BCR-ABL 融合基因檢測在慢性粒細胞白血病診斷中的價值

郭 竑，林 江，馬吉春，劉嫣方，聞向梅，錢 軍

（江蘇大學附屬人民醫院中心實驗室，江蘇 鎮江 212000）

血液腫瘤已成為高度危及人類生命的疾病，如急/慢性淋巴細胞白血病、急/慢性髓系白血病等。其中，血液系統骨髓增殖性腫瘤（MPN）在血液系統疾病中占據較高發病比例，MPN 為造血干細胞克隆增生性疾病，根據診斷標準，粒紅巨三系呈現不同程度的增生，分為慢性粒細胞白血病、慢性中性粒細胞白血病、真性紅細胞增多癥、原發性骨髓纖維化、原發性血小板增多癥、慢性嗜酸性粒細胞白血病、肥大細胞增生癥和無法分類的MPN[1]，而臨床上以慢性粒細胞白血?。–ML）、真性紅細胞增多癥（PV）和原發性血小板增多癥（ET）居多，本研究針對這三種類型的MPN 進行研究。其中，CML為起源于多能干細胞的惡性克隆增殖性疾病[2]。通過對BCR-ABL融合基因進行定量檢測，實現對CML 各個病程（慢性期、加速期與急變期）的監測，使BCR-ABL融合基因成為一個有價值的指標，為進一步臨床用藥提供指導依據[3]。

1 資料與方法

1.1 研究對象

收集2016 年1 月至2022 年6 月期間，江蘇大學附屬人民醫院的96 例MPN 患者標本。其中，包含59 例CML患者（初發30例，加速期和急變期11例，緩解18例），37 例非CML 骨髓增殖性腫瘤患者（PV16 例和ET21 例），所有患者均已確診。本研究經江蘇大學附屬人民醫院倫理委員會批準?；颊咭话阗Y料見表1。

表1 CML（除緩解患者）與非CML 患者性別及年齡參數

1.2 方法

1.2.1BCR-ABL定量檢測

進行BCR-ABL融合基因定量檢測，留取骨髓或者外周血（5 mL），應用實時熒光定量PCR 方法，試劑為上海源奇生物醫藥科技有限公司提供，儀器名稱和型號為ABI 7500。

1.2.2 統計學處理

統計學處理和圖形分析采用Graphpad Prism 7.00 和SPSS 24.0。組間分類變量的差異采用Fisher's 確切檢驗和卡方檢驗；組間連續變量的差異則采用Mann-Whitney U 檢驗。以P＜0.05（雙側分布）為差異具統計學意義。

2 結果

2.1 CML 初發患者與非CML 的MPN 患者對比

在CML 初發患者中，BCR-ABL融合基因水平均值為167.93%，結果均為陽性；而非CML 的MPN 患者其BCR-ABL融合基因均為陰性。

2.2 比較CML 患者各個病程中BCR-ABL 融合基因的水平

30 例初發CML 患者，與11 例加速期和急變期的患者的標本進行BCR-ABL融合基因水平及臨床參數的比較（見表2），結果顯示在白細胞計數、血紅蛋白含量和血小板計數中，CML 初發患者與加速期和急變期的患者間差異具統計學意義，P值分別為0.046、0.039 和0.001（見圖1、圖2 和圖3），而BCR-ABL融合基因水平差異無統計學意義。結果表明當病程發生進展，處于加速期與急變期時，患者BCR-ABL融合基因水平增高，但與未治療的初發患者水平無明顯差異。

圖1 CML 初發患者和加速期與急變期患者的白細胞計數

圖2 CML 初發患者和加速期與急變期患者的血紅蛋白含量

圖3 CML 初發患者和加速期與急變期患者的血小板計數

表2 CML 初發患者與加速期和急變期患者BCR-ABL 融合基因水平及臨床參數

2.3 CML 初發與緩解后患者BCR-ABL 融合基因水平的變化

分別檢測18 組CML 初發與緩解后患者的BCR-ABL融合基因水平（見表3），結果表明差異具有統計學意義（P＜0.0001），證實BCR-ABL融合基因水平對于疾病的診斷及監測是一個較好指標，見圖4。

圖4 CML 患者中初發患者及緩解后患者的BCR-ABL 融合基因相對含量

表3 18 組CML 初發與緩解后患者的BCR-ABL 融合基因相對含量水平

3 討論

MPN 在臨床上常見類型為CML、PV 及ET，PV 和ET 治療的主要目的是預防血栓出血并發癥。對其早期診斷，可將疾病控制在低風險層，有效阻止疾病進程。Tefferi A 等人證實在PV 和ET 患者的血栓形成風險分層中，骨髓雖有不同程度增生，但均不出現BCR-ABL融合基因改變[4]。Lu T 等人證實酪氨酸激酶由BCR-ABL融合蛋白激活，是CML 驅動因子，其陽性見于大多數CML患者中[5]。因此本研究通過對BCR-ABL融合基因的檢測，證實了該基因在PV及ET增生性疾病中其水平均為陰性，提高了MPN 診斷率。

CML 常伴有染色體t（9；22）易位[6]。在起病初期，部分Ph 染色體發生隱匿性易位，約5%的Ph 染色體出現陰性狀態[7]，而BCR-ABL融合基因檢測靈敏度高于染色體，因此其在CML 的發病機制中起著重要作用。這種異常信號的激活，導致細胞不受控制增殖，如果未實施有效干預，病程將從慢性期向加速期與急變期發展[8]。

本研究結果表明，在CML 患者中，隨著病程發展，經治療緩解后，BCR-ABL融合基因水平明顯下調，而病程處于加速期與急變期時，其水平又明顯增高，與未治療的初發患者水平相當。Zhang XS 等人也得出同樣的結論[9]。診斷明確后及時進行靶向藥物治療，使用酪氨酸激酶抑制劑（TKI）治療CML，是現代靶向治療的規范用藥。重要的是，通過對BCR-ABL融合基因水平進行監測，來評估治療有效性和量化，是目前監測CML 的主要決定因素[10]。部分患者經靶向藥物治療后BCR-ABL融合基因水平明顯下調，經TKI 治療，CML 的患者進展到加速期或急變期的百分比從每年20%以上降至1%至1.5%[11]，國際血液骨髓移植研究中心同樣建議使用實時定量聚合酶鏈反應定期監測BCR-ABL融合基因水平，對CML 病程監測及用藥是一個較好的診療指標[12]。

BCR-ABL融合基因可以對MPN 類型做鑒別診斷，并對CML 病程進行監測，是一個有價值的指標，可為進一步臨床用藥提供指導依據。