應用提供一定的科學依據。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器有：XR-XZ301型曠場及分析系統（上海欣軟信息科技有限公司），R540IE型呼吸麻醉機（深圳市瑞沃德生命科技有限公司），UC7型超薄切片機（德國Leica公司），HT7800型透射電子顯微鏡（日本株式會社日立制作所），Pannoramic MIDI型掃描儀（濟南丹吉爾電子有限公司），KZ-Ⅲ-FP型研磨儀（武漢賽維爾生物科技有限公司），A51119600C型酶標儀（瑞士SGS集團），Mini MP4型電泳儀、Mini TBT型轉印儀[莫納（蘇州）生物科技有限公司]，ImageQuant LAS 500型一體化成像儀（美國GE公司）。

1.2 主要藥品與試劑

腦震寧顆粒（批號20200701）購自山西振東安特生物制藥有限公司；吡拉西坦片（批號4201008，規格0.4 g）購自東北制藥集團沈陽第一制藥有限公司；異氟烷（批號20221102）購自深圳市瑞沃德生命科技有限公司；ATP含量檢測試劑盒（批號20230329）購自南京建成生物工程研究所；電鏡固定液、組織自發熒光淬滅劑、DAPI染色試劑（批號分別為G1102、G1221、G1012）均購自武漢賽維爾生物科技有限公司；BCA蛋白濃度測定試劑盒、辣根過氧化物酶（HRP）標記的羊抗兔IgG抗體（批號分別為18C13B46、BST15D07AE54）均購自武漢博士德生物工程有限公司；十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）凝膠試劑盒（批號BB1207）購自陜西中暉赫彩生物醫藥科技有限公司；兔源過氧化物酶體增殖物激活受體γ共激活因子1α（peroxisome proliferator activated receptor gamma coactivator-1α，PGC-1α）單克隆抗體、兔源核呼吸因子1（nuclear respiratory factor-1，NRF-1）單克隆抗體、兔源線粒體轉錄因子A（mitochondrial transcription factor A，TFAM）單克隆抗體、兔源Wnt-3a多克隆抗體、兔源β-連環蛋白（β-catenin）單克隆抗體、兔源β-肌動蛋白（β-actin）單克隆抗體（批號分別為3523010313、0206040201、5500022039、00084249、4000000136、3500026050）均購自武漢愛博泰克生物科技有限公司；兔源動力蛋白相關蛋白1（dynamin-related protein 1，Drp1）單克隆抗體、兔源線粒體裂變蛋白1（mitochondrial fission protein 1，Fis1）單克隆抗體、兔源線粒體融合蛋白1（mitochondrial fusion 1，Mfn1）單克隆抗體、兔源視神經萎縮蛋白1（optic atrophy protein 1，Opa1）單克隆抗體（批號分別為12957-1-AP、10956-1-AP、13798-1-AP、27733-1-AP）均購自武漢三鷹生物技術有限公司。

1.3 實驗動物

SPF級Wistar大鼠，共52只，體重（220±10） g，雌雄各半，由維通利華實驗動物技術有限公司提供，動物生產許可證號為SCXK（京）2021-0006。大鼠飼養于山西中醫藥大學實驗動物房，環境溫度（22±2） ℃，相對濕度（50±10）%，自由晝夜光照，自由進食、進水。本實驗通過山西中醫藥大學實驗動物倫理審查委員會批準，倫理編號為2021DW031。

2 方法

2.1 分組、造模與給藥

實驗大鼠分為正常組（n＝8）和造模組（n＝44）。大鼠適應性喂養7 d后，造模組采用“自由落體撞擊法”制備MCC大鼠模型，每日撞擊1次，連續3 d，撞擊部位為大鼠額顳葉部，撞擊條件為：高度100 cm，撞擊物質量150 g。每次撞擊后若符合下列條件則視為造模成功[7]：（1）撞擊后動物立刻出現一過性呼吸暫停，但不超過20 s即恢復正常呼吸節律；（2）動物出現短暫的角膜反射、針刺疼痛反應、翻正反射消失，但不超過3 min，恢復后無任何行動障礙。

將造模成功的大鼠采用隨機數字表法分為模型組、吡拉西坦組（陽性對照藥）和腦震寧顆粒低、中、高劑量組，每組8只。通過人/大鼠體表面積換算后，計算出藥物等效劑量（70 kg的人，以每日50 g藥物的臨床劑量標準為中劑量，1/2中劑量為低劑量，2倍中劑量為高劑量）。各給藥組大鼠按吡拉西坦組0.324 g/kg，腦震寧顆粒低、中、高劑量組2.25、4.5、9 g/kg的劑量灌服相應藥物。正常組和模型組大鼠灌服等體積生理鹽水。所有大鼠每天灌服1次，連續14 d。

2.2 大鼠運動探索能力的評估

采用曠場實驗進行評估。給藥14 d之后，首先清理實驗箱，消除氣味的影響，之后將大鼠快速放入實驗箱的中央，打開錄像系統，記錄其在5～10 min內的曠場活動軌跡，計算大鼠的水平運動總路程、中央格進入次數、靜止時間、直立次數，評估其運動探索能力。

2.3 大鼠學習記憶能力的評估

采用新物體識別實驗進行評估。在給藥的最后3 d，每天撫摸大鼠1～2 min。測試時，將A、B兩個球形物體放入正方形箱子中，開啟錄像設備，記錄10 min內大鼠與A、B兩物體的接觸情況，結束后放入飼養籠；1 h之后，將B物體換成立方體形狀的C物體，記錄2～5 min內大鼠與A、C兩物體的接觸情況。運用新物體識別指數來評估大鼠的學習記憶能力。新物體識別指數＝tC/（tB+tC）×100%，其中tB為探索舊物體B的時間，tC為探索新物體C的時間。

2.4 大鼠海馬組織線粒體ATP含量的檢測

給藥14 d之后，大鼠麻醉后腹主動脈取血，開顱取腦，冰上剝離組織，取100 mg海馬組織塊，按質量（g）∶體積（mL）＝1∶9的比例加入9倍體積的冷雙蒸水，勻漿后制成勻漿液，水浴煮沸后離心取上清進行后續操作。按照試劑盒說明書制備相應試劑，采用酶標儀檢測吸光度（A）值，并根據以下公式計算組織中的ATP含量：ATP含量（μmol/g prot）＝（A測定－A對照）/（A標準－A空白）×c標準×N÷cpr。c標準：標準品濃度，1 000 μmol/L；N：樣本測定前稀釋倍數；cpr：勻漿蛋白濃度。

2.5 大鼠海馬組織線粒體結構的觀察

采用透射電鏡觀察。取“2.4”項下各組大鼠海馬組織約1 mm3為檢測樣本，置于電鏡固定液（4 ℃）中。取出海馬組織先用0.1 mol/L PBS漂洗3次，每次15 min。之后滴加1%鋨酸避光室溫固定2 h，再用0.1 mol/L PBS漂洗3次，每次15 min。漂洗結束后將組織以30%、50%、70%、80%、95%、100%、100%的梯度依次進行乙醇脫水，每次20 min，繼續用丙酮脫水2次，每次15 min。然后進行滲透包埋和聚合，用超薄切片機切片，再用2%醋酸鈾飽和乙醇溶液避光染色8 min，用2.6%枸櫞酸鉛溶液避CO2染色8 min。等室溫干燥后通過透射電鏡觀察線粒體結構，并采集圖像進行分析。

2.6 大鼠海馬組織線粒體分裂、融合蛋白表達的檢測

采用免疫熒光法檢測。取“2.5”項下透射電鏡所剩的石蠟切片，每組各取6個樣本，脫蠟至水后進行抗原修復，修復完成后，自然冷卻。切片置于PBS中洗滌3次，每次5 min。干燥后用組化筆圈出腦組織范圍，滴加牛血清白蛋白，封閉30 min。滴加一抗（線粒體分裂蛋白Drp1、Fis1和線粒體融合蛋白Mfn1、Opa1稀釋度均為1∶200），4 ℃孵育過夜。切片于PBS中洗滌3次，每次5 min，滴加二抗（稀釋度均為1∶300），避光室溫孵育50 min。采用DAPI復染細胞核后，加入自發熒光淬滅劑5 min，流水沖洗10 min。室溫晾干，抗熒光淬滅封片劑封片。電子顯微鏡下觀察并采集圖像，采用Image J軟件對其熒光強度進行統計分析，以熒光強度反映蛋白表達水平，熒光強度值越高表明蛋白表達水平越高。

2.7 大鼠海馬組織線粒體生物合成和通路蛋白表達的檢測

采用Western blot法檢測。取“2.4”項下大鼠海馬組織，每組各取6個樣本，用RIPA裂解液提取蛋白，BCA試劑盒測定組織蛋白濃度，加入5×蛋白上樣緩沖液后加熱變性，制膠加樣進行電泳、轉膜，脫脂奶粉封閉2 h，加入TBST稀釋的一抗（PGC-1α、NRF-1、TFAM、Wnt-3a、β-catenin的稀釋度均為1∶1 000，β-actin的稀釋度為1∶30 000），4 ℃孵育12～18 h過夜。次日用TBST洗脫3次，每次10 min，加入稀釋后的二抗（稀釋度為1∶10 000或1∶5 000），常溫孵育60 min。TBST洗脫后，加入ECL發光染液顯影，凝膠成像分析儀拍攝圖像，采用Image J軟件進行灰度值檢測和數據分析，以目的蛋白灰度值與內參β-actin灰度值的比值表示目的蛋白的表達水平。

2.8 統計學分析

采用SPSS 27.0軟件進行統計分析，計量資料以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗。檢驗水準α＝0.05。

3 結果

3.1 腦震寧顆粒對大鼠運動探索能力的影響

與正常組比較，模型組大鼠的運動總路程、中央格進入次數和直立次數均顯著降低（P＜0.01），靜止時間顯著升高（P＜0.01）。與模型組比較，吡拉西坦組和腦震寧顆粒中、高劑量組大鼠的運動總路程、中央格進入次數和直立次數均顯著升高（P＜0.05或P＜0.01），靜止時間顯著降低（P＜0.01）；腦震寧顆粒低劑量組大鼠的運動總路程和直立次數均顯著升高（P＜0.01），靜止時間顯著降低（P＜0.05）。結果見表1。

表1 各組大鼠運動探索能力相關指標結果比較（±s，n＝8）

表1 各組大鼠運動探索能力相關指標結果比較（±s，n＝8）

a：與正常組比較，P＜0.01；b：與模型組比較，P＜0.05；c：與模型組比較，P＜0.01。

組別正常組模型組吡拉西坦組腦震寧顆粒低劑量組腦震寧顆粒中劑量組腦震寧顆粒高劑量組運動總路程/m 86.86±7.91 55.03±10.27a 71.58±7.10b 72.89±8.83c 75.15±8.94c 70.98±7.11b靜止時間/s 10.50±5.50 29.44±3.90a 16.00±3.17c 21.25±3.68b 16.13±3.71c 19.00±1.57c中央格進入次數/次4.88±0.64 1.38±0.92a 3.13±0.83c 2.00±0.76 2.50±0.93b 2.88±0.99c直立次數/次18.25±2.50 9.00±1.41a 14.25±1.26c 13.50±1.29c 14.50±1.29c 14.25±2.63c

3.2 腦震寧顆粒對大鼠學習記憶能力的影響

正常組、模型組、吡拉西坦組和腦震寧顆粒低、中、高劑量組大鼠的新物體識別指數分別為（68.67±8.42）%、（42.20±6.00）%、（51.29±10.81）%、（51.89±7.19）%、（55.74±7.63）%、（49.92±8.78）%。與正常組比較，模型組大鼠的新物體識別指數顯著降低（P＜0.01）。與模型組比較，吡拉西坦組和腦震寧顆粒低、中劑量組大鼠的新物體識別指數顯著升高（P＜0.05或P＜0.01）。

3.3 腦震寧顆粒對大鼠海馬組織線粒體ATP含量的影響

正常組、模型組、吡拉西坦組和腦震寧顆粒低、中、高劑量組大鼠海馬組織的線粒體ATP含量分別為（4.27±0.30）、（2.54±0.53）、（2.86±0.49）、（3.20±0.57）、（3.58±0.56）、（3.47±0.40） μmol/mg。與正常組比較，模型組大鼠海馬組織的線粒體ATP含量顯著降低（P＜0.01）。與模型組比較，腦震寧顆粒中、高劑量組大鼠海馬組織的線粒體ATP含量顯著升高（P＜0.05）；吡拉西坦組和腦震寧顆粒低劑量組大鼠海馬組織的線粒體ATP含量升高，但差異無統計學意義（P＞0.05）。

3.4 腦震寧顆粒對大鼠海馬組織線粒體結構的影響

透射電鏡掃描結果（圖1）顯示，正常組大鼠海馬組織神經元細胞膜完整清晰，細胞核的核膜結構清晰，染色質均勻，線粒體數量可、膜完整，粗面內質網未見明顯擴張、數量尚可。模型組大鼠海馬組織神經元細胞中度水腫，胞內基質稀疏，細胞器大多中度腫脹，以線粒體腫脹為主，線粒體數量豐富，嵴大量斷裂、減少，膜內基質局部溶解、變淡，部分線粒體膜內髓樣變（圖1B紅色箭頭），粗面內質網局部區域模糊斷裂。吡拉西坦組大鼠海馬組織細胞膜完整，線粒體中度腫脹（圖1C綠色箭頭），個別體積變大，嵴斷裂、減少，基質溶解或呈空泡樣，粗面內質網數量較少，局部區域模糊斷裂。腦震寧顆粒低劑量組大鼠海馬組織細胞核的核膜結構完整，線粒體腫脹明顯、數量尚可、大多膜完整，膜內基質溶解、變淡，部分線粒體膜內髓樣變（圖1D紅色箭頭），粗面內質網數量豐富、未見明顯擴張。腦震寧顆粒中劑量組大鼠海馬組織細胞核的核膜結構清晰，染色質均勻，線粒體輕、中度腫脹（圖1E綠色箭頭），膜完整，嵴少量斷裂、減少，粗面內質網數量較多。腦震寧顆粒高劑量組大鼠海馬組織細胞核呈橢圓形，染色質均勻，線粒體中度腫脹，膜完整，嵴大量斷裂、減少，膜內基質局部溶解、變淡，粗面內質網局部輕度擴張（圖1F藍色箭頭）、數量較多。其中以腦震寧顆粒中劑量組的損傷程度最輕。

圖1 各組大鼠海馬組織線粒體透射電鏡掃描圖（×2 500）

3.5 腦震寧顆粒對大鼠海馬組織線粒體分裂、融合蛋白表達的影響

與正常組比較，模型組大鼠海馬組織Drp1、Fis1的熒光強度均顯著升高（P＜0.01），Mfn1、Opa1的熒光強度均顯著降低（P＜0.01）。與模型組比較，各給藥組大鼠海馬組織Drp1、Fis1的熒光強度均顯著降低（P＜0.01），Mfn1、Opa1的熒光強度均顯著升高（P＜0.05或P＜0.01）。結果見表2。

表2 各組大鼠海馬組織Drp1、Fis1、Mfn1、Opa1的熒光強度結果比較（±s，n＝6，AU）

表2 各組大鼠海馬組織Drp1、Fis1、Mfn1、Opa1的熒光強度結果比較（±s，n＝6，AU）

a：與正常組比較，P＜0.01；b：與模型組比較，P＜0.01；c：與模型組比較，P＜0.05。

Opa1 102.42±1.68 53.73±5.03a 62.92±3.24c 71.35±7.08b 91.10±1.54b 69.74±3.49b組別正常組模型組吡拉西坦組腦震寧顆粒低劑量組腦震寧顆粒中劑量組腦震寧顆粒高劑量組Drp1 31.22±2.01 75.97±3.07a 39.95±1.56b 48.29±4.34b 44.01±1.39b 40.13±1.77b Fis1 29.96±1.18 64.59±3.93a 45.63±1.73b 50.15±0.93b 41.87±0.54b 50.12±2.45b Mfn1 97.37±3.92 46.41±1.07a 57.81±1.79b 58.41±0.51b 68.29±4.66b 66.68±3.07b

3.6 腦震寧顆粒對大鼠海馬組織線粒體生物合成和通路蛋白表達的影響

與正常組比較，模型組大鼠海馬組織PGC-1α、NRF-1、TFAM、Wnt-3a、β-catenin蛋白表達水平均顯著降低（P＜0.01）。與模型組比較，吡拉西坦組和腦震寧顆粒低、中劑量組大鼠海馬組織PGC-1α、NRF-1、TFAM、Wnt-3a、βcatenin蛋白表達水平均顯著升高（P＜0.01），腦震寧顆粒高劑量組大鼠海馬組織PGC-1α、TFAM、Wnt-3a、β-catenin蛋白表達水平均顯著升高（P＜0.01）。結果見表3、圖2。

圖2 各組大鼠海馬組織線粒體生物合成和通路蛋白表達的電泳圖

表3 各組大鼠海馬組織線粒體生物合成和通路蛋白表達水平比較（±s，n＝6）

表3 各組大鼠海馬組織線粒體生物合成和通路蛋白表達水平比較（±s，n＝6）

a：與正常組比較，P＜0.01；b：與模型組比較，P＜0.01。

組別正常組模型組吡拉西坦組腦震寧顆粒低劑量組腦震寧顆粒中劑量組腦震寧顆粒高劑量組β-catenin/β-actin 0.63±0.03 0.21±0.02a 0.49±0.03b 0.42±0.02b 0.57±0.02b 0.47±0.02b PGC-1α/β-actin 0.55±0.02 0.24±0.01a 0.43±0.02b 0.42±0.02b 0.46±0.02b 0.34±0.03b NRF-1/β-actin 0.73±0.04 0.34±0.03a 0.71±0.02b 0.58±0.02b 0.42±0.02b 0.36±0.03 TFAM/β-actin 0.80±0.03 0.36±0.03a 0.65±0.03b 0.66±0.05b 0.74±0.05b 0.59±0.03b Wnt-3a/β-actin 0.91±0.02 0.41±0.03a 0.68±0.02b 0.56±0.03b 0.74±0.04b 0.56±0.03b

4 討論

腦震蕩屬于中醫“頭痛”“外傷性腦病”范疇，其證初期多實，后期多虛實夾雜?！饵S帝內經》記載“若有所墜墮，惡血留內而不去”[9]。機械外力作用于腦絡，致氣血逆亂、瘀血阻滯、元神失養，日久或痰瘀阻竅，或氣血耗損，出現昏脹頭暈、記憶模糊等精神障礙。腦震寧顆粒中川芎、當歸、地龍、丹參用以除離經之血，行氣血，緩頭痛；炒酸棗仁、柏子仁以養心安神、寧心定志；生地黃、丹皮清血分之熱；生地黃、當歸補血分之不足；茯苓、陳皮、竹茹降逆和胃，化神竅之痰?，F代藥理學研究證明，川芎、炒酸棗仁等藥物可以減少細胞凋亡，提高ATP含量，減輕線粒體結構和功能損傷，改善機體癥狀[10―11]。王學建等[12]通過臨床研究表明，腦震寧顆?？梢跃徑饽X外傷后頭痛癥狀，糾正神經功能紊亂?；谝陨纤幬锏纳窠洷Ｗo作用，筆者進一步探討了腦震寧顆粒對MCC模型大鼠線粒體能量代謝的調節機制。

線粒體是一種多功能的半自主性細胞器，它通過三羧酸循環和氧化磷酸化反應還原氧氣，維持機體的氧化平衡，合成ATP，釋放能量，在參與機體細胞程序性死亡、氧化應激、細胞增殖與代謝等方面發揮著重要作用[13]。顱腦作為機體的生命中樞，與線粒體的關系十分密切。有研究表明，在帕金森病小鼠模型中，小鼠中腦的神經元數量減少，炎性因子表達增加，同時線粒體分裂、融合蛋白失衡[14]?？梢姡B腦損傷類疾病多伴隨線粒體和神經元的異常，且二者多相互影響。本課題組前期研究表明，腦震寧顆?？梢酝ㄟ^改善線粒體結構和功能，增加ATP含量，對MCC模型大鼠發揮神經保護作用，并提高其學習記憶能力[7]，但并未深入探究其核心靶點和機制。在本實驗中，模型組大鼠海馬組織線粒體ATP含量顯著降低，線粒體出現明顯腫脹，嵴大量斷裂、減少，部分線粒體膜內髓樣變，同時大鼠的運動探索能力和學習記憶能力下降。給予腦震寧顆粒干預后，腦震寧顆粒各劑量組大鼠海馬組織線粒體ATP含量顯著升高，神經元內線粒體結構明顯改善，大鼠的運動探索和學習記憶能力有所提高?？梢?，腦震寧顆粒可以修復神經元線粒體損傷，提高大鼠運動探索和學習記憶能力。

Wnt信號通路是一組由蛋白質Wnt和受體蛋白結合激發，多種蛋白參與，高度保守的信號轉導途徑[15]。它在胚胎發育、器官發生、組織再生與穩態中起著關鍵作用[16―17]。有研究表明，缺血再灌注損傷中，Wnt通路的關鍵分子糖原合成酶激酶3β表達增加，β-catenin被降解，誘導神經元細胞發生凋亡，提示Wnt信號通路對神經元細胞的增殖分化起重要作用；當Wnt信號激活時，Wnt與其受體結合激活蓬亂蛋白Dsh，抑制了糖原合成酶激酶3β，促進β-catenin與下游基因的轉錄[18]。研究發現，Wnt信號通路通過與線粒體生物合成及融合與分裂的相互作用來影響神經元細胞的正常發育和功能發揮[19]。線粒體生物合成、融合與分裂是線粒體質量控制過程中的重要環節。PGC-1α、NRF-1、TFAM是線粒體生物合成的3個關鍵蛋白，PGC-1α作為調控系統的中心環節，可以通過誘導NRF-1的轉錄，增加TFAM的表達，從而促進線粒體生物合成[20]。同時，上調Opa1、下調Drp1可以調控線粒體融合分裂平衡，保護線粒體形態，減少神經元凋亡[21―22]。有研究發現，激活Wnt/β-catenin通路可以促進線粒體生物合成，調節融合分裂平衡[8]。Mori等[23]研究顯示，給脂肪細胞孵育Wnt-3a可以促進PGC-1α、TFAM的表達增加；而Godoy等[24]研究發現，在海馬神經元細胞中孵育Wnt-5a可以促進線粒體先分裂后融合。以上研究均表明，Wnt信號通路和線粒體生物合成、融合與分裂及神經元關系密切。本實驗中，模型組大鼠海馬組織PGC-1α、NRF-1、TFAM、Wnt-3a、β-catenin蛋白表達水平均顯著降低，線粒體分裂蛋白Drp1、Fis1的熒光強度顯著升高，融合蛋白Mfn1、Opa1的熒光強度顯著降低。在給予腦震寧顆粒干預后，PGC-1α、NRF-1、TFAM、Wnt-3a、β-catenin蛋白表達水平均有不同程度的上升，同時Drp1、Fis1的熒光強度均顯著降低，Mfn1、Opa1的熒光強度均顯著升高?？梢娔X震寧顆粒可以通過激活Wnt/β-catenin信號通路，調控線粒體分裂融合平衡，促進生物合成，從而減少細胞凋亡，保護神經功能，改善腦震蕩的相應癥狀。

綜上所述，腦震寧顆?？梢蕴岣進CC模型大鼠的運動探索和學習記憶能力，修復神經元損傷，發揮神經保護作用；其機制可能與激活Wnt/β-catenin信號通路，維持線粒體融合分裂平衡，促進線粒體生物合成相關。后續的研究將進一步探討Wnt/β-catenin信號通路調節線粒體生物合成的具體方式和相關作用機制。