三陰性乳腺癌組織miR-495、HMGA2 表達變化及其與臨床病理特征和預后的關系

向超，李哲

1 重慶市萬州區婦幼保健院乳甲外科，重慶 404100；2 陸軍軍醫大學西南醫院江北院區乳甲外科

三陰性乳腺癌（TNBC）是一種特殊類型的乳腺癌，占所有乳腺癌的10%～20%［1］，通常發生于50 歲以下女性［2］。與其他類型乳腺癌相比，TNBC 惡性程度高，易轉移和復發，預后往往較差［3-5］。而盡早診斷并及時治療對提高TNBC 患者預后至關重要［6］。微小RNA（miRNA）是一類長度為20～25 個核苷酸的非編碼單鏈小RNA 分子，它們可通過調控靶基因的表達來參與腫瘤細胞的增殖、凋亡以及侵襲和遷移等生物學過程。miR-495 是miRNA 家族成員之一，其在胃癌、肺癌、肝癌等實體腫瘤中表達下調，發揮著類似抑癌基因的作用［7］。高遷移率族蛋白A2（HMGA2）是一種調控基因轉錄的結構性轉錄因子，也是目前研究較多的促癌基因之一，可在多種惡性腫瘤組織中高表達。有研究報道，miR-495 能夠靶向HMGA2 調控腫瘤細胞的惡性生物學行為［8-9］。但目前miR-495、HMGA2 表達與TNBC 患者臨床病理特征和預后的關系尚不完全清楚。鑒于此，本研究觀察了TNBC 組織miR-495、HMGA2 表達變化，并探討二者表達變化與患者臨床病理特征和預后的關系。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2018 年1 月—2020 年1 月重慶市萬州區婦幼保健院收治的TNBC患者83例。所有患者經術后病理檢查明確乳腺癌診斷，經免疫組化檢查，ER、PR、HER2均陰性，符合TNBC 診斷。納入標準：①符合原發性TNBC 診斷標準，單側病灶；②初診，入院前未接受任何抗腫瘤治療；③入院后接受乳腺癌根治術+腋窩淋巴結清掃術治療；④年齡＞18 歲；⑤臨床病理資料和術后隨訪資料完整。排除標準：①合并其他部位惡性腫瘤者；②既往有惡性腫瘤病史者；③男性；④妊娠期或哺乳期婦女。患者年齡32～59 歲，其中≥50 歲50 例、＜50 歲33 例；月經狀態：絕經48 例，未絕經35 例；腫瘤直徑：≥2 cm 40 例，＜2 cm 43 例；病理類型：浸潤性導管癌69 例，其他14 例；組織分化程度：中高分化41 例，低分化42 例；臨床分期：Ⅰ期45 例，Ⅱ期38 例；有淋巴結轉移30例，無淋巴結轉移53例。本研究經重慶市萬州區婦幼保健院醫學倫理委員會批準（審批編號：20170915），所有研究對象或其家屬知情同意并簽署書面知情同意書。

1.2 miR-495、HMGA2 mRNA 表達檢測 采用RT-qPCR法。將術中切除的乳腺癌組織及其配對的癌旁組織（距腫瘤組織邊緣超過2 cm 并經術后病理檢查證實為正常乳腺組織），液氮下速凍，迅速轉移至研缽中研磨成粉末。采用TRIzol 法提取組織總RNA，經超微量紫外可見分光光度計鑒定，OD260/OD280為1.8～2.1。按PrimeScriptTMRT Master Mix 說明將總RNA 逆轉錄合成為cDNA，逆轉錄條件：42 ℃15 min、85 ℃ 5 s。以cDNA 為模板，按Green?PrimeScriptTMRT-PCR Kit 說明進行PCR 擴增。引物序列由廣州銳博生物技術有限公司設計合成。引物序列：miR-495 上游引物5'-GCGAAACAAACATGGTGC-3'、下游引物5'-GCAGGGTCCGAGGTATTC-3'，內參U6 上游引物5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'、下游引物5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'；HMGA2 上游引物5'-GCCAAGAGGCAGACCTAGGAAA-3'、下游引物5'-CATGGCAATACAGAATAAGTGGTCA-3'，內參GAPDH 上游引物5'-TGTTCGTCATGGGTGTGAAC-3'、下游引物5'-ATGGCATGGACTGTGGTCAT-3'。反應體系共25 μL：cDNA 模板2 μL，上下游引物各1 μL，2 × One Step TB Green RT-PCR Buffer Ⅲ 12.5 μL，ddH2O 8.5 μL。所有操作在Applied Biosystems 7500 型熒光定量PCR 儀上完成。PCR擴增反應結束，繪制熔解曲線，收集循環閾值（CT）數。以U6 或GAPDH 為內參，采用2-ΔΔCT法計算目的基因相對表達量。

1.3 隨訪 TNBC 患者出院后通過電話或門診復查形式定期隨訪，隨訪截至2023年1月，統計患者生存情況，計算患者3年累積生存率。

1.4 統計學方法 采用SPSS22.0 統計軟件。符合正態分布的計量資料以±s表示，結果比較采用獨立樣本t檢驗。計數資料比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 乳腺癌組織與癌旁正常組織miR-495、HMGA2 mRNA表達比較 見表1。

表1 乳腺癌組織與癌旁正常組織miR-495、HMGA2 mRNA相對表達量比較（± s）

表1 乳腺癌組織與癌旁正常組織miR-495、HMGA2 mRNA相對表達量比較（± s）

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2.2 乳腺癌組織miR-495 表達與HMGA2 mRNA 表達的關系 乳腺癌組織miR-495 相對表達量與HMGA2 mRNA 相對表達量呈負相關關系（r=-0.503，P＜0.01）。

2.3 乳腺癌組織miR-495、HMGA2 mRNA 表達與臨床病理特征的關系 見表2。

表2 乳腺癌組織miR-495、HMGA2 mRNA表達與臨床病理特征的關系

2.4 乳腺癌組織miR-495、HMGA2 mRNA 表達與患者預后的關系 隨訪截至2023年1月，其間死亡17例，TNBC患者術后3年存活率為79.52%（66/83）。以乳腺癌組織miR-495、HMGA2 mRNA 相對表達量的均值為臨界值，將患者分為miR-495 高表達者44 例與低表達者39 例，HMGA2 mRNA 高表達者38 例與低表達者45例。生存分析發現，miR-495低表達者與高表達者術后3年累積生存率分別為69.2%、88.6%，miR-495低表達者術后3年累積生存率低于其高表達者（Log-rankχ2=4.780，P＜0.05）；HMGA2 mRNA低表達者與高表達者術后3年累積生存率分別為91.1%、65.8%，HMGA2 mRNA 低表達者術后3 年累積生存率高于其高表達者（Log-rankχ2=8.111，P＜0.05）。

3 討論

TNBC 是一種特殊類型的乳腺癌，占所有乳腺癌的10%～20%［1］。與其他類型乳腺癌相比，TNBC惡性程度高，早期易侵犯淋巴結和肝、肺、骨等組織或器官［10］，并且無特效治療藥物，治療后易復發，預后往往較差［3-5］。而盡早發現并采取有效治療可明顯改善預后［11］。目前，TNBC 的確切發病機制尚不完全清楚。因此，深入研究TNBC 發病的分子機制，對其早期診斷和靶向治療具有重要意義。

miRNA 是一類長度為20～25 個核苷酸的非編碼單鏈小RNA 分子，它們可通過調控靶基因的表達來參與腫瘤細胞的增殖、凋亡以及侵襲和遷移等生物學過程。miR-495 是miRNA 家族成員之一，其在胃癌、肺癌、肝癌等實體腫瘤中表達下調，發揮著類似抑癌基因的作用［7］。HMGA2是一種非組蛋白染色體蛋白，能夠通過改變DNA 的結構來調控某些基因的轉錄與表達。HMGA2 是目前研究較多的促癌基因之一，可在多種惡性腫瘤組織中高表達。在乳腺癌組織中HMGA2過表達與腫瘤侵襲、轉移和患者預后不良密切相關。有研究報道，miR-495可能通過直接或間接方式調控HMGA2表達，從而影響腫瘤細胞的惡性生物學行為［8-9］。這種復雜的調控關系使得miR-495、HMGA2成為TNBC潛在的生物標志物和治療靶點。因此，深入探索二者功能及其相互作用將有助于更好地了解TNBC 發病的分子機制并制定更有效的治療策略。本研究結果發現，乳腺癌組織miR-495 相對表達量低于癌旁正常組織，HMGA2 mRNA 相對表達量高于癌旁正常組織。結果表明，miR-495、HMGA2 可能參與TNBC 的發生、發展。有研究發現，miR-495 可通過靶向HMGA2 調控腫瘤進程［8-9］。miR-495 表達下調會導致HMGA2 過表達，而HMGA2過表達則可促進腫瘤細胞的增殖、侵襲和遷移，從而促進腫瘤的發生、發展［12-13］。此外，miR-495還可通過調節其他轉錄因子和抑癌基因的表達，參與腫瘤的發生、發展。

miR-495、HMGA2 均可通過調控與腫瘤生長和轉移相關的基因或信號通路來促進TNBC 進展。二者可能通過調控腫瘤細胞的增殖、侵襲、遷移以及血管生成等生物學過程，從而參與腫瘤的發生、發展。本研究結果顯示，miR-495、HMGA2表達變化與TNBC侵襲和轉移等臨床病理特征有關。miR-495 表達下調可導致HMGA2 過表達，而HMGA2 過表達則可促進腫瘤細胞的增殖、侵襲和遷移。本研究結果還發現，乳腺癌組織miR-495 相對表達量與HMGA2 mRNA 相對表達量呈負相關關系，提示miR-495、HMGA2 能夠負協同參與TNBC 的發生、發展。究其原因，miR-495 能夠靶向HMGA2 并抑制其表達，從而調控多個相關信號通路蛋白表達，繼而影響TNBC的發生、發展。本研究結果發現，miR-495低表達者術后3 年累積生存率低于其高表達者，HMGA2 mRNA 低表達者術后3 年累積生存率高于其高表達者。結果提示，miR-495、HMGA2 表達變化與TNBC患者預后不良有關。HMGA2是一個與細胞增殖、侵襲和遷移相關的基因，其高表達可促進TNBC 進展。miR-495 可直接靶向HMGA2 而促進其降解或抑制其翻譯，從而發揮負性調控作用。當miR-495 低表達時，其對HMGA2 的抑制作用減弱，導致HMGA2 mRNA 表達上調，從而增強腫瘤細胞的增殖、侵襲和遷移并有助于其免疫逃逸。因此，miR-495 低表達、HMGA2高表達預示著患者預后相對較差［14-15］。

綜上所述，TNBC 組織miR-495 低表達、HMGA2高表達，二者表達變化與腫瘤直徑、臨床分期、淋巴結轉移等臨床病理特征以及患者預后密切相關。