2型糖尿病患者外周血miR-223與2型糖尿病周圍神經病變相關性分析

徐成高 羅麗君

糖尿病周圍神經病變作常見的糖尿病慢性并發癥，約50%的2型糖尿病患者最終合并周圍神經病變，常表現為感覺異常、肢體遠端麻木刺痛等，早期及時診治預后較好，晚期導致難逆的神經損傷，對身心健康及生活質量有較大影響。因而，早期診斷治療對糖尿病周圍神經病變預后具有重要意義。微小RNA（miRNA）是一類內源性非編碼RNA分子。miR-223已被證實參與多種病理過程括癌癥、心力衰竭、癡呆和肝病等［1-2］。有研究［3］發現糖尿病視網膜患者的血清及房水中miR-223-3p表達較非糖尿病患者增加，且隨著視網膜病變的進展，其水平逐步升高。本研究探討血清miR-223與2型糖尿病周圍神經病變的相關性，為糖尿病周圍神經病變診治提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2020年12月至2022年5月嘉興市第一醫院2型糖尿病患者138例。2型糖尿病診斷參照1999年WHO發布的標準。糖尿病周圍神經病變的診斷依據：①糖尿病病史診斷明確；②神經病變在糖尿病同時或之后出現；③具有神經病變的癥狀（麻痛、感覺異常等），5項檢查（振動覺、踝反射、壓力覺、溫度覺、針刺痛覺）有1項異常，若無癥狀，5項檢查有2項異常也可診斷；④除外其他神經病變。納入標準：①年齡18～70歲；②確診為2型糖尿病。排除合并心肺、血液、腫瘤慢性炎癥性疾病。根據有無周圍神經病變將患者分為2組：2型糖尿病組77例；2型糖尿病伴周圍神經病變組61例；本研究經本院倫理委員會批準。

1.2 方法 （1）收集基線資料：包括年齡、性別、病程、收縮壓、體質量、身高等。體質量指數（BMI）=體質量（kg）/身高（m）2。（2）相關實驗室指標測定：所有患者均空腹抽取靜脈血，全自動生化儀電化學發光法測定總膽固醇（TC）、肌酐、尿酸。化學發光法測定空腹胰島素、維生素D，高壓液相色譜法檢測糖化血紅蛋白（HbA1c）。留取晨尿通過免疫投射比濁法檢測尿微量白蛋白/肌酐（UACR）。胰島素抵抗指數（HOMAIR）=胰島素（mIU/L）×葡萄糖（mmol/L）/22.5。所有患者行肌電圖檢查。（3）miR-223及血清腫瘤壞死因子α（TNF-α）的測定：收集患者血液標本，離心10 min（3,000 r/min）分離取上清液，于-80℃冰箱保存。采用trizol 提取miRNA，采用Platinum? Taq DNA Polymerase-PCR Kit檢測血清miR-223水平。反應體系20μL，反應條件：95℃ 5 s；60℃ 40 s；共40個循環。每份樣品設3個重復，取平均值。采用2-△△CT法分析miR-223的相對表達量。收集患者血液標本，離心10 min（3,000 r/min）分離取上清，于-80℃冰箱保存。采用酶聯免疫吸附方法（ELISA）檢測血清TNF-α（深圳欣博盛生物科技有限公司）的表達水平。

1.3 統計學方法 采用SPSS統計軟件。符合正態分布計量資料以（±s）表示，用t檢驗；偏態分布計量資料用M（Q1，Q3）表示，用秩和檢驗；計數資料用χ2檢驗。Logistic回歸分析各指標與糖尿病周圍神經病變的相關性，應用受試者操作特征曲線（ROC）分析miR-223對2型糖尿病伴周圍神經病變的預測價值。以P＜0.05 有統計學差異。

2 結果

2.1 兩組基線資料、實驗室指標及血清生物標記物比較 2型糖尿病伴周圍神經病變組年齡、病程、UACR、TNF-α及miR-223高于2型糖尿病組，HOMA-IR低于2型糖尿病組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1-3。

表1 兩組性別、吸煙、病程、年齡及BMI比較

表2 兩組收縮壓、肌酐、尿酸、維生素D及UACR比較

表3 兩組TC、HbA1C、HOMA-IR、TNF-α及miR-223比較

2.2 糖尿病伴周圍神經病變的影響因素 糖尿病病程、性別、miR-223、TNF-α為周圍神經病變的獨立相關因素（P＜0.05）。見表4。

表4 糖尿病周圍神經病變影響因素的Logistic回歸分析

2.3 miR-223對2型糖尿病周圍神經病變的預測價值分析 miR-223預測發生糖尿病周圍神經病變的ROC曲線下面積為0.722±0.045，其預測糖尿病周圍神經病變的敏感度67.2%，特異度76.7%（95%CI：0.634～0.809，P＜0.05），聯合糖尿病病程后ROC曲線下面積為0.819±0.035，預測糖尿病周圍神經病變的敏感度73.8%，特異度77.9%（95%CI：0.750～0.889，P＜0.05）。見圖1。

圖1 miR-223對糖尿病患者發生周圍神經病變的預測價值

3 討論

目前糖尿病周圍神經病變發病機制尚未清楚，可能與高血糖、血脂代謝紊亂及異常的胰島素信號通路等引發系列的病理生理改變有關，這些病理變化包括糖酵解途徑異常、多元醇途徑異常、炎癥信號通路增加及炎癥因子水平升高等［4-5］。miRNA作為非編碼RNA其主要通過作用于mRNA，抑制基因表達發揮作用。近些年，較多研究表明，糖尿病及其并發癥發生發展中有miRNA參與。基礎試驗中發現在高糖處理的心肌細胞中miR-223高表達，抑制miR-223可減輕糖尿病心肌病大鼠的心肌纖維化、NLRP3炎癥性小體的激活和心肌細胞凋亡［6］。LI等［7］發現在糖尿病患者、糖尿病小鼠的胰島中以及高糖處理的β細胞中miR-223表達上調，糖尿病條件下miR-223水平的升高可能保護2型糖尿病的代償機制，因miR-223可以增加功能β細胞質量，以應對肥胖、2型糖尿病條件下不斷增加的胰島素需求。HANEKLAUS等［8］報道在流感或乙型肝炎感染以及炎癥性腸病、2型糖尿病、白血病和淋巴瘤中，miR-223的表達控制被解除，雖然這也可能是疾病本身的結果，但較多研究表明，miR-223在控制炎癥防止感染期引起的附帶損傷和防止致癌髓系轉化方面發揮作用，NF-kb和NLRP3炎癥小體是重要的炎癥機制中的因子，其可被miR-223抑制，在WAN等［9］研究中發現miR-223靶向NLRP3下調caspase-1、IL-1β和IL-18等炎癥或凋亡過程。另有研究發現血清和齦溝液中miR-223和miR-200b的水平在糖尿病患者及合并牙周病患者較健康對照組升高，并與TNF-a正相關，IL-10負相關［10］。

本研究顯示，糖尿病神經病變組miR-223水平高于2型糖尿病組。進一步通過多因素Logistic回歸相關分析，miR-223對糖尿病周圍神經病變的影響獨立于病程、年齡及性別之外。ROC曲線分析，應用miR-223預測糖尿病周圍神經病變，其敏感度、特異度較高，尤其聯合糖尿病病程時可作為診斷糖尿病周圍神經病變的標志物。綜上所述，2型糖尿病周圍神經病變患者血清miR-223升高，與TNF-α正相關，miR-223可能成為診斷早期糖尿病周圍神經病變的血清標志物。